肾阳虚证研究的现状与思考

【摘要】  　　从内分泌功能、免疫功能和能量代谢三个角度对目前肾阳虚证的研究状况作了分析，并提出如何应用基因组和蛋白质组技术进一步探索肾阳虚证的本质。

【关键词】  肾阳虚证 基因组 蛋白质组

　　Abstract：With the development of Chinese medical research，it becomes an important problem how to scientifically explain syndrome in Chinese medicine.In this paper，the progress on deficiency of kidney yang is reviewed from endocrine，immune function and energy metabolism，and it is preferred that the technology of genome and proteome be used to study the deficiency of kidney yang.

　　Key words：deficiency of kidney yang; genome; proteome
   
　　肾阳虚证是中医理论体系中重要的证候之一。自1959年上海医科大学脏象研究组开始了肾虚、肾本质研究以来，已经有人应用了同位素、电镜、激光、免疫、基因芯片和蛋白质组等的研究手段或技术，从组织细胞水平到分子水平，从宏观到微观各方面对肾阳虚机理进行探索，揭示了肾阳虚证的部分机理。

　　1  肾阳虚证研究的现状

　　1?1  肾阳虚证与内分泌功能  肾阳虚证与内分泌功能关系的研究最早开始于1959年，邝安堃等［1］用糖皮质激素造成了肾阳虚小鼠模型，并发现模型小鼠的甲状腺、肾上腺、垂体重量和耗氧量发生病理性改变，处于一种严重的消耗状态，呈现肾阳虚。沈自尹等以不同病种的肾阳虚证病人作为研究对象，在大量的指标测试中发现肾阳虚病人24h尿17羟皮质类固醇含量普遍低于正常值，而经补肾后，尿17羟皮质类固醇值有所提高［2］。检查了下丘脑-垂体-肾上腺皮质功能，结果30例正常人中仅1例异常，而48例肾阳虚病人中有20例异常［2］。因此，沈自尹等人把肾阳虚定位在下丘脑－垂体及其所属三个靶腺（肾上腺、甲状腺、性腺），认为肾阳虚证患者存在着肾上腺、甲状腺、性腺、垂体不同环节、不同程度的功能紊乱，这一结论还被其他学者所证实［3］。蔡定芳等人对皮质激素所致肾阳虚大鼠的下丘脑-垂体-肾上腺的形态学改变进行了系统的研究，发现肾阳虚时下丘脑室旁核小细胞区促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)阳性细胞及正中隆起外层CRF阳性纤维明显减少，染色变淡；垂体前叶促肾上腺皮质激素(ACTH)阳性细胞数量减少；肾上腺明显萎缩，特别是束状带明显变薄［4］。同样在对肾阳虚病人的T3、T4、TSH(甲状腺轴)、睾丸酮(T)、雌二醇(E2)、E2/T、FSH、LH等进行测定时，均发现其值比正常人低。肾阳虚促甲状腺素释放激素(TSH)兴奋试验出现延迟反应［2］。钟历勇等研究了补肾、健脾、活血三类复方对肾阳虚大鼠下丘脑CRF mRNA的影响，惟有补肾中药能够提高肾阳虚大鼠下丘脑CRF mRNA的表达，能对HPAT轴起到保护作用，进一步说明了肾阳虚证与神经内分泌功能紊乱有关［5］。

　　1?2  肾阳虚证与免疫功能  肾阳虚证与免疫功能密切相关。肾阳虚证患者表现为从细胞免疫到体液免疫及补体整体水平的下降。在免疫组织方面，主要表现为脾脏缩小、重量减轻、脾细胞悬液内溶菌酶含量减少［6］。在细胞免疫方面，陈梅芳对尿毒症肾阳虚和慢支肾阳虚型E?RFC作了检测。发现肾阳虚者E?RFC值降低(P<0?001)［7］。另外，陈小峰等用铬释放法检测了61例肾虚患者外周血NK细胞活性，发现肾虚患者的NK细胞活性明显低于健康人［8］。在体液免疫方面，出现血清IgG下降。补体方面，C3、H50、C3b受体花环率和补体溶解免疫复合物(CRA)活性均低于正常［9］。这些研究表明肾阳虚证确实与免疫功能低下有关。

　　1?3  肾阳虚证与能量代谢  肾阳虚证与物质代谢和能量代谢相关，肾阳虚患者的血浆中PGE2、PGE2α、cAMP、cGMP均有改变。并且PGE2与PGE2α、cAMP与cGMP似乎与中医的阴和阳有着对应关系［10］。并且利用显微技术研究了滋肾阴温肾阳中药对地塞米松致肾阳虚大鼠肾上腺皮质束状带超微结构的影响，发现肾阳虚组肾上腺皮质束状带细胞线粒体嵴发生显著的退行性改变，由功能旺盛的囊泡状嵴转变为功能低下的管状嵴，影响肾阳虚动物的物质代谢，滋阴中药和温肾阳中药分别能防止造模7d和30d大鼠肾上腺皮质束状带细胞线粒体的退行性改变。陆明等人选择一个具有典型肾阳虚证的家族患者达到10例，另有肾阳虚患者1例和正常个体4例的肾阳虚家族作为研究对象，通过家族肾阳虚患者与正常者的肾阳虚积分比较发现：在涉及糖、蛋白质、脂类代谢的11项指标上均无统计学差异，但肾阳虚患者整体表现出代谢低下的趋势［11］。高博等还从细胞信号传导角度研究了肾阳虚与两种蛋白激酶的关系，结果表明醋酸可的松致肾阳虚大鼠下丘脑蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)活性均明显降低，补肾方药能明显增加下丘脑组织中PKA和PKC的水平［12］。揭示了肾阳虚时机体细胞信号系统的改变从而影响代谢。

