BacT／Alert240全自动血培养系统血培养6 950例结果分析

【关键词】  血培养

　　［关键词］ 血培养；病原微生物；败血症；检出时间　　

　　［摘  要］ 目的：评价全自动血培养系统(BacT／Alert　240)的临床应用情况。方法：回顾性分析了用BacT／Alert 240全自动血培养系统检测6 950份血标本，对检出阳性的时间、细菌种类和阳性率进行了评估分析。结果：6 950份血标本中分离出28属，56种，共1 098株病原微生物，阳性率为15．8％，其中革兰阳性细菌占65．8％，革兰阴性细菌占27．7％，真菌占6．5％。最快阳性检出时间为2 h，24 h内检出的阳性数占63．2％，48 h检出的阳性数占84．7％，72 h检出的阳性数占95．8％。假阳性率为1．1％，假阴性率为0．2％。结论：应用BacT／Alert240全自动血培养系统提高了血培养的阳性率，缩短了阳性检出时间，检出细菌种类多，尤其是营养条件高的苛养菌阳性率增加，而且操作简便，结果快速、准确。

　　　　Analysis of 6 950 Blood Samples Results for BacT／Alert 240 Automated Blood Culture System

　　　Abstracts:Objective To evaluatethe clinical application of BacT／Alert 240 automated blood culture system．Methods A total of 6 950 blood samples were detected by BacT／Alert 240 automated blood culture system．Positive rate，time to positive，the types of microorganisms recovered were analyzed retrospectively．Results 1 098 stratus were isolated from 6 950 blood samples，28 genera and 56 species were obtained．Positive rate was 15．8％．Grampositive microorganisms accounted for 65．8％ of the positive blood culture results，Gramnegative microorganisms accounted for 27．7％ and fungi for 6．5％．The shortest time to posie was 2 h．The cumulative positive rate was 63．2％ within 24 h，84．7％ within 48 h and 95．8％ within 72 h．False positive rate was 1．1％，and false negatwe rate was 0．2％．Conclusion The positive detection rate has been raised，the detection time to positive reduced，the type of microorganisms increased including fastidous bacteria by using BacT／Alert 240 automated blood culture system．

　　Key words:Blood culture；Microorganism；Septicemia; Time to positive

    利用血培养检出病原菌是菌血症、败血症及很多传染病诊断中必不可少的依据，明确病原菌，对临床针对性抗菌至关重要，可以有效地降低病死率，提高治愈率。随着机技术的，血液培养方法已由过去的手工、半自动发展到现在的全自动仪器检测，不仅提高了阳性率，也大大缩短了检测时间，而且操作简便，结果快速、准确。现就我院2003年8月至2005年8月采用第三代全自动血培养系统BacT／Alert 240检测6 950例临床血液标本的结果作一分析，并对检出阳性时间、细菌检出种类及阳性率进行了临床评价，现将结果报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本来源与采集 

　　6 950份血液培养标本均来自2003年8月至2005年8月本院急诊、门诊及各病区发热或有全身感染症状的患者(以住院病人为主)。用一次性注射器无菌采集血标本(成人5 ml~10 ml，儿童2 ml~5 ml)，尽可能在患者出现临床症状如寒颤、高热时以及在抗生素治疗前抽血，快速注入BacT／Alert 240相应配套需氧或厌氧血培养瓶中，混匀后立即送检。

　　1.2  仪器和试剂 

　　BacT／Alert 240全自动血培养系统及配套血培养瓶，购自欧加隆公司。Vitek32全自动微生物分析系统及鉴定卡、药敏卡为法国生物梅里埃公司产品。GBBl6CO2培养箱为Hereaus有限公司产品。常规细菌分离鉴定培养基为本室自制。均按规定方法和要求在有效期内使用。

