S100A4和VEGF?C的表达与胃癌淋巴转移的关系

【摘要】  目的：观察S100A4和血管内皮生长因子C（VEGF?C）在胃癌组织中的表达，分析其与肿瘤淋巴转移的关系以及二者的相关性. 方法: 采用免疫组化方法检测S100A4和VEGF?C在76例胃癌及24例癌周正常组织中的表达. 结果: S100A4和VEGF?C在胃癌组织中的阳性表达率明显高于癌周正常组织（P＜0.01）. S100A4的表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关（P＜0.01或P＜0.05）；VEGF?C的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关（P＜0.01或P＜0.05）. S100A4和VEGF?C的表达呈正相关（rs＝0.334，P=0.003），kappa系数为0.298. 结论： S100A4可能参与VEGF?C淋巴管生成通路，在胃癌的淋巴转移中发挥重要作用.

【关键词】  胃肿瘤 内皮生长因子 钙结合蛋白质类 淋巴转移

　　0引言

　　胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，早期即可发生淋巴转移. 大量研究证明，是否有淋巴结转移是胃癌患者重要的预后因素［1-3］. 血管内皮生长因子C（VEGF?C）是目前发现的首要的淋巴管内皮细胞调节因子，可诱导实体瘤内或瘤周的淋巴管生成，与恶性肿瘤的淋巴转移密切相关［4-5］. S100A4是钙离子结合蛋白S100家族的成员之一，近年研究发现S100A4在多种恶性肿瘤组织中表达，其表达与肿瘤分期和淋巴结转移有关，被认为是一种肿瘤转移促进基因［6-7］. VEGF?C和S100A4在肿瘤组织中的关系还不清楚. 我们运用免疫组化方法检测VEGF?C和S100A4在胃癌组织中的表达，分析其与肿瘤淋巴转移的关系以及二者之间的相关性.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　76（男46，女30）例胃癌石蜡包埋组织标本取自泰山医学院附属病理科，均为外科手术切除标本，患者术前未作放、化疗. 所有组织均经临床及病理组织学检查确诊. 患者年龄40~76岁，中位年龄56岁，其中有淋巴结转移者43例，无淋巴结转移者33例. 选择24（男14，女10）例癌周正常组织作为对照，年龄35~70岁，中位年龄54岁. 兔抗人S100A4多克隆抗体为Neo Marker公司产品，羊抗人VEGF?C单克隆抗体为Santa Cruz公司产品. SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购自北京中山生物技术有限公司.

　　1.2方法

　　采用免疫组织化学SP法进行染色，实验步骤按试剂盒说明书进行. 采用EDTA缓冲液微波修复抗原，DAB显色. 用PBS代替一抗作为阴性对照. S100A4和VEGF?C阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色，定位于细胞质. 采用二级计分法，首先按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10％为1分，11％~50％为2分，51％~75％为3分，＞75％为4分. 两者乘积≤2分为免疫组化反应阴性，≥3分为阳性.

　　统计学处理：采用SPSS12.0统计软件进行χ2检验.

　　2结果

　　2.1S100A4和VEGF?C在胃癌组织和癌周正常组织中的表达S100A4和VEGF?C免疫反应阳性物质均位于胃癌细胞的细胞质内，呈棕黄色或棕褐色颗粒状（图1，2）. S100A4在胃癌组织中表达阳性率为65.8%（50/76），在癌周正常组织中表达阳性率为16.7%（4/24）；胃癌组织中VEGF?C表达阳性率为42.1%（32/76），而癌周正常组织中未见VEGF?C免疫反应阳性信号. 胃癌组织中S100A4和VEGF?C的表达阳性率明显高于癌周正常组织（P﹤0.01）.