　　2  阳虚证研究的思考

　　2?1  利用基因组技术研究肾阳虚证  中医认为肾虚证的物质基础是肾精虚损。肾藏精，为先天之本，主生长、发育、生殖及水液代谢等。肾精虚损则为肾虚，可出现消渴、眩晕、胸痹、腰痛等多种慢性疾病。肾精这一原始物质即先天之精，与医学描述的遗传物质(即基因)具有一定的同一性。有人认为细胞中DNA是先天之精，RNA和蛋白质是后天之精。DNA或基因处于最原始和最本质的地位，主宰和制约表现型。许多家也从基因表达的角度对肾阳虚的本质进行探讨，郑振等应用RT?PCR技术发现肾阳虚大鼠下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)的mRNA表达受抑［13］。

　　赵晓山等采用抑制性消减杂交技术构建汉族人糖尿病肾病肾阳虚证DNA消减文库，筛选出了DN肾阳虚证的600个差异DNA片段,发现肾虚证与血管紧张素转换酶基因多态性及其基因表达有关。现已明确ACE基因第16内含子存在一个287bp的插入/缺失型(I/D)变异，表现为DD、DI、II三种基因型。肾阳虚证以DD型为主，肾阴虚证则以DI型为主，用补肾为主的中药复方后，以D等位基因、DD型及DI型疗效较好，从而证明ACE基因有可能是肾虚证的相关基因［14］。倪红梅等人利用基因芯片技术共筛选出127条符合标准的差异表达基因，其中63条呈上调表达64条呈下调表达，其结果表明与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等［15］。上述系列研究结果表明从基因组学研究肾虚证本质，循中医学研究本身的内在，建立中医证的基因表达谱，是一个非常有希望的研究方向。基因表达谱可为辨证论治这一精华再度辉煌而提供现代基因组学依据。

　　2?2  利用蛋白质组技术研究肾阳虚证  蛋白质是生命活动的直接体现者，因为绝大多数基因必须通过转录与翻译，生成各种蛋白质才能执行各种生理功能。因此生命现象、疾病、中医证候都可以从蛋白质水平获得最本质的答案。蛋白质组学技术主要从蛋白质整体的角度来研究生命现象。它与中医学的整体观、辨证观有许多相似之处。因此，从蛋白质组学研究肾虚证本质，是一个非常有希望的研究方向。黄黎明等提出用蛋白质组学方法研究肾阳虚异病同证的思路，按照中医异病同证的理论，许多慢性病都可能出现肾阳虚证。譬如慢性支气管炎、支气管哮喘、病态窦房结综合征、冠心病、慢性心功能不全、肾病综合征、慢性肾功能不全、慢性肾小球肾炎,与内分泌有关的更年期综合征、老年骨质疏松、糖尿病等均与肾阳虚证有关。通过双向电泳及质谱技术从血清中寻找到这些疾病共性的物质基础-肾阳虚蛋白质［16］。卢德赵等人在综合肾阳虚临床症状的实验造模后的症状，认为能量代谢功能障碍是肾阳虚的共同表现。并应用不同的方法造成的肾阳虚大鼠，并研究了肾阳虚大鼠肝和肝线粒体蛋白质组，结果发现，肾阳虚动物热休克蛋白60和70、肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶、亚硫酸氧化酶、ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶表达量增加，而丙酮酸脱氢酶、α?酮戊二酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶和鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。温补肾阳药可能改善肾阳虚大鼠糖、脂和蛋白质代谢，说明肾阳虚动物能量代谢相关酶的变化与肾阳虚的临床虚寒症状有关［17］。

　　3  展望

　　肾阳虚证是中医理论体系中重要的证候之一。目前肾阳虚证的研究虽然取得了一系列的进展，但多停留在对某些指标的检测上。然而，证候不是机体局部的反应，而是涉及多个器官，多个系统，多个水平的整体反应。因此，一个或者数个指标难以体现证候的特点和变化，从指标的变化及相互关系的角度研究证候微观机理，更能体现证候整体的、动态的特征。另外，证候相关指标的分析不应停留在微观改变有无统计学意义的层次上，而应进一步通过现代数理统计方法和信息处理技术，从中医整体调控的视角对参与整体调节的信息物质的作用关系进行研究。

【】
  　　［1］ 邝安堃.某些助阳药对于大剂量皮质素所致耗竭现象的影响［J］.中华内科杂志，1963，2:113?116．

　　［2］ 沈自尹.肾阳虚证的定位研究［J］.中西医结合杂志,1997,17(1)：50?52．

　　［3］ 赵宁侠，周建歧.吸食阿片类毒品对下丘脑-垂体-靶腺轴功能影响及与中医肾阳虚相关关系研究［J］.浙江中医学院学报，2002，26(3)：23?24．

　　［4］ 蔡定芳，沈自尹，张玲娟，等.右归饮对大鼠下丘脑－垂体－肾上腺－胸腺轴抑制模型的影响［J］.中国免疫学杂志,1994,10(4)：236?239．

　　［5］ 钟历勇，沈自尹，蔡定芳，等.补肾健脾活血三类复方对下后脑－垂体－肾上腺－胸腺轴及CRF基因表达的影响［J］.中国中西医结合杂志,1997,17(1):39?41．

　　［6］ 雷娓娓，黄真炎,郑尚飞，等.肾虚、脾虚造型动物免疫、内分泌器官超微结构的比较研究［J］.中药新药与临床药理,1999,10(4):208?211．