　　1.3  方法 

　　按BacT／Alert240全自动血培养系统操作程序上机培养监测，温度恒定在35．5 ℃，阴性培养时间定为7 d。该仪器每10 min自动监测1次，以连续恒温振荡方式培养且采用封闭非侵入性监测方法，主要原理是微生物生长产生的CO2能通过薄膜渗透到特殊的NovelCO2感应器，使pH发生改变，感应器的颜色由原来的绿色变为黄色。

　　1.3．1  阳性培养瓶的处理 

　　仪器指示阳性时，自动报警，立即转种血琼脂平板、巧克力琼脂平板、麦康凯平板和沙保弱琼脂，前两种平板置5％~8％CO2培养，麦康凯平板置普通孵箱35 ℃培养，沙保弱琼脂置30 ℃孵箱培养，24 h后观察结果。每一阳性培养瓶必须做涂片、革兰染色镜检并做直接药敏试验，将涂片结果通知临床作为血液培养的一级报告。培养次日将直接药敏报告通知临床医生作为二级报告。从平板分离出的纯菌落用Vitek32全自动微生物分析系统进行菌种鉴定和药敏试验，发出最终血液培养报告。如果仪器指示阳性，而普通细菌培养、微需氧培养及厌氧菌培养均无菌生长且涂片、革兰染色镜检未查见病原微生物，则为假阳性。

　　1.3．2  阴性培养瓶的处理 

　　经仪器培养监测7 d显示阴性者，按常规步骤卸瓶，同时实验室在第6天盲目转种培养，转种方法同上，同时涂片、革兰染色镜检均为阴性时，发出阴性报告，但如果盲种和涂片均发现细菌生长，鉴定后发出阳性报告，此为仪器漏检的阳性标本，即假阴性。

　　2  结果

　　2.1  阳性率及检出阳性时间 

　　本室在使用欧加隆公司BacT／Alert 240全自动血培养系统及专用瓶培养的6 950份血液标本(2003年8月至2005年8月，以住院病人为主)，检出28属，56种，共1 098株病原菌，阳性率为15．8％。最快阳性检出时间2 h(大肠埃希菌)，24 h内检出694株，占63．2％，48 h内检出930株，占84．7％，72 h内检出1 052株，占95．8％，各属菌检出情况见表1。

　　2.2  检出菌株种类 

　　BacT／Alert 240系统检出细菌种类多，革兰阳性细菌722株，占65．8％，葡萄球菌属590株(53．7％)；革兰阴性细菌304株，占27．7％，肠杆菌科细菌204株(18．6％)，非发酵菌92株(8．4％)；真菌72株(占6．5％)。肺炎链球菌、草绿色链球菌、流感嗜血杆菌等苛养细菌感染样本，均获得阳性结果，结果见表2。另外，血液培养阳性分布最高病区主要是重症监护病房、肿瘤科及血液病病区，其次是新生儿病房、儿内科及老年病区等。

　　2.3  阳性结果报告方式 

　　以微生物所生长的CO2累积的方式报告阳性最高，占82．5％；以单位时间内CO2产生速度方式报告(细菌在对数生长期被检出)占12．8％；以变化阈值方式报告(血培养瓶在放入仪器检测前细菌生长已超过阳性阈值)占4．7％。

　　2.4  假阴性率 

　　在5 852份BacT／Alert 240系统检测为阴性者中，经盲传分离出12株菌，其中分别是草绿色链球菌1株，流感嗜血杆菌1株，热带念株菌3株，近平滑念株菌2株，新型隐球菌1株，铜绿假单胞菌3株，鲍曼不动杆菌1株，假阴性率为0．2％。

　　2.5  假阳性率 

　　在检测6 950份血标本中，有1 098份阳性，其中12份仪器显示阳性，经涂片、革兰染色镜检未找到细菌及真菌，分别转种相应培养基做普通细菌培养、需氧菌及厌氧菌培养均无菌生长，假阳性率为1．1％。假阳性结果在各种疾病中的分布，以白血病致假阳性的比例最高，其次为严重感染、恶性肿瘤、糖尿病、甲状腺功能亢进等。表1  1 098株病原菌不同检测时间其阳性株的分布情况(略)表2  6 950份血培养检出1 098株病原菌种类分布及构成（略）

