肾病综合征儿童淋巴细胞表型及细胞因子的变化分析

【关键词】  肾病综合征

　　摘要: 目的:通过对原发性肾病综合征(PNS)儿童外周血T淋巴细胞表型及细胞因子（白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α）监测，探讨不同患病时期PNS儿童T淋巴细胞表型及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化的临床意义。方法：选取我院儿科门诊及住院诊断为PNS患儿共40例，年龄在2～15岁，分活动期组及缓解期组，活动期及缓解期各检测一次。对照组为经过体格检查为正常健康儿童，年龄在2～14岁，共20例。流式细胞仪检测淋巴细胞表型CD3、CD4、CD8的阳性细胞百分率；酶联免疫技术对细胞因子（IL-6、TNF-α）监测，组间进行比较t检验。结果：活动期与缓解期、对照组比较，CD4细胞数量明显降低(P<0.01)，CD8细胞数量明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)，IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.01)。缓解期IL-6与对照组比较显著性(Ｐ<0.01)。结论：PNS患儿免疫功能明显下降,免疫的辅助功能降低，CD4、CD8、IL-6、TNF-α含量变化可作为判断PNS患儿病变活动或缓解和估计预后及效果的一项指标。

　　关键词: T淋巴细胞表型；IL-6；TNF-α；                                         PNS

　　The Variety Analysis of T-lymphocyte Type and Cell Factor of Nephropathy Syndrome Child

　　　Abstract:Objective：examineing the outer blood T-lymphocyte type and cell factor(interleukin 6,tumor necrosis factor)  of  the primordial nephropathy syndrome(PNS) infant,to study the clinic meaning when T-lymphocyte type and interleukin 6(IL-6),tumor necrosis factor(TNF-a)  change  of the different sicken period children.Method： 40 PNS children in the policlinic and be in hospital,age 2～15 years,were selected and  divided into active period group and alleviative period group, examine T-lymphocyte type and cell factor once in different period.The normal group were composed of 20 healthy children checked in the policlinic,age 2～14 years. Use the cell hydro-apparatus examine the masculine percent of T-lymphocyte type CD3、CD4、CD8 cell, ELISA  (enzyme linked immunosorbant assay)to examine cell factor,and compared different group with t-test. Result: Compare the normal group、 active period group and alleviative period group,CD4 cell  amount obviously depress (P<0.01),CD8 cell amount obviously raise(P<0.01),CD4/CD8 ratio obviously depress (P<0.01), IL-6、TNF-αcontent obviously raise(P<0.01),. IL-6 be markedly raise compared the normal group to alleviative period group(Ｐ<0.01). Conclusion: PNS child immunity function obviously depress, immunity assistant function also depress. The  content change of CD4、CD8、IL-6、TNF-α should be a referenced index to estimate the PNS clinic period and prognosis or cure effect.
　　
　　Key words：T-lymphocyte type;IL-6；TNF-α；PNS
                                                                                 
　　肾病综合征(NS)是儿童泌尿系统病中发病率比较高的一种疾病，它的发病、治疗及预后与淋巴细胞及细胞因子有直接的联系 。因此，对PNS患儿活动期和缓解期体外T淋巴细胞亚型（CD3、CD4、CD8）及细胞因子中的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行检测，探讨淋巴细胞及细胞因子变化的在PNS中的临床意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 研究对象：我院儿科门诊及住院诊断为原发性肾病综合征(PNS)患儿共40例，年龄在2～14岁，分活动期组及缓解期组，活动期及缓解期各检测一次。对照组为经过体格检查为正常健康儿童，年龄在2～13岁，共20例。

　　1.2 淋巴细胞表型分析方法：分析方法参照陈英玉等的方法进行［1,2］。专用试管，每一管加经肝素(0.5ml)抗凝的静脉新鲜血3.0ml，用BPS 1：4稀释待用，每支离心管加淋巴细胞分离液2.0ml，处理标本3.0ml，1800～2000r/min离心20min。吸淋巴细胞层于另一管，用BPS冲洗三次，制淋巴细胞悬液2ml。取500μl的血细胞悬液，标记单抗（FITC-CD3、FITC-CD4、PE-CD8美国试剂），染色15min，溶解红细胞后上机。每份样本测定2min，淋巴细胞表面分化抗原CD3、CD4、CD8的总数、阳性细胞数和阳性细胞的百分数。缓解期依上述方法。

