HBV?DNA与乙肝两对半检测结果的相关性探讨
【摘要】 目的：探讨HBV?DNA的检出情况与乙肝两对半结果之间的关系。方法：运用荧光定量PCR（FQ?PCR）检测307例疑似乙肝患者血清中的HBV?DNA，同时运用ELISA方法进行两对半指标的检测，并对结果进行相关性探讨。结果：HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组（大三阳组）患者血清HBV?DNA检出率为98.8%（84/85），平均拷贝数为1.82E+07/ml；HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组（小三阳组）患者血清HBV?DNA检出率为64.6%（53/82），平均拷贝数为1.82E+04/ml；HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV?DNA检出率为63.6%（7/11），平均拷贝数为7.94E+04/ml。结论：血清HBV?DNA水平与HBV M表现模式有关，HBsAg（+）/HBeAg（+）/HBcAb（+）的标本HBV?DHA值显著高于HBsAg（+）/HBeAb（+）/HBcAb（+）的标本和HBsAg（+）/HBcAb（+）的标本，提示HBsAg与HBeAg的存在影响HBV?DNA水平。FQ?PCR能实现准确定量，可以检测HBV的真实感染和复制情况，对于乙型肝炎的临床诊断、方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。
【关键词】 肝炎病毒；乙型；DNA；定量PCR
乙型肝炎病毒(HBV)感染是影响我国人民健康最重要的传染病之一，现我国约有1.2亿人口为HBV携带者［1］，HBV感染所致的慢性乙型肝炎病程迁延，有进一步为肝硬化或肝功能衰竭的可能，甚至于发展成肝癌，因此对HBV的检测是较为关注的课题。我们采用荧光定量聚合酶链反应方法检测了211份临床血清标本，并同时采用酶联免疫吸附测定（ELISA）进行对照检测，报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 211份临床血清标本来自2006年1月至2007年1月到我科作乙型肝炎血清标志检测者标本，根据其HBV M表现模式分为9组，所有标本均为随机抽样。
1.1.2 仪器 德国罗氏公司Light Cycler荧光定量PCR仪。
1.1.3 HBV?DNA定量检测试剂盒 深圳匹基生物工程技术股份有限公司出品。
1.1.4 HBV?ELISA检测试剂盒 厦门新创生物工程有限公司出品。
1.2 方法
1.2.1 HBV?DNA定量检测 采用德国罗氏公司Light Cycler荧光定量PCR仪及深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBV?DNA荧光定量检测试剂盒进行HBV?DNA定量检测，严格按照仪器及试剂盒说明书操作。
1.2.2 HBV M检测 采用ELISA方法检测，严格按照试剂盒说明书操作。
1.2.3 定量结果统计方法 定量结果采用求对数平均值的方法HBV?DNA的平均拷贝数，遇有阴性结果，不参与平均值的统计。统计学方法采用配对t检验。
2 结果
2.1 PCR检测HBV?DNA定量结果 见表1。
表1 各HBV M表现模式及FQ?PCR检测其HBV?DNA定量结果（略）
注：遇有阴性结果，不参与平均值的统计。
2.2 常见HBV M表现模式其HBV?DNA检测结果的比较 见表2。
表2 HBV标志物不同模式HBV?DNA检测结果（略）
与模式1相比P值2 P＜0.013 P＜0.01
3 讨论
FQ?PCR是进行临床基因诊断的有效手段，它采用了完全闭管检测，不需要PCR后处理，避免了交叉感染；同时采用实时检测技术，所得Ct值和原始模板数量完全呈线形相关，定量准确率极高［2］，它不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点［3］。ELISA法检测乙肝两对半是临床诊断HBV感染的传统手段，它检测的是人体对HBV的免疫反应状态，而FQ?PCR则可以准确的反应出HBV?DNA的复制水平、病程变化和恢复情况等。本文结果显示，85例大三阳组中，其HBV?DNA阳性84例，检出率达98.8%，而且呈较高的拷贝量，经统计学处理大三阳组和HBsAg(+)HBcAb(+)组及小三阳组差异有显著性，说明这些患者HBV具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。通过采用荧光定量聚合酶链反应检测，我们可以发现1组与2组(P＜0.01)，及1组与3组(P＜0.01)，2组与3组(P＜0.05)相比差异有显著性，从而可知HBV?DNA的水平与HBeAg的存在有显著的关系，与HBsAg的存在也有明显的关系，说明HBeAg和HBsAg的存在一定程度上能反应HBV的复制程度。5组HBcAb单一阳性的标本其HBV?DNA定量检测值虽然为阴性，但国内学者证明［4］，单纯HBcAb阳性者中，在排除假阳性后，确存部分为HBV低水平复制，而因为本实验所收集的相关标本少，可能影响结果的真实性。6组也检测出HBV?DNA，提示血中存在中等水平的HBV复制，说明未检出HBsAg，有HBsAb、HBcAb的出现并不能全部提示是既往HBV感染。8组中在HBeAb、HBcAb的存在下也可检测出HBV?DNA，可说明HBeAb的出现也不能表示HBV复制的停止。HBV M各种表现形式均可能存在不同程度的HBV复制，但因时间短，有些表现形式(如：单一HBsAg阳性和单一HBcAb阳性)标本收集得不够多，从而可能导致有些表现模式的检出率低。综上所述，本研究结果表明，FQ?PCR与ELISA两种方法检测HBV感染与复制，多种血清学标志物模式都有一定的HBV?DNA检出率，由于DNA阳性表示HBV在体内复制，如果仅以HBV M的检测结果作为判断HBV?DNA感染、传染性以及HBV是否在体内复制有一定的局限性，因此，为临床提供HBV感染、复制及传染性判断以及指导治疗和观察疗效，我们应选择乙肝两对半标志物并同时做HBV?DNA的荧光定量PCR检测。
【】
［1］ 叶任高．内［M］．北京：人民卫生出版社，2001：453?456．
［2］ 程刚,何蕴韶,周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒［J］.中华医学检验杂志,1999,22(3):135.
［3］ 彭文伟.病毒性肝炎研究［M］.广州:广东科技出版社,1998：3.
［4］ 张树林．乙型肝炎血清标志意义再认识［J］．国外医学流行病传染病分册，1993，2：57?61，4.
