干化学检测乙醇抗脂浊干扰性能评价

【摘要】  目的：初步评价干化学乙醇脱氢酶法检测血液乙醇浓度（BAC）抗脂浊干扰能力。方法：用VITROS 250测定76例严重脂浊标本超高速离心前后BAC结果，并测定高、低临界浓度乙醇的不同脂浊度的自制溶液乙醇结果。结果：脂浊标本超高速离心前后BAC测定结果差异无显著性（P>0.05）。不同TG浓度下，乙醇(ALC)测定结果差异不大，ALC与TG无相关性（r为0.13和0.09）。结论：标本脂浊对干化学法测定乙醇无明显影响。 
【关键词】  血液乙醇浓度 脂浊 干化学 酒后驾车
    乙醇（alcohol, ALC）是影响中枢神经系统的一种麻醉药物，饮用过量后会削弱人从事精细工作的能力，如驾驶车辆。酒后驾车（drive under the influence of alcohol , DUI）是引起事故的重要原因之一，交警处理事故时，常要求对驾驶员进行血液乙醇浓度（blood alcohol concentration, BAC）检测。浙江省规定酒后驾车和醉酒驾车BAC界值为0.2 mg/ml和0.8 mg/ml。由于国人饮酒时多伴高脂饮食，加上标本采集随时性，举证标本常有不同程度的脂性浑浊。我们采用VITROS 250干化学乙醇脱氢酶法测定血液中乙醇浓度，对其抗脂浊干扰能力进行了初步评价。
　　1  材料与方法
　　1.1  仪器试剂 
　　强生VITROS 250干化学分析仪及原装ALC干片（LOT：55160014）。试剂经calibrator kit8（LOT：0875）定标及liquid performance verifierⅠ、Ⅱ (LOT：A6259 、B6260)确认成功。日立7600?020生化分析仪，TG试剂由北京利德曼公司提供。
　　1.2  乙醇测定原理 
　　VITROS ALC试剂是一种干燥、多涂层的化学干片。将10 μl样品滴于干片上，经BaSO4扩散层渗入试剂层，在pH 8.75 TRIS缓冲系统中与乙醇脱氢酶及NAD+辅酶反应，37℃温育5 min后，干片反射光在340 nm测量，根据仪器响应值与定标软件自带的“终点比色法”数学模型即可确定样品ALC浓度。
　　1.3  研究对象 
　　2006年4月至2007年5月期间由交警带至我院采血的驾驶员340例，男性323例，女性17例，年龄22岁～54岁。经碘伏消毒皮肤，采取静脉血5 ml于真空试管。凝固后3 000 rpm离心5 min～10 min，吸取血清立即上机测定BAC，并用带盖离心管保存于-20℃冰箱。外观明显浑浊标本加测TG，并经恒温超高速离心机12 000 rpm离心10 min，弃去上层乳糜漂浮物，取中层血清再测BAC。
　　1.4  模拟含ALC脂浊溶液的制备 
 
　　取100 ml容量瓶，加超纯水定容，再加入50 μl无水ALC，充分混匀配成ALC 4.0 mg/ml高值标准液。再用超纯水稀释成ALC 1.0 mg/ml低值标准液。先将脂肪乳剂用超纯水稀释成TG约30 mmol/L的浑浊溶液。 再将此液用超纯水按1∶0，1∶0.5，1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶3，1∶4，1∶5稀释。将高、低值ALC标准液分别与稀释好的脂肪乳以1∶4混合，以超纯水代脂肪乳作对照。充分混匀后测定ALC与TG浓度。
　　1.5  统计学处理
　　用SPSS 11.5软件对实验结果进行统计学分析。
　　2  结果
　　2.1  340例标本测定BAC结果
　　BAC=0.498±1.24，其中BAC（0.2～0.79）mg/ml 102例,占30%；BAC>0.80 mg/ml 58例，占17%；BAC最高值3.1 mg/ml。
　　
　　2.2  340例标本中外观明显脂浊标本204例，占60%；其中TG>10 mmol/L 76例，占22.4%； TG最高值22.5 mmol/L。
　　2.3  76例严重脂浊标本经超高速离心前后BAC结果
　　离心前BAC=0.62±0.98，离心后BAC=0.61±0.95；经配对t检验，P>0.05,表明离心前后BAC测定结果差异无显著性。
　　2.4  不同TG浓度下高低值ALC脂浊溶液ALC结果
　　见表1。表1  不同TG浓度下两种标准品（略）
   
　　两组ALC结果分别与TG进行相关性分析，相关系数r分别为0.13和0.09，表明ALC测定结果与TG无相关性。
　　3  讨论
    血清脂浊主要是由悬浮在标本中的极低密度脂蛋白（VLDL）引起的，一般在餐后1 h～2 h达到高峰。本文分析的340例血清标本中，60%伴脂性浑浊。可见脂浊现象在酒后驾车举证所提取的样本中较为常见。脂浊对生化反应的干扰主要有两方面：一是改变被测物质在血清中的分布，二是脂浊引起入射光的散射而影响比色结果。目前临床湿式生化检验中，常用双波长、双试剂法或设置标本空白来消除脂浊干扰，而这些方法在VITROS干化学检测系统较难实现。另外如有机溶剂抽提、超滤和高速离心等预处理程序由于操作繁琐也已较少使用。
    VITROS干化学分析仪采用多层薄膜技术，ALC干片最上面一层是BaSO4扩散层，起到类似分子筛功能，能将大部分脂肪颗粒阻隔使其无法渗入试剂层。相当于测定前自动对脂浊标本进行了超滤预处理，将干扰减至最低。本文分析了76例严重脂浊标本，经超高速离心处理前后BAC结果无明显差异，因此可以认为脂浊对测定结果无显著影响，ALC干片试剂有良好的抗脂浊干扰能力。在含高、低临界浓度乙醇的自制脂浊溶液检测中，虽然ALC测定结果与TG无相关性，但当TG>12 mmol/L时,ALC有偏高的趋势,可能有小部分脂肪颗粒渗入试剂层影响反射光检测。因此，临床检验中遇到严重脂浊且BAC在0.2 mg/ml或0.8 mg/ml临界范围的标本时，最好经超高速离心处理后再检测，以保证检验结果的准确。
 
【】
  　　［1］张红霞,张先国.我国酒后驾车BAC标准及检测程序等问题的探讨［J］.司法鉴定,2004,2:36?38.

　　［2］黄瑞勋,黄慧萍.应用EP10?A文件对乙醇测定方法的初步评价［J］.齐鲁医学检验,2005,16(5):16?17.

　　［3］徐晓杰,胡云良,丁红香.总蛋白干化学法测定消除脂浊的干扰［J］.温州医学院学报,2004,2(1):65?66.