　　1.3 细胞因子测定：血IL-6、TNF-α含量测定采用酶联免疫法(ELISA法)(IL-6、TNF-α美国试剂),所有患儿均清晨空腹静脉血，分离血清在-20℃以下储存以备统一检测。缓解期依上述方法留取标本检测。

　　1.4 统计学处理：阳性细胞的统计用百分数表示，数据用均数±标准差表示,组间比较用t检验。

　　2 结果

　　PNS活动期与缓解期、对照组比较，CD4细胞数量明显降低(P<0.01)，CD8细胞数量明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)，IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.01)。缓解期IL-6与对照组比较显著性(Ｐ<0.01)，检测结果见表1：

　　表1 血T淋巴细胞亚型阳性细胞及细胞因子的变化比较　略

　　3 讨 论

　　小儿原发性肾病综合征的发病及病情的进展、预后与T淋巴细胞及细胞因子的异常有着密切的关系、两者的失衡导致免疫系统功能的混乱。在细胞免疫方面，T淋巴细胞亚群在细胞免疫中起非常重要作用，是机体的重要效应细胞［3］，研究结果表明，PNS活动期的CD4细胞数量明显地低于对照组(P<0.01)，CD8细胞数量比对照组明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值比对照组儿童显著降低(P<0.01)，说明PNS活动期患儿免疫功能明显下降；其免疫的辅助功能降低，变态反应减弱导致的免疫损伤的发生，表现为CD4/CD8比值降低。PNS缓解期与对照组比较没有显著性（P>0.05）,说明PNS效果良好，患儿免疫细胞功能有所改善，免疫力不断增强，对病情的预后有一定的帮助。通过探讨T淋巴细胞亚群在其中的异常分布，对该病的病情预后，疗效判定有一定的价值；提示可以通过改善细胞免疫来影响该病的进程。

　　在细胞因子作用方面，IL-6和TNF-α在PNS的发病中同时起着重要的作用。研究结果表明，PNS活动期的IL-6和TNF-α的水平显著高于对照组，IL-6水平升高尤为明显, 说明PNS发病机制中有多种细胞因子参与，IL-6是重要的炎症因子。缓解期IL-6的水平仍高于对照组,显示体内免疫细胞的活化仍存在,产生各种炎性因子与自身抗体继续在起作用,与病情的慢性迁延、复发有一定的关系。TNF-α水平与对照组差别无显著意义。因此对IL-6和TNF-α的检测，有助于监测肾小球疾病急性期或进展期［4］。IL-6和TNF-α作为一种重要的炎症介质，它们之间的作用主要通过诱导、促进、刺激等发挥作用，作用于肾小球，促进肾小球系膜的增生及系膜基质的生成，导致肾小球硬化发生和系膜细胞的增殖与硬化。 在治疗上，可通过测量细胞因子的变化,间接反应淋巴细胞亚群的变化［5］。PNS患儿IL-6和TNF-α升高和细胞免疫功能异常有关,它们的浓度变化可作为PNS活动、疗效的指标。

　　参考：

　　［1］陈英玉，马树俊，刘白，等．FITC 直标单抗及应用［Ｊ］．免疫学杂志，1993，9(1):封3．

　　［2］陈英玉，马树俊，刘白，等．PHA对人扁桃体T细胞CD4和CD8抗原复合物表达的研究［Ｊ］.免疫学杂志，1993，9(13)：160．

　　［3］王国保,张训.原发性肾病综合征的治疗［Ｊ］.实用内科杂志,1998，18(6):324．

　　［4］田巍,陈香美.ＩＬ 8及其与肾脏疾病关系的研究现状［Ｊ］.国外医学泌尿系统分册,1997,17(6):281-284.

　　［5］Mosmann TR, Sad S.The expanding universe of T cell subsets:Th1,Th2 and more［Ｊ］.Immunol today ,1996,13(3):138-146.