　　3  讨论

　　BacT／Alert 240全自动血培养系统集培养、监测于一体，完全排除了人为干预，且为非介入性检测，减少了污染机会，可随时发现阳性结果，为快速检出血中病原菌奠定了基础。实验结果表明BacT／Alert 240全自动血培养系统检出阳性时间快，24 h内检出阳性数占63．2％，48 h内检出阳性数占84．7％，72 h内检出的占95．8％，阳性检出最早时间2 h，与国内报道的BacT／Alert系统检测细菌最快时间相符［1］，对临床及时较早地提供了有力依据。从出现阳性结果时间来看，细菌检出时间与细菌种类有关，不同种属细菌检出时间有一定差异，肠杆菌科细菌最快，48 h内检出的阳性数占97．5％；其次是葡萄球菌属和链、肠球菌属，48 h内分别占91．2％和86．4％;最慢是非发酵菌和真菌，48 h内分别占70．6％和11．2％。从报告方式看，以微生物所产生CO2累积方式所占比例最高。

　　从病原菌分布构成比看，本院血培养以革兰阳性细菌感染居多，占65．8％，革兰阴性细菌占27．7％，与国内报道基本一致［3］。本组革兰阳性球菌呈上升趋势，其中凝固酶阴性葡萄球菌如表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、模仿葡萄球菌等及链球菌如草绿色链球菌、肺炎链球菌都增加，而革兰阴性杆菌的感染明显下降，以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主，其次为铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌。另外，真菌的检出有上升趋势，统计本组真菌败血症占分离菌种的6．5％，也是当今各国关注的问题，此应引起临床重视，严格控制滥用抗生素。本组血培养阳性以住院患者为主，多见老年、小儿、肿瘤、外科大手术等免疫功能低下病例，多在原发病的基础上引起继发感染及菌血症、败血症，也是当前败血症特点之一。

　　血液培养基营养成分的优劣直接与血培养检出细菌种类及阳性率有关。使用BacT／Alert 240全自动血培养系统，共检出28属，56种，共1 098株病原菌，培养出了以前少见的营养要求高的细菌，尤其是链球菌、肠球菌分离率较高，其他菌检出阳性率也有所提高，说明该仪器及所用培养基对营养需求高或生长缓慢的细菌检出率比较高。

　　BacT／Alert 240系统除检出率高、时间快外，血培养瓶上还有条形码，扫描后放入仪器指定位置即刻开始监测，操作简便，不易出错，可对病人资料自动归档，而且方便结果查询及对病人的血培养情况随时进行观察。它由视窗式观察结果，设有生长曲线动态，菌种分析，标本来源报告率，病房报告率等多种方式，从而有利于感染监测的分析。同时，它的内存功能大，便于查找原有资料并设有错误信息追踪等优点。

　　BacT／Alert 240全自动血培养系统每10 min检测瓶底颜色的变化，以测定CO2的绝对浓度及每一时间间隔的加速度，当CO2绝对浓度达到3 300反射光度或加速度达到32反射光度／10 min，系统判为阳性。血培养假阳性的原因分析，血液中的白细胞数过高：5例白血病和2例严重感染患者血液中白细胞数都>10×109／L，分析其原因可能是标本中全血白细胞过高可释放一定量的CO2使pH改变导致假阳性；其他原因：可能与抽血量>12 ml，从而导致瓶内过多的白细胞富集；或者因为温度不稳定引起假阳性，其中3份可能是由于停电所致，说明停电是引起假阳性的原因之一，也可能培养基从冰箱中取出立即抽血等原因触发系统假阳性报告。假阴性的原因分析，真菌感染：其原因是因为真菌对糖的代谢能力远低于普通细菌，在代谢过程中CO2的产生能力很低，最终导致假阴性结果。非发酵菌感染：铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌属于非发酵菌，不能发酵葡萄糖，只能氧化葡萄糖产酸，因此非发酵菌产酸产气量比发酵菌产酸产气量低，CO2产量很低，从而引发假阴性；也可能与抽血后培养瓶放入仪器前置室温或普通孵箱中过久有关［2］。苛养菌感染：包括链球菌和流感嗜血杆菌等，此类细菌在培养过程中，生长缓慢，代谢能力极低，导致培养瓶中各项指标变化都低于仪器的检测范围，引起仪器出现假阴性结果。

