氢溴酸后马托品原位凝胶刺激性和药效学研究
作者：姜新东，王强，王彤，孙柏旺
【摘要】 目的：研究氢溴酸后马托品原位凝胶的眼刺激性和药效作用。方法：18只家兔被随机分为两组，分别进行眼刺激性试验和药效学研究。每组再分成氢溴酸后马托品原位凝胶组、氢溴酸后马托品滴眼液组和生理盐水对照组3个亚组，裂隙灯显微镜观察眼局部反应情况，斜视尺测量不同时间点瞳孔直径。结果：氢溴酸后马托品原位凝胶多次给药后，裂隙灯显微镜观察家兔眼角膜无混浊，虹膜和结膜未见红肿、充血、肿胀等异常现象。组织病检查显示，家兔眼给药后，与生理盐水组相比，给药组组织病理学改变无明显差异。药效学结果显示，氢溴酸后马托品原位凝胶散瞳时间长达8 h。结论：氢溴酸后马托品原位凝胶是安全的，并能够有效地延长药物释放时间。
【关键词】 原位凝胶； 刺激性； 氢溴酸后马托品； 药效学
近年来，随着生物药剂学的和眼部用药后药物动力学研究的深入，发现溶液剂存在滞留时间短、生物利用度低等问题［1］，如滴眼剂滴入眼内后，由于眼睑的眨动和泪液的分泌，只有1%～10%的药物透过角膜到达眼内发挥作用，需要增加给药次数来提高生物利用度。而使用眼用制剂时，药物会通过鼻泪管进入鼻腔和消化道最终被全身吸收，所以简单通过增加给药次数来提高生物利用度，容易诱发不良反应和有引发毒性反应的风险。眼膏剂通常以凡士林作为基质制成，油腻感强，使用后视力模糊。眼用凝胶剂是以亲水性聚合物为载体，有较好的生物相容性，为半固体状态，可延长药物的作用时间，减少给药次数，但给药剂量不易控制。
眼用原位凝胶不同于传统的亲水凝胶，它根据体内外不同的生理环境(温度、离子、pH)［2?4］发生相转化，体外以液体形式存在，滴入眼内立刻转为凝胶。此类剂型有一定新颖性，在贮存期间呈液态，滴入眼内后呈半固体状态，不仅可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好的铺展性、剂量不易控制的问题，具有很大的应用和发展前景。
氢溴酸后马托品为抗胆碱药，具有阻断乙酰胆碱的作用，使瞳孔括约肌和睫状肌麻痹引起散瞳和调节麻痹，比阿托品效力快而弱，散瞳后易恢复，实验过程的观察简单方便。本研究以氢溴酸后马托品作为模型药，对氢溴酸后马托品原位凝胶进行刺激性和药效学研究。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
氢溴酸后马托品原料药(Acros试剂公司)，氢溴酸后马托品滴眼液(自制对照品)，结冷胶（药用级，浙江天伟生化工程公司），丙三醇(分析纯，南京化学试剂一厂)，尼泊金乙酯(广州化学试剂有限公司)，斜视尺（宁波医用缝针厂），裂隙灯显微镜（苏州六六视觉科技股份有限公司）。
1.2 动物
家兔18只，体重（2.0±0.2）kg，无眼疾，东南大学医学院动物实验中心提供。
1.3 方法
1.3.1 氢溴酸后马托品原位凝胶的制备
1.3.1.1 处方 氢溴酸后马托品原料药1.0 g，结冷胶0.5 g，丙三醇2.4 g，尼泊金乙酯0.03 g，加超纯水定容至100 ml。
1.3.1.2 制备 精密称取处方量的结冷胶和尼泊金乙酯溶于约70 ml的超纯水中，在90 ℃下搅拌20 min使其溶解，冷却后加入处方量的氢溴酸后马托品、甘油，搅拌溶解，用超纯水定容至100 ml，然后0.45 μm微孔滤膜过滤即得。另外称取氢溴酸后马托品原料药1.0 g，用超纯水配制成100 ml，即为1%氢溴酸后马托品滴眼液［5］，当作实验阳性对照。
1.3.2 氢溴酸后马托品眼用原位凝胶多次给药对眼刺激性实验［6］
1.3.2.1 实验方法 取家兔9只，雌雄兼用，试验前24 h内对每只动物的双眼进行检查，选择无眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的家兔，随机分为氢溴酸后马托品眼用原位凝胶组、氢溴酸后马托品滴眼液组和生理盐水组3组。每次于结膜囊内滴入50 μl试液，然后使家兔眼睛被动闭合8～10 s，每日给药两次，连续给药7 d。并于每日给药前及最后一次给药后在裂隙灯显微镜下观察眼的局部反应情况，按眼刺激实验评分标准对角膜、虹膜及结膜分别进行评分，算出平均分值。每只家兔眼刺激反应总积分等于每只家兔眼角膜、虹膜、结膜的刺激反应分值之和。平均分为每次观察时全部家兔眼刺激分值的平均数。然后按眼刺激反应评价标准，判断氢溴酸后马托品原位凝胶的眼刺激性。第7天观察后处死家兔，取出眼球，做角膜病理切片。
1.3.2.2 眼刺激反应评分标准 依照“中华人民共和国卫生部新药研究指导原则汇编”中的眼刺激试验评分标准进行评分。（1）角膜无混浊0分；散在弥漫性混浊，虹膜清晰可见1分；半透明区易分辨，虹膜模糊不清2分；出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强看清3分；角膜不透明，由于混浊，虹膜无法辨认4分。（2）虹膜正常0分；皱褶明显加深，充血、肿胀，角膜周围有轻度充血，瞳孔对光似有反应1分；出血，肉眼可见坏死，对光无反应(或出现其中之一反应)2分。（3）结膜：A.睑结膜、球结膜部位血管正常0分；血管充血呈鲜红色1分；血管充血呈深红色，血管不易分辨2分；弥漫性充血呈紫红色3分。B.结膜无水肿0分；轻微水肿(包括瞬膜)1分；明显水肿，伴有部分眼睑外翻2分；水肿至眼睑近半闭合3分；水肿至眼睑超过半闭合4分。C.无分泌物0分；少
