哮喘豚鼠模型血浆类胰蛋白酶水平与气道高反应性的相关性
作者：谢柏梅，戚好文，李伟，范亮，江玲,李寅颖
【关键词】 哮喘；类胰蛋白酶；支气管高反应性
1 材料和方法
1.1 材料 健康雄性豚鼠30只，体质量(250±50) g（第四军医大学实验动物中心）；卵白蛋白（ovum albumin，OVA）（美国Sigma公司）；401AI超声雾化器（上海鱼跃医疗设备有限公司）；UniCAP100全自动体外变应原检测仪，UniCAP Tryptase试剂盒（瑞典Pharmacia公司）；磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司)；戊巴比妥钠 (国药集团化学试剂有限公司，批号：F20041117)；401AI超声雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司)；动物呼吸机 (浙江医科大学医学仪器实验厂)；PTM?9医用微机实控仪(二道生理仪)，RM?6280多道智能生理信号记录系统(第四军医大学病理生教研室提供).
1.2 方法
1.2.1 实验分组及处理 将豚鼠随机分为哮喘模型组和生理盐水组，每组15只. 参照［1］的方法，给予豚鼠腹腔注射含有100 g/L OVA及100 g/L氢氧化铝凝胶的生理盐水1 mL致敏，第15日用10 g/L OVA溶液超声雾化激发，每日1次，连续7 d. 每次激发直到豚鼠出现咳嗽、呼吸急促，腹肌紧张等哮喘症状为止. 生理盐水组用等量生理盐水注射和雾化吸入.
1.2.2 类胰蛋白酶测定 各组豚鼠末次激发后，从心脏直接抽血5 mL，立刻置入含EDTA的抗凝管中混匀，静置30 min后1500 r/min离心10 min，留取血浆-80℃冻存. 采用UniCAP100全自动体外变应原检测仪及UniCAP Tryptase试剂盒测定血浆中类胰蛋白酶的含量.
1.2.3 气道反应性的测定 参照文献［4］的方法，以气道内压力(IP)上升至基线值的20％时所对应的磷酸组胺浓度(PC20)作为体现气道反应性高低的指标.
统计学处理: 所有数据均以x±s表示. 将原始数据输入SPSS 11．0统计软件包，组间比较运用采用t检验.
2 结果
哮喘模型组豚鼠在诱喘过程中出现哮喘发作症状，表现为不同程度咳嗽、呼吸急促、腹肌紧张、四肢软瘫、行动迟缓或抽搐跌倒，约30 min后症状逐渐缓解. 生理盐水组豚鼠在整个试验过程中未出现上述症状，其血浆类胰蛋白酶含量（88.78±4.74）较哮喘模型组（119.78±12.50）显著降低(P<0.01). 哮喘组豚鼠PC20值（0.013±0.014）g/L显著低于生理盐水组（0.168±0.186）g/L，差异具有统计学意义(P<0.01).
3 讨论
哮喘的发病机制目前被认为与Ⅰ型变态反应密切相关，而肥大细胞是介导Ⅰ型变态反应的重要成分之一［2-3］. 类胰蛋白酶是肥大细胞含量最多的炎性介质，具有多种生物活性，因此推测类胰蛋白酶在哮喘炎症的发生、和气道重建中起促进作用［4-5］. 本实验发现哮喘豚鼠血浆中类胰蛋白酶值显著高于对照组，表明哮喘气道中存在肥大细胞脱颗粒过程.
AHR是哮喘的重要特征，是临床诊断哮喘的主要依据. 气道炎症、气道平滑肌细胞反应性及气道重建是哮喘发病机制的三种主要因素. 其中气道炎症为首发因素. 本实验中发现，哮喘模型组豚鼠血浆类胰蛋白酶含量较生理盐水组明显升高；哮喘模型组气道反应性与生理盐水组比较显著升高，提示血浆类胰蛋白酶含量与气道反应性之间存在正相关，这可为哮喘防治策略的制定提供依据.
【】
［1］ 王长征，郭先健，王顺朝. 豚鼠哮喘模型的气道炎症性测定［J］.第三军医大学学报,1994，16（4）：277-278.
［2］ Bradding P. The role of the mast cell in asthma: A reassessment ［J］. Curr Opin Allergy Clin Immunol, 2003, 3(1): 45-50.
［3］ Robinson DS. The role of the mast cell in asthma: induction of airway hyperresponsiveness by interaction with smooth muscle ［J］. Allergy Clin Immunol, 2004, 114(6): 58-65.
［4］ Palmans E, Kips JC, Pauwels PA. Prolonged allergen exposure induces structural airway changes in sensitized rats［J］. Am J Respir Crit Care Med, 2000, 161(2): 627-635.
［5］ 谢 华，何韶衡，迟秀丽，等. 哮喘患者血浆类胰蛋白酶、IL?8和嗜酸性粒细胞趋化因子水平与类糜蛋白酶活性测定及相关性分析［J］.第四军医大学学报, 2004,25(16):1502-1504.
