胃癌组织CDX2和E?钙粘蛋白表达与临床病理的关系

              作者：焦嫦亮，翁阳，李群，郑少江，吴文川，蔡仁桑，谭蓉 

【摘要】  目的：探讨胃癌组织尾侧型同源转录因子?2(CDX2)和E?钙粘蛋白(E?cad)的表达与浸润、转移及预后的关系. 方法：胃癌患者86例，以正常胃黏膜15例为对照，应用SABC免疫组化方法检测CDX2和E?cad的表达. 结果：正常胃黏膜上皮中E?cad完全表达，而CDX2不表达. 胃癌Ⅰ～Ⅱ期CDX2与E?cad的异常表达率分别为51.2%和54.9%，Ⅲ～Ⅳ期的CDX2异常表达率下降，而E?cad的则提高，分别为25.1%和78.8%，各分期间的差异有统计学意义(P<0.05). 伴有淋巴结转移的55例患者中，CDX2异常表达率为67.1%, 而E?cad异常表达率为86.8%，均分别与相应的无淋巴结转移组存在统计学差异（P<0.01）. 此外，CDX2和E?cad的表达还与细胞分化程度、肿瘤生长方式、癌细胞浸润深度及患者5 a生存率有关(P<0.05). 结论：CDX2和E?cad与胃癌的发生、浸润、转移有关，可联合判断预后.

【关键词】  CDX2基因；E?钙粘蛋白；临床病；胃肿瘤；预后

     0引言

    近年来，大量研究已证实胃癌的发生、和预后是多基因改变的结果. 研究胃癌相关基因及其蛋白分子不仅对于理解胃癌的发病机制十分重要，而且对于发现在诊断和评价预后中有临床意义的分子标记物也同样重要. 尾侧型同源转录因子?2 (caudal type homeobox transcription factor?2, CDX2)是人体中肠道特异性表达的核转录因子，在肠黏膜上皮细胞的发育及保持其形态、结构特征中起着重要作用. CDX2在结直肠肿瘤发生过程中扮演抑癌基因的角色，并与肿瘤的生物学特性及患者预后密切相关［1］，而关于CDX2对胃癌的研究不多. E?钙粘蛋白(E?cadherin, E?cad)是钙黏附蛋白分子家族中的一种跨膜蛋白亚型，集中表达粘着连接. 主要功能是介导上皮细胞与上皮细胞的黏附、维持组织正常形态结构. 关于E?cad的表达与胃癌浸润、转移的关系，国内外新近有不少相关报道［2］，但结果不一. 基于以上原因，我们采用免疫组化方法检测86例胃癌组织中CDX2和E?cad的表达情况，探讨二者与胃癌发生、浸润、转移及预后的关系.

    1对象和方法

    1.1对象2000/2002胃癌手术标本86(男55，女31)例；年龄52.8±11.2 ( 32～72)岁. 全部获病理学诊断. 患者术前均未行化放疗. 随访时间5～60 mo. 分别根据国际胃癌新PTNM分期标准、Lauren分类法、胃癌组织学分类标准及淋巴转移情况对病例进行分组.正常对照组标本15例，为距胃癌边缘10 cm以上的胃黏膜组织，经病理学检查证实为无癌肿浸润.

    1.2方法采用免疫组织化学染色SABC法，标本经40 g/L中性多聚甲醛固定,石蜡包埋，4 μm连续切片，70℃烤片15 min，梯度乙醇脱水，30 mL/L H2O2灭活内源酶，PBS漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育15 min. 滴加20～30 μL PBS稀释的一抗(1∶5的HECD?1 mAb) 4℃过夜. PBS 漂洗5 min×3次. 二抗、三抗依次37℃孵育45 min，PBS漂洗5 min×3次. DAB显色5～10 min，自来水充分洗涤，苏木素复染5 min，稀盐酸淡化30 s，冲洗5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用PBS替代第一抗体作阴性对照. 鼠抗人CDX2 mAb（工作浓度1∶50）、鼠抗人E?Cad mAb（工作浓度1∶50）和免疫组化采用链霉菌抗生素蛋白?过氧化物酶法染色(SABC法),试剂盒均为Santa Cruz公司生产，购自北京中山生物技术有限公司. CDX2蛋白表达阳性为胞核出现棕黄色颗粒. E?cad免疫染色阳性物质呈棕褐色，正常染色主要定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色. 超过40%细胞CDX2阳性表达记为阳性，否则记为阴性；而E?cad在胃癌组织中则为异常表达，超过30%细胞E?cad异常表达记为阳性，否则记为阴性［3-4］.

    统计学处理：所有数据用SPSS 13.0处理, 计数资料采用χ2检验. 生存分析用Kaplan?Meier法. P<0.05为差异具有统计学意义.

    2结果

    2.1CDX2和E?cad蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系通过统计学分析表明，CDX2和E?cad在胃癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及有无血管侵害均无关(P>0.05). 而与胃癌的组织Lauren分型、有无淋巴转移、TNM分期、癌组织分化程度及肿瘤浸润深度均有关(P<0.05). CDX2在高分化程度癌组织中的阳性表达率为62.5%，低分化程度阳性率36.7%，E?cad的异常表达率随分化程度的恶化而升高，差异均有统计学意义(P<0.05). 在浸润深度方面，CDX2在黏膜及黏膜下层组阳性表达率为71.8%，在肌层及浆膜层组表达率为51.1%；癌细胞浸润深度达黏膜、黏膜下层者E?cad异常表达率为48.9%，而浸润至浆膜及浆膜外者异常率为68.2%，差异有统计学意义(P<0.05). 胃癌Ⅰ～Ⅱ期CDX2与E?钙粘蛋白的异常表达率分别为51.2%和54.9%, Ⅲ～Ⅳ期的CDX2异常表达率下降，而E?cad的则提高，分别为25.1%和78.8%，各分期间的差异有统计学意义(P<0.01). 伴有淋巴结转移的55例患者中，CDX2异常表达率为38.2%，而E?cad异常表达率为60.0%，均分别与相应的无淋巴结转移组存在统计学差异（P<0.01）. CDX2与E?cad在Lauren分型中肠型胃癌的异常表达率分别为50.8%和49.2%，而在弥漫浸润型胃癌异常表达率则为36.3%和57.3%,两者间有统计学差异(P<0.05,表1).表1CDX2和E?cad蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

