芪冬活血饮对油酸致大鼠内皮素-1水平的影响

              作者：蔡宛如 洪辉华 骆仙芳 张弘 王新华 

【摘要】  ［目的］探讨急性肺损伤大鼠肺组织内皮素-1（ET-1）的变化及芪冬活血饮对其影响。［方法］SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组、地塞米松组及地塞米松加中药组，观察芪冬活血饮对大鼠油酸型急性肺损伤动物模型肺组织匀浆和肺泡灌洗液ET-1含量的影响。［结果］地塞米松加芪冬活血饮组ET-1含量最低，芪冬活血饮和地塞米松减少ET-1的作用相近，无统计学差异。［结论］芪冬活血饮减少ET-1的作用和地塞米松相近，并和地塞米松有明显的相加作用。

【关键词】  急性肺损伤；芪冬活血饮；内皮素-1

　　Abstract:［Objective］ To explore the change in rats’ET-1 with acute lung injury and the effect of Qidong Huoxue Decoction on it. ［Method］ Randomly divide SD rats into blank control group, model group, TCM group, DXM group and DXM+TCM group, observe the effect of Qidong Huoxue Decoction on animal model’s lung tissue homogenate and pulmonary alveoli lavage solution ET-1 with acute lung injury of rats oleic acid type.［Result］ ET-1 was the lowest in DXM+TCM group; Qidong Huoxue Decoction had similar function in reducing ET-1 with DXM, without statistical difference.［Conclusion］ Qidong Huoxue Decoction and DXM have mutual reinforcing function.

　　Key words: acute lung injury; Qidong Huoxue Decoction; ET-1

    急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）是一种呼吸系统急危重症，是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭。内皮素-1（ET-1）是ALI的发病过程重要的炎症介质，急性肺损伤时血浆和肺组织中ET-1浓度均明显升高，而应用选择性的ETB受体拮抗剂或ETA/ETB联合受体拮抗剂都有明显的作用 ［1-2］。本文采用油酸复制大鼠ALI模型,观察芪冬活血饮对大鼠油酸型ALI时肺组织和肺泡灌洗液中ET-1水平的变化,以探讨芪冬活血饮对ALI的干预作用及其机理。

　　1  材料

　　1.1  供试药品 

　　芪冬活血饮（黄芪20g、麦冬12g、虎杖20g、当归12g）药材由浙江省中中药房提供，经水煎浓缩至１g/ml装瓶低温保存。

　　1.2  主要试剂
 
　　油酸（西安杨森制药有限公司，批号：010214002）；地塞米松磷酸钠注射液（规格：5mg/支，天津药业涟水有限公司，批号：0105305）；TNF-α测定试剂盒（北京北方生物技术研究所，批号：20060220）；IL-10测定试剂盒（北京北方生物技术研究所，批号：20060220）

　　1.3  实验动物 

　　雄性Wistar大鼠，体重180～200g，由院上海实验动物中心提供。生产许可证号:SCXK(沪)2003-0003；使用许可证号：ZYXK(浙)2003-0003。

　　2  方法

　　2.1  动物模型与分组 

　　选用成年健康雄性Wistar大鼠80只，体重180～200g，随机分成5组，即空白对照组、模型组、中药组、地塞米松组及地塞米松加中药组，每组16只。采用大鼠尾静脉注射油酸建立急性肺损伤模型（0.15ml/kg）。空白对照组则以生理盐水代替油酸。中药组和中药加地塞米松组在造模前24h、12h、1h芪冬活血饮灌胃（8g/kg），地塞米松组和中药加地塞米松组在造模前1h腹腔注射地塞米松5mg/kg，各组均在造模后2h处死。每组9只开胸取左肺制备组织匀浆，右肺肺泡灌洗；每组6只，左肺称重后置80℃烤箱24h烤至恒重，取右肺制备病理切片。

　　2.2  观察指标 

　　(1)1肺组织匀浆和肺泡灌洗液液ET-1含量测定：采用放射免疫法，ET-1含量测定严格按ET-1测定试剂盒说明书操作。(2)肺系数和肺水含量测定：肺系数=肺重(g)/体重(g)×100。肺水含量=(肺湿重-肺干重) /肺湿重×100。(3)肺组织病改变：HE染色，光学显微镜观察。

　　2.3  统计方法 

　　所有数据皆以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS11.5统计软件进行数据分析，各组间比较采用单因素方差分析，P<0.05有统计学意义。

　　3  结果

　　3.1  油酸型ALI大鼠肺组织匀浆和肺泡灌洗液ET-1水平变化 

　　肺组织匀浆中空白组ET-1含量最低，和各损伤组比较均有显著的统计学差异。模型组ET-1含量最高，和各组比较有统计学差异。三个组中地塞米松加中药组含量最低，中药组含量最高，中药组和地塞米松组比较无统计学意义，和地塞米松加中药组比较有显著差异。肺泡灌洗液中空白组ET-1含量最低，和模型组、中药组比较均有统计学差异。模型组含量最高，和各组比较均有统计学差异。中药组和地塞米松组比较无统计学差异，和地塞米松加中药组比较有统计学差异；地塞米松组和地塞米松加中药组比较无统计学差异（见表1）。    表1  各组大鼠肺组织匀浆和肺泡灌洗液ET-1（略）

