研究不同剂量的杜仲提取物水溶液对小鼠亚慢性毒性作用

【关键词】  杜仲；,,亚慢性毒性
　　摘要：目的研究不同剂量的杜仲提取物水溶液对小鼠亚慢性毒性作用，为临床应用提供依据。方法给实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液。在实验中、末期停药后24 h，分别取血测定血液学、血液生化和主要脏器指标，并作病理切片。结果灌胃中、低剂量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液，能够提高小鼠血红蛋白含量和红细胞数（P＜0.01），对白细胞分类计数无影响，同时能够提高小鼠体重、总蛋白及白蛋白含量（P＜0.01），对脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾、性器官指数及血清酶活性无影响（P＞0.05）。结论杜仲提取物对受试动物未见有明显毒性作用。
　　关键词：杜仲；  亚慢性毒性
　　我国对杜仲（Eucommia ulmoides）的利用悠久，近几年我国学者在杜仲的生物学、化学成分、生理生化等方面做了许多研究，已知杜仲的化学成分主要有：（1）木脂素类；（2）环烯醚萜类；（3）酚类化合物等，唐建军［1］、李家实等［2］认为，杜仲中有效成分对动物血压有双向调节功能。唐建军等［1］报道：杜仲含有丰富的VE和 β-胡萝卜素，有延缓衰老、增强机体免疫体力作用。为了更好地开发利用杜仲，我们探索了张家界产杜仲提取物（以下简称杜仲提取物）对动物亚慢性毒性作用，并为临床应用提供一定的理论依据。
　　1  材料
　　1.1  药品与动物杜仲提取物：主要成分：80%氯原酸，由张家界恒兴生物科技公司提供。昆明种小鼠，雌雄各半，体重（20±2）g，8周龄，购于湖南中医学院实验动物中心，批号：990218。
　　1.2  仪器ES-C300A天平，湘仪天平仪器厂。MD-100自动生化分析仪器仪。美国 Leyte Drive Torranle化学仪器公司生产。
　　2  方法与结果
　　2.1  小鼠最大耐受量采用最大给药量［3］法，在预试基础上，取小鼠100只，雌雄各半，体重（20±2）g，随机分成5组，分次灌服不同剂量杜仲提取物水溶液0.5 ml/次，观察7 d内动物死亡数，同时观察动物一般状况及活动情况。结果见表1。动物在7 d内均无异常反应，考虑到杜仲的浓度以及小鼠的灌胃容积都已达到最大，因此，杜仲提取物的小鼠灌胃最大给药量应大于18.52 g/kg。按小鼠的平均体重为20 g，成人平均体重60 kg，成人每日用量6~9 g［4］，小鼠的最大耐受倍数=18.52×60/9=124（倍），故认为本药具有较大的安全性。
　　2.2  杜仲提取物对小鼠的亚慢性毒性实验［5，6］取健康小鼠80只，体重为（20±2） g，雌雄各半，分笼颗粒饲料喂养，将小鼠随机分为3个剂量组6.17，2.06，0.69 g/kg和1个对照组（生理盐水）。各组分别以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，连续8周，每周停药2 d，期间每周称重，并根据体重调整药量。同时观察动物的一般体征。实验中、末期停药后24 h，测定血液学指标 Hb，RBC，WBC和白细胞分类计数（DC）及血液生化指标（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），两次采血后分两批处死动物，对（心、肝、脾、肺、肾、性腺）主要脏器计算脏器重量系数，并做病理切片检查。
　　表1  小鼠灌胃给药最大耐受量（MTD）的测定(略)
　　2.2.1  杜仲提取物对小鼠体重的影响结果由表2可看出，各组小鼠在第4，8周时，中、低剂量组（2.06，0.69 g/kg）与对照组差异极显著（P＜0.01），出现明显的增重。第8周时，高剂量组与对照组差异不显著（P＞0.05）。
　　2.2.2  小鼠血液学指标的变化结果见表3。由表3可知，实验第4，8周时，浓度为2.06，0.69 g/kg杜仲的提取物能够显著提高小鼠的Hb含量及RBC（P＜0.01）。在6.17 g/kg的浓度水平下，第4周杜仲提取物显著提高小鼠的 Hb含量及RBC（P＜0.05），第8周与对照组比较无显著差异（P＞0.05）；实验组N，L，E，M计数与对照组比较均差异不显著（P＞0.05）。
[NextPage]
　　2.2.3  杜仲提取物对小鼠血液生化指标的影响结果见表4。由表4可知，第4，8周，中、低剂量组TP、ALB含量均极显著的高于对照组（P＜0.01）。TP含量高剂量组第4周高于对照组（P＜0.05），第8周则无差异显著性（P＞0.05）；ALB含量第4周与对照组比较差异不显著（P＞0.05）；第8周低于对照组（P＜0.05）；G的含量第4周高剂量组和第8周各组高于对照组（P＜0.05）；BUN含量高剂量组与对照组相比差异显著（P＜0.05），中、低剂量组与对照组无显著差异（P＞0.05）。