　　由此可见，在使用BacT／Alert 240全自动血培养系统进行血液培养时，血培养瓶应在有效期内使用；严格按规定量抽血，及时送检，及时转种阳性标本；坚持同时做需氧瓶和厌氧瓶双份培养；另外在自动化系统提示阴性后进行盲传是必须的，鉴于该系统对真菌生长的检出能力有局限性，建议在盲传时，增加沙保弱等真菌专用培养基，以减少部分真菌漏检。而流感嗜血杆菌是在接种巧克力平板上生长的，因此在使用广谱抗生素、激素等情况下个别菌株仍有必要同时接种专用培养基，以防漏检。对营养要求苛刻、生长缓慢的微生物，应延长培养2周~4周，然后转种特殊的培养基。对于夜班及周末长假期间送检的血培养瓶，通常放置35 ℃以利细菌生长，希望进入系统后尽快检出阳性培养瓶，但进入系统前必须转种培养，以防止非发酵菌的漏检［2］。另外如采血量不足、采集血培养份数不足、采血时间不合适等原因，都可降低血培养的阳性率。我们要注意上述的各个方面，提高血培养细菌的阳性检出率，以防漏检。就血培养而言，假阴性结果比假阳性结果对病人来说，危害似乎更大，它会直接影响患者的诊断和治疗。血培养分离出的类白喉杆菌群、微球菌属、痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌等多属于皮肤寄生菌，要及时与临床联系，确定是污染菌或致病菌。对血培养仪报警阳性，革兰染色阴性的培养物，要改变染色方法，如抗酸染色、2％碳酸复红染色、吖啶橙染色、更换特殊的培养基或培养方法可能发现不常见菌［4］。

　　本室采取给临床早期预报告等措施，为临床治疗争取宝贵时间，微生物实验室应强调与临床共同全程质控的必要性，这有助于临床医师有目的地治疗，减少并发症、医院感染，缩短住院时间，提高治愈率。通过本组研究，说明了近年来我院患者血培养菌群的变迁，条件致病菌明显升高，提示临床应高度重视，建议临床医生把血液培养作为易感患者的检查常规。另外，微生物实验室应充分利用现有的自动化血培养仪快速可靠的优点，进一步改善实验条件，努力提高血培养阳性率，更好地协助临床进行合理有效的抗菌治疗。

　　文献：

　　［1］濮跃晨，鲁怀伟，李华，等．全自动血培养系统检测730份需氧血培养结果分析［J］．上海医学检验杂志，2000，1(3)：168．

　　［2］刘宏，李成荣，陈宏础．全自动血培养仪的质量控制［J］．重庆医科大学学报，2002，27：166170．

　　［3］蒋燕群，卫国，倪语星，等．应用全自动血培养仪提高血液、无菌体液培养阳性率［J］．中华医学检验杂志，1999，6：71．

　　［4］徐英春，倪语星，王金良．血培养操作规范［M］．上海：上海技术出版社，2002：2128．

　　［5］李超，周铁丽，林晓梅，等．MiniVITAL全自动血培养仪假阳性／假阴性结果分析［J］．检验医学，2004，19(2)：119121．

　　［6］肖柯玲．BacT／Alert120全自动血培养仪检测结果分析［J］．广东医学，2001，22(2)：153154．