对HPLC法测定醋酸地塞米松片的含量研究
摘要: 目的 建立HPLC法测定醋酸地塞米松片的含量。方法 采用Diamond C18色谱柱(5μm,4.6×150mm),柱温为室温,流动相:甲醇-水(70:30),流速为1ml/min ,检测波长:240nm,以峰面积。结果 线性范围4~24μg/ml。平均加样回收率为(103.2±3.2)%(n=15)。结论 本法简便、快捷、灵敏,可作为醋酸地塞米松片质量控制的有效方法。
【关键词】 HPLC 醋酸地塞米松
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for the determination of dexamethasone acetate tablets.Methods Analytical column was Diamond C18(5μm,4.6×150mm),methanol-water(70:30)was used as the mobile phase at the flow rate of 1ml/min.The detection wave length was 240nm and the peak area was calculated.Results The calibration curve was linear within the concentration range of 4~24μg/ml. The average recovery was (103.2±3.2)%(n=15).Conclusion The method was proved to be simple,rapid and accurate.
【Key words】 HPLC dexamethone acetate
醋酸地塞米松为肾上腺皮质激素类药,《药典》2000年版醋酸地塞米松片的含量测定方法为紫外分光光度法[1],此法专属性不强,选择性较差,其结果可能受到片剂中其它辅料或添加剂的影响。本文采用HPLC法测定其含量,现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(515泵;996光电二极管矩阵检测器);岛津UV-1601PC紫外分光光度计;醋酸地塞米松对照品(浙江仙琚制药股份有限公司提供,含量为99.30%,批号031008);市售醋酸地塞米松片(规格:0.75mg/片, A厂批号:030403;B厂批号:030501(B1); 030902(B2); 030502(B3);C厂批号:20021001(C1); 20030601(C2));甲醇(色谱纯,默克公司),水为二次重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Diamond C18(5μm,4.6×150mm),流动相:甲醇-水(70:30),流速:1ml/min,柱温:室温,检测波长:240nm,进样量:20μl。在该色谱条件下,醋酸地塞米松保留时间为4.95min,色谱图见图1。
2.2 溶液配制
2.2.1 对照品储备溶液的配制 精密称取醋酸地塞米松对照品约25mg,置于25ml容量瓶中,加入甲醇适量溶解,定容,摇匀,配成1mg/ml的对照品储备液。
2.2.2 标准曲线制备 分别精密吸取上述储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml,置于25ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,配成4、8、12、16、20、24μg/ml的标准溶液。取20μl进样,以醋酸地塞米松峰面积A对其浓度C进行线性回归,回归方程为C=2.3×10-5A+0.605697,r=0.9997。试验结果表明,在4~24μg/ml范围内醋酸地塞米松峰面积和浓度呈良好的线性关系。
2.2.3 供试品溶液的配制 分别取供试品20片,精密称定,研细。称取适量(相当于醋酸地塞米松3.75mg)置50ml容量瓶中,加入甲醇25ml,置50~60℃的水浴中保温10min,并不断振摇,放冷至室温,定容,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,置50ml容量瓶,加甲醇至刻度即得。吸取20μl进样,以醋酸地塞米松峰面积A代入标准曲线供试品含量。
2.3 回收率试验 精密称取已知含量的醋酸地塞米松供试品粉末适量(相当于醋酸地塞米松0.75mg),置于10ml容量瓶中,加储备液适量,加入甲醇5ml,置50~60℃的水浴中保温10min,并不断振摇,放冷至室温,定容,摇匀并过滤,精取续滤液0.8ml,置10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,用HPLC法进行测定,以实测值除以加入量计算加样回收率。平均加样回收率为(103.1±1.5)%(n=15)。
2.4 样品测定 各供试品的HPLC法测定结果见表2。参照《药典》2000版采用紫外分光光度法[1]测定各样品含量
3 讨论
《中国药典》采用紫外分光光度法测定醋酸地塞米松片的含量[1],美国药典则采用高效液相色谱法测定醋酸地塞米松片的含量。参照美国药典的方法,本实验采用HPLC法测定醋酸地塞米松片的含量,醋酸地塞米松与杂质分离良好,且平均加样回收率为(103.2±3.2)%,方法可靠。
供试品HPLC色谱图在地塞米松色谱峰前存在片剂辅料杂峰,说明辅料在240nm处存在紫外吸收,可干扰醋酸地塞米松片含量的测定,导致紫外分光光度法测得的含量偏高,与HPLC法相差达15%。用HPLC法测定三个厂家片剂含量均低于含量限度(90%~110%),而用药典方法测定的结果则均合格,由此可见,在药典方法下其含量检测合格的样品,仍有可能不合格。因此,我们认为,药典所用醋酸地塞米松片含量测定方法有待改进。本文所用HPLC法简便,快捷,灵敏,可作为醋酸地塞米松片质量控制的有效方法。
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1 中国药典编委会.中华人民共和国药典(二部),北京:化学出版社