　　3.2  油酸型ALI大鼠肺系数和肺水含量变化 

　　肺系数：各损伤组大鼠肺系数与空白组比较明显增加，均有显著差异。模型组肺系数在各损伤组中最高，和中药治疗组比较无统计学差异，和其他各组比较有统计学意义。地塞米松组肺系数较地米加中药组高但无统计学差异，两组与中药组均比较有统计学差异。肺含水量：各损伤组大鼠肺含水量与空白组比较有明显增加，均有显著差异。模型组肺含水量较中药治疗组高，但无统计学差异，与地米组和地米加中药组比较有统计学意义。地塞米松组肺含水量较中药组低但无统计学差异，但和地米加中药组比较有统计学差异（见表2）。表2  各组大鼠肺系数、肺含水量（略）

　　3.3  油酸型ALI大鼠肺组织病变化 

　　空白组大鼠肺呈均匀淡粉红色,包膜光滑,弹性好,表面未见病损灶,切面均质,无液体溢出;光镜下肺组织结构完整,肺泡结构清晰,肺泡壁薄肺泡间隔无水肿，肺泡腔内未见水肿液，偶见肺间质白细胞少量增加。模型组大鼠肺体积显著增大,呈暗红色，包膜下普遍充血水肿,弹性降低,表明可见斑片出血;光镜下肺泡结构破坏，肺泡内广泛积液水肿，肺泡间隔增厚，肺泡变小伴出血。各治疗组肺包膜下充血水肿较空白组减轻，镜下肺泡结构不同程度破坏，肺泡内有炎症细胞侵润，但程度均较模型组轻。（见图1～5）

　　4  讨论

    模型组大鼠肺泡结构破坏，肺泡内广泛积液水肿，肺泡间隔增厚，肺泡变小伴出血，较多炎症细胞浸润，各治疗组有不同程度的减轻。各损伤组大鼠肺系数、含水量均较空白组明显增加，比较有显著差异；各治疗组较模型组有不同程度降低。表明油酸复制肺损伤模型成功，中药和地塞米松对肺损伤大鼠都有一定的保护作用。

    ALI时许多理化因素如缺氧、细胞应切力的急剧改变、各种炎性介质如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)等均可刺激细胞ET-1的快速生成［3］。 ET-1作为内皮细胞合成并释放的具有强大收缩血管作用的多功能细胞因子, 除使肺动脉收缩压、平均肺动脉压和阻力系数(肺血管阻力及体循环血管阻力之)比增高多外，还能能激活中性粒细胞,使之释放活性氧(ROS)、TNF-α、IL-1、IL-8等炎性介质,而具有前炎症因子样作用。通过这些细胞因子和炎症介质对微血管内皮细胞黏附分子的上调作用,启动炎症反应及中性粒细胞在肺间质的募集和浸润,增加血管漏出,引起肺损伤；同时这些细胞因子又可刺激ET的合成与释放,以上环节相互诱导,形成恶性循环,加重肺损伤［4-5］。

    本研究结果显示：三个治疗组中肺组织匀浆和肺泡灌洗液ET-1变化一致，地塞米松加中药组含量最低，中药组最高。三个治疗组的ET-1含量均低于模型组，比较有统计学差异，提示ET-1参与ALI，而芪冬活血饮和地塞米松均可能通过减少ET-1起到保护肺组织的作用。灌洗液中空白组ET-1和地塞米松组、地塞米松加中药组比较无统计学差异，这可能与肺泡灌洗液浓度较低有关。肺组织匀浆和肺泡灌洗液中中药组和地塞米松组比较无统计学意义，但和地塞米松加中药组比较有显著差异，提示中药减少ET-1的作用和地塞米松相近，并和地塞米松有一定的相加作用。

【】
  　　［1］Langleben D, DeMarchie M, Laporta D,et al.Endothelin-1 in acute lung injury and the adult respiratorydistress syndrome［J］.Am Rev Respir Dis,1993,148:1646.

　　［2］GuimaraesCL, Trentin PG, Rae GA. Endothelin ET(B) receptor-mediatedmechanisms involved in oleic acid-induced acute lung inju-ry in mice［J］. Clin Sci,2002, 103 (48): 340-344.

　　［3］Dschietzig T, Richter C, PfannenschmidtG, et al .Dexamethasone inhibits stimulation of pulmonary endothelins by proinflammatory cyto-kines: possible involvement of a nuclear factor kappa B dependent echanism［J］. Intensive Care Med, 2001, 27(4): 751-756.

　　［4］Mitaka C, Hirata Y, Nagura T,et al.Circulating endothelin-1 concentrations in acute respiratory failure［J］.Chest,1993,104:476.

　　［5］Clavijo LC, CarterMB,Matheson PJ, et al. Platelet-activating factor and bacteremia-induced pulmonary hypertension［J］. J Surg Res,2000, 88(2): 173-180.