　　2.2胃癌组织中S100A4和VEGF?C的表达与临床病理因素的关系胃癌组织中S100A4的表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关（P<0.01或P<0.05），与患者年龄、肿瘤大小和浸润深度无关（P>0.05，表1）. VEGF?C的表达与胃癌组织TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关（P<0.01或P<0.05），与患者年龄、肿瘤大小和分化程度无关（P>0.05，表1）.表1胃癌组织中S100A4和VEGF?C的表达与临床病理因素的关系（略）

　　2.3胃癌组织中S100A4和VEGF?C表达的关系在27例胃癌组织中S100A4和VEGF?C均被检测到，23例只检测到S100A4，5例只检测到VEGF?C，有21例癌组织中二者均未检出. S100A4和VEGF?C的表达呈正相关关系（rs＝0.334，P=0.003），kappa系数为0.298.

　　3讨论

　　VEGF?C是VEGF家族的新成员，它通过与主要表达于淋巴管内皮细胞的VEGFR?3结合，促进淋巴管生成，维持淋巴管的完整性［9］. 目前发现部分恶性肿瘤组织表达VEGF?C，而且表达VEGF?C的肿瘤细胞具有较高的局部淋巴结转移率［4-6］. 本研究结果显示76例胃癌组织中32例VEGF?C蛋白阳性表达(42.1%)，而癌周正常组织未见VEGF?C蛋白表达. VEGF?C的表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度和TNM分期有关，表明VEGF?C可通过与位于淋巴管内皮细胞的受体VEGFR?3结合，诱导肿瘤周围或瘤内淋巴管生成，从而促进肿瘤的发生、和侵袭转移.

　　S100A4蛋白与其它21个成员共同组成钙离子结合蛋白S100家族，通过钙离子信号转导途径在细胞增殖、分化，肌肉收缩，基因表达、分泌及细胞凋亡中发挥重要作用. 近年来诸多研究表明，S100A4蛋白的表达与肿瘤的发生、发展和侵袭转移有关［7-8］. 本研究结果显示，胃癌组织中S100A4的阳性表达率为65.8%，显著高于癌周正常组织中的表达（16.7%）.
　　S100A4的表达与肿瘤淋巴结转移、分化程度和TNM分期有关，即在淋巴结转移组中显著高于无转移组；在低分化胃癌中显著高于高?中分化胃癌；在临床分期中，随临床分期的升高而明显增加，即分期越晚，S100A4的阳性率越高，提示S100A4蛋白参与胃癌的发生及发展，与胃癌的侵袭和转移密切相关，可以用于评估病情.

　　关于S100A4蛋白参与肿瘤转移的确切机制及其在细胞内外的作用靶点尚不明确. Saleem 等［10］在研究S100A4的促肿瘤转移机制的实验中，对96个特征性的肿瘤转移基因进行了研究，结果发现S100A4在前列腺癌中的高表达可使金属蛋白酶?9（MMP?9）活性增加，而应用S100A4抑制剂则能降低MMP?9的表达和蛋白水解活性. 因此认为S100A4基因通过调节MMP?9增强前列腺癌细胞的侵袭能力，从而促进前列腺癌细胞的淋巴转移. 我们的研究结果表明，S100A4与VEGF?C在胃癌中的表达呈正相关，因此可以推测S100A4可能还通过调节VEGF?C/VEGFR?3信号传导通路，促进肿瘤的淋巴转移. 这一结果与Moriyama?Kita等［11］的研究结果相似，他们发现转染S100A4的舌鳞癌细胞株0SC?19中VEGF?C表达上调，但该研究未对二者之间的关系作进一步的分析.

　　本研究结果表明，S100A4和VEGF?C的表达与胃癌的淋巴转移有关. S100A4可能参与VEGF?C淋巴管生成通路，在胃癌的淋巴转移中发挥重要作用. 随着对VEGF?C和S100A4研究的深入，联合应用上述两项指标检测，可能有助于进一步认识肿瘤淋巴转移机制，为抗肿瘤淋巴转移提供依据.

　　致谢感谢泰山医学院预防医学教研室程琮教授对本文统计学处理的指导，外国语学院大学教研室祝远忠教授对本文摘要的审校.

【】
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