不同方法分离人脐血造血细胞的比较研究

【摘要】  　　目的：比较不同方法分离人脐血造血细胞的回收率。方法：分别用甲基纤维素、明胶、羟乙基淀粉、红细胞裂解液分离脐血造血细胞，有核细胞回收率。Giemsa染色计算单个核细胞百分率。结果：4种方法分离后回收率分别为66.13%、74.91%、66.13%、62.90%。结论：4种方法效果均较好，其中以明胶分离效果最佳。

【关键词】  人脐血造血细胞 甲基纤维素 红细胞裂解液 明胶 分离

　　脐血中含有丰富的造血干细胞，是在造血干细胞移植中除骨髓、外周血外理想的造血干细胞来源。脐血采集方便，来源丰富。研究表明，脐血单个核细胞扩增后，细胞免疫活性仍低于成人外周血［1］。我们采用不同方法分离脐血造血细胞并比较其回收率，以期找到最佳的分离造血细胞的方法。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  血样来源于长春市妇产。要求：无急、慢性感染及血液系统疾病，非高危妊娠产妇，足月顺产。脐血采集后，4℃保存，不超过24 h。甲基纤维素、明胶Sigma分离。羟乙基淀粉Sigma原装进口。

　　1.2  方法  (1)6份脐血平均血量70～80 mL。取脐血40 mL，平均分成4等份，每份10 mL。计算总有核细胞(TNC)数。(2)取1份10 mL脐血加入40 mL红细胞裂解液(本室自制)，室温放置10 min，1 000 r/min,离心10 min，去上清，再加入红细胞裂解液离心，去上清。生理盐水洗1遍。(3)余下3份脐血均加入等量生理盐水稀释后，分别加入2 mL 1%甲基纤维素、20 mL 3%明胶、3 mL 6%羟乙基淀粉(均经37℃预热)，充分混匀，室温沉降30～45 min，吸出上部血浆层，生理盐水洗1遍。(4)上述获得的细胞计数后涂片，室温干燥，Giemsa染色，计算单个核细胞百分率。有核细胞回收率＝分离后有核细胞数/分离前有核细胞数×100%；单个核细胞百分率＝分离后单个核细胞数/分离后有核细胞数×100%。

　　2  结果

　　2.1  各种不同方法分离脐血造血细胞后有核细胞回收率比较  见表1。

　　2.2  结果  有核细胞回收后单个核细胞百分率均在90%左右，4种方法无显著差别。

　　表1  不同分离脐血造血细胞后有核细胞数（略）

　　3  讨论
    　　
　　随着人类造血细胞培养技术的建立，70年代发现，与骨髓相比，脐血中有较多含量的更原始、能重建长期造血的干/祖细胞，具有更强的增殖分化能力。90年代初用脐血代替骨骼作为造血干细胞移植取得成功，使脐血干细胞移植的研究与应用进入一个新阶段。而应用脐血的重要基础手段是脐血中造血干细胞的分离浓集。分离脐血细胞的方法很多［2］，有报道采用羟乙基淀粉2次沉淀法分离脐血造血细胞，回收率高、操作简便、污染机会少［3?4］。我们采用4种不同方法分离脐血造血细胞均获得较好的分离效果。

【】
  　　［1］邱莲女,周永列,夏小华,等.人脐血造血细胞扩增后表面标志的动态研究［J］.中华血液学杂志,2000,21(8):409.

　　［2］龚守良.实用基础医学实验技术［M］.长春:吉林技术出版社,1991:83?86.

　　［3］张洪泉,傅增矩,沈柏均,等.脐血造血细胞的分离与保存［J］.中华血液学杂志,1992,13(4):182?183.

　　［4］马 庆.人脐血中造血细胞的分离、浓缩和保存［J］.输血杂志,2000,13(2):91?92.