    2.2CDX2和E?cad蛋白表达与胃癌患者生存率的关系对于肠型胃癌的患者，CDX2的表达情况与其5 a生存率无关（P>0.05），而在弥漫型、混合型胃癌及3种分化型癌患者中，有CDX2阳性表达的患者，其5 a生存率则明显高于阴性表达者（P<0.05）；另一方面，在3种Lauren分型及低分化癌中，E?cad异常表达患者的5 a生存率均低于E?cad阴性表达者（P<0.05）. 从生存分析结果看，当CDX2(+)/E?cad(-)表达时，患者的生存率最高，而CDX2(-)/E?cad(+)患者的生存率最差(表2，图1).表2CDX2和E?cad蛋白表达与胃癌患者生存率的关系

    3讨论

    CDX2基因可能是肿瘤抑制基因之一. 其作用机制可能与癌基因突变、细胞周期调控有关. CDX2蛋白对肠道上皮细胞的增殖、分化起着重要作用［5］. 研究表明CDX2蛋白在正常胃黏膜中无表达，在绝大多数胃黏膜肠化生中呈阳性表达，提示CDX2蛋白在胃黏膜细胞中的异位表达是发生胃黏膜肠化生的重要起始事件. 而肠化生是胃癌的重要癌前病变. 本研究显示胃癌组织中CDX2蛋白表达强度随胃癌的分化程度变差而减弱，说明CDX2异常表达与胃癌密切相关. 影响胃癌患者预后的众多因素中以肿瘤浸润胃壁的深度最为重要，淋巴结转移数量次之. 高CDX2蛋白表达胃癌，具有较低的侵袭能力. 而低CDX2蛋白表达胃癌，其淋巴结转移更为多见，这一现象可能与CDX2蛋白表达缺失有利于癌细胞的免疫逃逸有关. CDX2蛋白表达强度随癌细胞系分化由好到差呈逐渐减少趋势变化. 据此可以认为检测胃癌组织中CDX2蛋白的表达状况可能有助于判断胃癌的恶性程度及患者预后转归. Cadherins (Cad)是一种Ca依赖性黏附分子，是细胞黏附功能的执行者，其中E?cad是维护上皮细胞形态和结构完整性的关键分子，对于上皮细胞之间黏附功能有重要调节作用. 本研究中，正常胃黏膜100%表达E?cad. 正常胃黏膜、早期胃癌组织及进展期胃癌组织的E?cad 表达有明显的差异，说明E?cad表达的下降与胃癌的发生具有相关性. E?cad在高、中、低分化型癌中,阳性表达率呈逐渐减少趋势，说明分化越低的胃癌，E?cad阳性表达率越低，提示E?cad的低表达与肿瘤的分化程度密切相关. 由于肿瘤细胞从原发部位脱落并转移与细胞黏附功能降低密切相关，且大量研究证据表明E?cad减少、丧失以及异质性、非极性分布使细胞间黏附力减弱而至癌细胞易于脱离原发灶，发生浸润、转移［6］. 一旦E?cad黏附功能受抑制，导致细胞间质蛋白水解，癌细胞就可以进入高浸润转移状态. 因此，检测E?cad在癌组织中的表达对于了解癌细胞的浸润、转移情况具有重要意义. 通过本组研究我们发现，随着胃癌浸润深度的增加，E?cad表达的阳性率逐次递减. 因此，E?cad表达与肿瘤浸润深度相关. 我们同时发现E?cad表达与淋巴结转移有关. 将二者联合考查的结果表明，CDX2(+)/E?cad(-)的患者生存率最优. 可见，CDX2和E?cad与胃癌的发生、浸润、转移有关，可联合运用，作为新的胃癌标记物，对判断预后有一定价值.

【】
  ［1］ Mutoh H, Sakurai S, Satoh K, et al. Development of gastric carcinoma from intestinal metaplasia in Cdx2 transgenic mice［J］. Cancer Res, 2004,64(21):7740-7742.

［2］ 周永宁,徐采朴,彭贵勇,等. E?钙粘蛋白2连接素复合体表达与胃癌临床病及生存期的关系［ J ］. 中华消化杂志,2003, 23: 150-153.

［3］ Ito R, Oue N, Yoshida K, et al. Clinicopathological significant and prognostic influence of cadherin?17 expression in gastric cancer［J］.Virchows Arch, 2005,447: 717-722.

［4］ Bankfalvi A, Terpe HJ, Breukelmann D, et al. Immunophenotypic and prognostic analysis of E?cad herin and β?catenin expression during breastcarcinogenesis and tumor progression: Acomparative study with CD44［J］. Histopathology, 1999, 34:25-341.

［5］ Seno H, Oshima M, Taniguchi MA, et al. CDX2 expression in the stomach with intestinal metaplasia and intestinal?type cancer: Prognostic implications［J］. Int J Oncol, 2002,21:769-774.

［6］ 黄水清, 徐霞峰, 樊克武. E?钙粘蛋白表达与胃癌临床病理学关系的研究［J］.临床肿瘤学杂志,2005,10(2):161-163.