食管鳞癌组织和淋巴结中Paxillin和survivin的表达及其意义

      作者：王雷，平育敏，孟宪利，何明，白世祥，杜媛鲲

【摘要】  目的研究Paxillin和survivin在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌细胞发生与转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌和83例淋巴结组织中survivin和Paxillin的表达情况。结果原发癌组织中Paxillin表达率与淋巴结转移(P<0.05)、浸润深度(P<0.01)和临床分期(P<0.01)等因素有关；原发癌组织中survivin与浸润深度有关(P<0.01)；原发癌组织和转移淋巴结组织中Paxillin和survivin表达率均高于无转移淋巴结组织(P<0.05)； Paxillin和survivin在淋巴结中表达成正相关性(P<0.05)。结论Paxillin和survivin在食管鳞癌组织和转移淋巴结中高表达，在食管鳞癌的发生发展过程中具有重要作用，可作为评价食管鳞癌生物学行为的指标。

【关键词】  食管鳞癌；Paxillin；survivin；免疫组织化学

　　　　Abstract：ObjectiveThe expression of Paxillin and survivin in esophageal carcinoma and to investigate the relationship between the expression of Paxillin， survivin and carcinogenesis and progression of esophageal carcinoma.MethodsPaxillin and Survivin expression were detected in 24 normal esophageal mucosa, 94 primary tumor tissues and 83 lymph nodes with SP immunohistochemistal method.ResultsThe positive expression rate of Paxillin had the relationship with invasive depth, clinical staging and metastasis of lymph node (P<0.05). survivin had the relationship with invasive depth (P<0.05) .The expression of Paxillin，survivin in positive lymph node was much higher than that in negative lymph node respectively(P<0.05). There was a positive relationship between Paxillin and survivin expression in this study (P<0.05).ConclusionPaxillin and survivin are over expressed in esophageal carcinoma.They play important roles in carcinogenesis and progression of esophageal carcinoma and can be used as valuable biomakers to evaluate biological characteristics in esophageal squamous cell carcinoma.

　　Key words：Esophageal squamous cell carcinoma; Paxillin; survivin;Immunohistochemisty

　　0引言

　　桩蛋白(Paxillin)是最近发现的一种在局部黏附中起重要作用的细胞黏附分子，Paxillin表达的异常与肿瘤的发生有一定关系，阳性表达与肿瘤的侵袭转移相关[1]。survivin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族的成员,近年来研究表明,survivin具有强大的抗细胞凋亡以及促有丝分裂作用，与肿瘤的发生演变密切相关 [2,3]。Paxillin在食管鳞癌中的表达的研究未见报道。有关survivin蛋白在食管鳞癌中的表达，国内外研究较少且集中在癌组织中，对淋巴结中的研究未见报道。本文采用免疫组化SP法检测了survivin和Paxillin在食管鳞癌组织和淋巴结组织中的表达，分析两者对食管鳞癌发生、发展和转移的关系以及两者的相关性。

　　1资料与方法

　　1.1临床资料选取河北医科大学第四胸外科2002年3月~2004年10月手术切除并经病理证实的食管鳞癌患者94例，术前均未行化、放疗或其他。男60例，女34例，年龄36~71岁，平均年龄53岁。根据UICC食管鳞癌国际TNM分期标准(1997年)：0期4例，Ⅰ期8例，Ⅱ期38例，Ⅲ期40例，Ⅳ期4例； T 分级：Tis4例，T110例，T231例，T340例，T49例；淋巴结转移组50例，无淋巴结转移组44例，术中取淋巴结组织83例，其中转移的淋巴结40例，无转移的淋巴结43例，选择24例正常食管黏膜组织作为正常对照组。

　　1.2试剂与仪器Paxillin：鼠抗人单克隆抗体(5H11)，应用浓度1∶50。survivin:兔抗人单克隆抗体（FL?142），应用浓度1∶75。Paxillin购自美国Newmarker公司，survivin、免疫组化SP试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。

　　1.3试验方法免疫组织染色依照SP试剂盒说明进行

　　1.4实验结果判定阳性反应物为棕黄色颗粒。Paxillin阳性物质定位于细胞浆和(或)细胞膜，高倍镜下随机观察5个视野，每个视野计数200个细胞，共计1000个，细胞中出现明显棕黄色颗粒为阳性细胞。根据Speiser的标准：每张切片阳性细胞百分率，≥10％为阳性片[4]。survivin染色阳性判定标准[5]：以胞浆和(或)胞核出现黄棕色染色为阳性细胞,比例＞5%为阳性，400倍放大的显微镜下计数至少5个随机视野,取平均值。

　　1.5统计学方法所有数据应用SPSS10.0统计软件，用χ2检验和Spearman相关检验。

　　2结果

　　2.1Paxillin和survivin在正常食管粘膜和癌组织中的表达，见图1、2Paxillin和survivin在正常食管黏膜中的表达率为4.17％(1/24)和0% (0/24)；在食管原发癌组织中表达率分别为68.09％(64/94)、57.45% (54/94)。

　　2.2Paxillin、survivin在原发癌组织中的表达与肿瘤临床病理因素之间的关系见表1。

　　2.2.1Paxillin、 survivin表达与浸润深度的关系Paxillin表达在组间有统计学差异(P<0.01):T3组高于T1组(P<0.01)及T2组(P<0.05)；T4组高于T1组(P<0.01)及T2组(P<0.05)；T3组与T4组无统计学差异(P>0.05)；T2组与T1组无统计学差异(P>0.05)。survivin表达在组间有统计学差异(P<0.01):在T3?T4组高于T1组(P<0.01)及T2组(P<0.01)；T2组与T1组无统计学差异(P>0.05)。