量分泌物1分；分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着2分；分泌物使整个眼区潮湿或粘着3分。总积分16分。
1.3.2.3 眼刺激反应评价标准 0～3分为无刺激性；4～8分为轻度刺激性；9～12分为中度刺激性；13～16分为强度刺激性。
1.3.3 氢溴酸后马托品原位凝胶药效学研究
取家兔9只，雌雄兼用，试验前24 h内对每只动物的双眼进行检查，选择无眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的家兔，随机分为氢溴酸后马托品眼用原位凝胶组、氢溴酸后马托品滴眼液组和生理盐水组3组。
试验前测量、记录各大白兔双眼瞳孔直径，然后给药，每只眼睛给药50 μl，并记录时间，分别于给药后5、15、30、60 min和2、3、4、8、24 h记录瞳孔直径。
1.4 统计学处理
采用SPSS 13.0 统计软件包进行统计处理。
2 结 果
2.1 刺激性试验结果
氢溴酸后马托品原位凝胶多次给药后，裂隙灯显微镜观察家兔眼角膜无混浊，虹膜和结膜未见红肿、充血、肿胀等异常现象。对家兔眼角膜、虹膜、结膜刺激综合评分均为零，结果表明氢溴酸后马托品原位凝胶多次给药对兔眼无刺激性。
家兔角膜刺激试验组织病检查结果显示：给药组家兔眼角膜完整，表面由鳞状上皮覆盖，鳞状上皮无坏死脱落，无溃疡形成、鳞状上皮结缔组织结构清晰完好，未见炎症细胞浸润（见图1）。家兔眼角膜给药后，与生理盐水组相比，给药组组织病理学改变无明显差异，提示给药组对家兔眼角膜无明显刺激。
2.2 药效学研究
测量了9只健康家兔给予氢溴酸后马托品原位凝胶、氢溴酸后马托品滴眼液和生理盐水后的瞳孔大小,瞳孔平均大小随时间的变化曲线如图2。
由图2可以看出，氢溴酸后马托品原位凝胶和滴眼液组给药2 h左右散瞳效果最大，两者散瞳效果无明显统计学差异（P＞0.05）。2 h之后，氢溴酸后马托品滴眼液组散瞳效果逐渐减弱，4 h时已基本恢复正常，而氢溴酸后马托品原位凝胶组散瞳效果仍然很好，与氢溴酸后马托品滴眼液组相比有显著统计学差异(P＜0.05)。4 h之后氢溴酸后马托品原位凝胶组散瞳效果逐渐减弱，8 h时接近恢复正常。24 h时所有家兔均瞳孔恢复正常大小。原位凝胶剂型克服了滴眼液的不足，延长了药物在眼内的滞留时间，提高了生物利用度，实现了很好的缓释效果。
3 结 论
原位凝胶是以溶液状态给药后立即在用药部位发生相变，形成非化学交联的半固体制剂。原位凝胶滴眼剂以其分剂量准确、使用方便、生物利用度高、滞留时间长、有良好的控制释药性能、患者的顺应性好而成为眼用制剂研究领域的热点。本研究以氢溴酸后马托品为模型药物，对原位凝胶剂型进行安全性评价，并与滴眼液剂型进行药效学比较，结果显示，氢溴酸后马托品原位凝胶是安全的，对眼睛无刺激性，减少了给药次数，提高了病人的顺应性，而且延长了药物在眼内的滞留时间，提高了药物的生物利用度，提示眼用原位凝胶剂具有非常好的应用价值。
【】
［1］崔福德.药剂学［M］.6版.北京：人民卫生出版社，2007：104?105.
［2］SRIVIDYA B，CARDOZA R M，AMIN P D.Sustained ophthalmic delivery of ofloxacin from a pH triggered in situ gelling system［J］.J Contr Release，2001，73 (2):205?211.
［3］LIN H R，SUNG K C，VONG W J.In situ gelling of alginate/pluronic solutions for ophthalmic delivery of pilocarpine［J］.Biomacromolecules，2004，5(6):226?230.
［4］LIU Z D,LI J W,NIE S F,et al.Study of an alginate/HPMC?based in situ gelling ophthalmic delivery system for gatifloxacin［J］.Int J Pharm，2006，315(1?2):12?17.
［5］萧三贯.最新国家药用辅料标准手册［M］.北京：医药科技出版社，2006：1295?1296.
［6］王智群，孙旭光,李然，等.特比萘芬滴眼剂对兔眼刺激性的实验研究［J］.眼科,2004,13(4):225?256.
