同型半胱氨酸的测定及应用
【关键词】 同型半胱氨酸 测定方法 应用
Detection and Application of Homocysteine
Key words:Homocysteine; Detecting method; Application
近10年来,对同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy) 的研究取得了很大的进展，研究表明Hcy是一种被认为与心血管、糖尿病、肾脏等疾病有密切关系的指标，并认为与传统的指标相比，Hcy具有更高的临床应用价值。
1 Hcy理化性质
Hcy是一种含硫基的氨基酸,是胱硫醚和蛋氨酸转硫化或甲基化代谢旁路中形成的中间产物。是蛋白质生物合成过程中没被正常利用的一种氨基酸前体。Hcy在人体内主要有两种代谢过程，即再甲基化过程和转硫基过程。再甲基化过程：Hcy可以再甲基化重新形成蛋氨酸而参加蛋氨酸循环,此过程需维生素B12、甲基转移酶、亚甲基四氢叶酸还原酶、叶酸、甜菜碱及胆碱。转硫基过程：Hcy和丝氨酸在胱硫醚合成酶作用下生成胱硫醚,再在胱硫醚酶作用下形成半胱氨酸,然后分解为丙酮酸、硫酸和水。在此过程中,β-胱硫醚合成酶和胱硫酸酶的活性都依赖于维生素B6。
2 Hcy的测定方法及评价
目前,实验室常用测定Hcy的方法有:同位素法、色谱法(HPLC及GC?MS)、免疫测定等方法。
2.1 同位素法
由Refsum等［1］1985年建立，该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。
2.2 色谱法
Stabler［1］1987年首先报道了气相色谱—质谱法测定同型半胱氨酸，郭健等［2］对HPIC法进行了方法学的评价,此法检测Hcy最低浓度为1 μmol/ L,Hcy 浓度在6 μmol/L～160 μmol/L范围内有良好的线性结果；孟昭亨等［3］利用HPIC柱前衍生化法测定Hcy的最小检出量为0.125 μmol/L,批内差异为CV<2.62%,批间差异为4.37%,回收率为101.89%。这些都说明色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。现公认其为测定血浆Hcy浓度的首选方法,但因色谱方法(HPLC及GC?MS)需要的设备复杂且昂贵,难以适合常规临床化学实验室应用。
2.3 免疫测定方法
该法应用特异性的抗S?腺苷同型半胱氨酸单克隆技术，采用荧光偏振法(FPIA)或酶联免疫方法(ELISA)测定Hcy。美国拜尔公司的ACS：180 SE免疫发光仪则采用直接竞争化学发光免疫法测定Hcy，其原理是血浆的血清中的Hcy被还原试剂还原为游离的Hcy，游离的Hcy又被酶试剂作用转变为S腺苷同型半胱（SAH），血清中的SAH和磁颗粒中的SAH竞争标记Y啶酯的AB结合，自动执行分析程序。免疫测定方法的优点是此方法快捷、操作简单、自动化程度高，可减少人为误差，具有良好的准确度与精密度且可测定大量标本，适合大多数临床实验室应用。
3 Hcy测定的临床应用
3.1 心脑血管疾病
Welch等［6］认为Hcy与低密度脂蛋白(LDL)反应经吞噬细胞吞噬，细胞“破碎”沉积于血管壁，通过一系列反应并有副产物氧化放出，损伤血管壁后，平滑肌细胞分裂修补造成“瘢痕”。Dr.McDonnel指出Hcy改变凝血因子水平，造成血小板聚集在血管壁的粥样硬化处等等。临床上，在跟踪5年近1 500个高Hcy的男性中发现，排除其他因素后，其心脏病的概率增加3倍［7］。每增加5 μmol/L Hcy浓度与胆固醇升高0.5 mmol/L一样，对冠状动脉疾病发生具有相同的危险性，中年男性局部缺血性心脏疾病机会增加1/3［8］。许多研究表明高Hcy血症与颈动脉粥样硬化相关，随着颈动脉硬化、狭窄的加重，血清Hcy水平随之升高，且男性的水平高于女性，这可能与雌激素对Hcy代谢的影响以及男性肌肉容量比女性大有关［9］。在评价和预测颈动脉粥样硬化程度时，血清Hcy水平测定敏感性及可信度均高于其他血脂检查项目。
3.2 Alzheimer老年痴呆病（AD）
自1907年描述AD来，有 关其病理和病因还不清楚。AD患者脑脊液中维生素B12浓度较其他类型的痴呆患者低，Jooston等研究发现AD患者的Hcy水平和甲基丙二酸（维生素B12减乏的标志）较非痴呆患者高。高Hcy血症可能是继ApoE4之后的另一个增加血管疾病和AD危险性的生物因子。
3.3 叶酸缺陷
血浆Hcy在叶酸缺乏患者中明显增高。Hcy是甲硫氨酸代谢的中间产物，其形成必须有β?胱硫醚合成酶和N5，N10?亚甲基四氢叶酸还原酶以及维生素辅助因子（叶酸、维生素B12、维生素B6）的作用。因此，影响血浆Hcy水平最主要的因素是遗传性β?胱硫醚合成酶和N5，N10?亚甲基四氢叶酸还原酶的基因突变和叶酸、维生素B12、维生素B6缺乏。血浆Hcy浓度和血浆叶酸浓度呈负相关，血浆Hcy检测对叶酸缺陷的指导作用可以弥补常用实验项目的不足。Semen等［10］提出Hcy>14 μmol/L时，应该用叶酸、维生素B12、维生素B6。许多学者认为提高叶酸、维生素B12、维生素B6的浓度，在较短时间内就可有效地使Hcy水平降低。
3.4 脂代谢的影响
Hcy在血浆中能自我氧化，形成半胱氨酸混合二硫物，其与LDL发生聚集，产生活性氧（包括超氧化物、过氧化物等），促进泡沫细胞形成;与此同时活性氧，尤其是过氧化氢与自由基一起促进LDL氧化，促进血管平滑肌细胞增殖和引起血管内皮细胞损伤，最终导致动脉粥样硬化［11］。
近年来的研究表明，Hcy除与血管疾病有关外，还与神经管畸形、先兆子痫、帕金森病、胎儿生长缓慢、慢性肾功能衰竭等多种疾病及某些药物、肿瘤的影响有关。
综上所述，Hcy作为独立的心血管风险指标已被广泛接受，是高血脂、吸烟、糖尿病之外的又一危险因子。尽管许多有关高Hcy血症的生物化学基础有待明确，其检测与各种疾病的关系和治疗检测将需进一步探讨，虽然使用叶酸、维生素B12、维生素B6后可降低其体内浓度，但并非用于治疗。目前，血浆Hcy的测定主要采用HPLC方法，由于时间和价格因素，仅在大或检验中心应用。随着临床的需要，荧光偏振免疫法测定Hcy将迅速发展起来，AXSYM全自动免疫分析仪配套使用的Hcy试剂已经通过美国FDA认可，Hcy的测定对预防和治疗心血管疾病有重要的临床意义。
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