　　2.2.2Paxillin、 survivin表达与淋巴结转移的关系见图3、4有淋巴结转移组的癌组织中的Paxillin表达率高于无淋巴结转移组，有统计学差异(P<0.05)。有淋巴结转移组的癌组织中的survivin表达率与无淋巴结转移组相比无统计学差异(P>0.05)。

　　2.2.3Paxillin、survivin表达与临床分期的关系Paxillin表达在组间有统计学差异(P<0.01): Ⅲ~Ⅳ期组表达率高于0~Ⅰ期组 (P<0.05);     期组高于0~Ⅰ期(P<0.05)；Ⅲ~Ⅳ期组和Ⅱ期组之间差异无统计学意义(P>0.05)。survivin表达在组间差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3Paxillin、 survivin在淋巴结组织中的表达见表2。

　　表1Paxillin、survivn在94例食管鳞癌中的表达及其与临床特征的关系（略）

　　表2Paxillin、survivn在食管原发癌、转移的淋巴结和未转移的淋巴结中的表达（略）

　　2.3.1Paxillin在转移的淋巴结中表达率与原发癌组织相比两者间无统计学差异(P>0.05)；Paxillin在无转移的淋巴结中的表达率与转移淋巴结和原发癌组织比较，均有统计学差异(P<0.05)。

　　2.3.2survivin在转移的淋巴结组织中的表达率与原发癌组织相比两者无统计学差异 (P>0.05)；survivin在无转移的淋巴结组织中表达率与转移淋巴结和原发癌组织比较，均有统计学差异(P<0.05)。

　　2.4Paxillin和survivin表达的相关性Paxillin表达阳性者, survivin的阳性表达率69.77%(33/47);Paxillin表达阴性者, survivin的阳性表达率22.5%(9/40)，两者表达呈正相关关系(P<0.01)，见表3。

　　表3Paxillin和survivin在淋巴结组织中表达的关系（略）

　　3讨论

　　Paxillin是近年来发现的一种重要的细胞黏附因子,是致瘤性酪氨酸激酶的一种底物，与整合素相关联，构成细胞与细胞外基质局部黏附关键部位，调节细胞的移动和播散等功能， 从而提高肿瘤细胞转移和侵袭的能力[6,7]。本研究发现，Paxillin的表达与浸润深度和临床分期有关，说明肿瘤细胞分泌的Paxillin有助于肿瘤的局部浸润，促进肿瘤对周围组织的侵袭，加速肿瘤的。有淋巴结转移组其原发癌组织中Paxillin表达显著高于无淋巴结转移组，且Paxillin呈阳性表达的食管鳞癌组织约2/3发生淋巴结转移，而Paxillin表达阴性的食管鳞癌组织中发生淋巴结转移的只占1/4左右，说明食管鳞癌组织中Paxillin阳性表达可能使肿瘤细胞与其周围的非肿瘤细胞之间的局部黏附作用加强，肿瘤细胞更容易发生迁移进而形成转移。Paxillin在转移淋巴结组织中呈高表达，可能存在如下机制：（1）表达Paxillin的癌细胞较容易侵入血管和淋巴管；（2）癌细胞进入转移灶后高表达Paxillin使其黏附力增加、迁移力下降从而更容易在新的部位生存和生长；（3）生存环境的改变诱发转移癌细胞表达Paxillin。survivn仅在正常成人胸腺和胎盘中少量表达，而在人类多种常见肿瘤中广泛表达，其过度表达与肿瘤的发生发展密切相关[8]。应用RT?PCR技术发现，survivn在癌组织中的表达是一个渐进性的过程，随着正常细胞向癌细胞的恶性转化，survivn的表达逐渐增高[9]。Nemoto等[10]研究表明survivn在食管癌的表达明显高于正常组织，survivn mRNA的高表达可作为食管鳞癌复发的标志。本研究发现，随浸润深度的增加，survivn表达率呈上升趋势，说明survivn的表达不仅存在于肿瘤恶性转化的早期，而且与肿瘤的发展趋势有关，阳性表达者可能有较强的侵袭性和预后不良。survivn在淋巴结中高表达，可能有以下原因：（1）转移入淋巴结中的癌细胞通过表达survivn使其凋亡减少，促进癌细胞增生并进一步侵袭扩散；（2）由于survivn的表达具有细胞周期依赖性，它主要在G2/M期表达，而G2/M期的细胞正是细胞有丝分裂快速增殖期，所以推测在转移淋巴结中，进入G2/M期的细胞较多，导致survivn表达水平较高；（3）研究证明，VEGF可引起survivn表达量增加[11]，而食管鳞癌转移淋巴结中VEGF呈高表达[12]，我们推测两者可能存在正反馈调节，VEGF表达诱导survivn上调，survivn表达可能抑制血管内皮细胞凋亡，促进癌细胞增殖转移。Paxillin和survivn在食管鳞癌淋巴结中高表达，且呈正相关性，提示食管鳞癌的发生、发展是一个多基因、多步骤的生物学行为改变的过程其生长和侵袭转移过程中可能起协同作用。淋巴结转移是食管鳞癌主要转移途径之一，许多患者术前即存在着微小转移，传统病检查受灵敏度限制可能无法检出微转移，对切除的标本进行Paxillin和Survivin免疫组化染色可以提高检测的灵敏度并指导临床。即使HE染色显示淋巴结为阴性，而免疫组化染色显示其为阳性表达，临床上可提示淋巴结组织中可能有微小转移或转移潜能比较大。survivn和CD44v6在原发癌组织和转移淋巴结组织中高表达可能成为抑制肿瘤生长和防治肿瘤淋巴结转移的生物靶点，针对性开发新的抗肿瘤药物和靶向治疗将具有深远的意义。

【】
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