　　表2  小鼠平均体重变化(略)
　　每组均与对照组比较，*表示5%的显著水平，**表示1%的极显著水平（下同）
　　表3  小鼠血液学指标(略)
　　动物数上排为给药后4周，下排为第8周停药后2 d（下同）
　　表4  小鼠血液生化指标(略)
　　2.2.4  杜仲提取物对小鼠主要脏器的影响由表5可知，各实验组脏器指数与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。
　　表5  小鼠主要器官指数(略)
　　2.2.5  杜仲提取物对小鼠病理组织形态学的观察实验中、末期分别对小鼠进行剖检，观察各组织器官未见明显的眼观病理变化，对各组脏器进行镜检，均未见有意义的病理组织学改变。
　　3  讨论
　　通过MTD实验观察，小鼠精神状态良好，无死亡发生，给药后的第8天处死动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均无异常发生，说明小鼠对杜仲提取物MTD应大于18.52 g/kg，相当于体重为60 kg的成人用量（6~9 g）的124倍。根椐有关资料［7］，中药的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上为安全，故认为本品具有很大的安全性。对小鼠体重检测表明：中、低剂量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液能极显著提高小鼠的体重（P＜0.01），高浓度的杜仲提取物长时间饲喂小鼠无增重作用。王介庆等［8］用杜仲活性成分提取液对肉鸡增重实验中也有增重，本研究结果证实了这一点。血液学指标检测表明：中、低剂量杜仲提取物水溶液能极显著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P＜0.01）。高剂量（6.17 g/kg）的杜仲提取物水溶液在第4周时显著提高小鼠的红细胞数、血红蛋白含量（P＜0.05），第8周时则无此作用。杜仲提取物对小鼠WBC及WBC的分类计数无明显影响。血液生化检测结果表明：中、低剂量杜仲提取物水溶液能极显著提高TP，ALB的含量，对血清酶AST，ALT的活性无明显影响，这说明机体的新陈代谢加强，对养分的利用率升高，从而促进了小鼠的生长。高剂量杜仲提取物水溶液在第4周时能提高TP，ALB含量，第8周时则无此作用，但却提高了AST，ALT的活性，结合有关资料［9］，推测高剂量的杜仲提取物有可能影响了肝脏的功能，从而使机体的养分利用降低。BUN的含量在杜仲提取物浓度为2.06，0.69 g/kg时无显著性差异，在高剂量作用下，明显升高，推测高剂量时有可能使肾机能受到影响。实验期对ALP及GLu的含量无明显影响，说明6.17 g/kg剂量以下的杜仲提取物对ALP及GLu无影响。脏器指数检测结果表明：本品对脾脏、肺脏、心脏、肾脏、性器官指数无明显影响，说明杜仲提取物在6.17 g/kg剂量水平以下，不损害以上脏器。以上实验结果可知，张家界产杜仲提取物对受试动物无明显毒性作用。
　　：
　　［1］  唐建军，张禄源，何鸣筱，等.杜仲的研究与应用进展［J］.植物学通报，1998，（15）6：47.
　　［2］  李家实，阎玉凝.杜仲皮与杜仲叶化学成分初步研究［J］.中药通报，1986，11（8）：41.
　　［3］  中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南（药学、药、毒性学分册）［M］.1994：205.
　　［4］  国家药典委员会.药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2000：131.
　　［5］  陈  奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：113.
　　［6］  张  铣，刘毓谷.毒理学［M］.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1997：230.
　　［7］  秦伯益.新药评价概论，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1998：154.
　　［8］  王介庆，王洪斌，朱鉴生.杜仲活性成分提取液在家禽生产中的应用［J］.中国家禽，1999，21（6）：29.
　　［9］  陈  龙，高  伟，王怡丰等.CCL4诱发肝损伤过程中血液细胞免疫功能的变化［J］.环境与健康杂志，2001，18（2）：83.