灵丹片中灵芝多糖的含量测定
【关键词】 灵丹片；,,灵芝多糖；,,蒽酮
摘要：目的建立灵丹片中控制多糖含量的质检方法。方法采用紫外分光光度法在625 nm处测定灵丹片中多糖含量。结果测量多糖平均回收率 100.15%，RSD＝1.053%，灵丹片中多糖含量各批含量不一。结论该方法简便易行,准确精密,尤其适用于对该产品的快速分析。
关键词：灵丹片； 灵芝多糖； 蒽酮硫酸法
灵丹片由灵芝、丹参、川芎等多味中药加工而成的片剂。经武汉市中西医结合多年临床研究表明具有扶正固本，滋阴补肾，活血祛淤，养血生发的功效。其中主药灵芝主要含水溶性成分灵芝多糖具有多方面的生理活性［1,2］，也是大多数灵芝制剂作为质量控制的指标成分［3,4］，笔者用紫外分光光度法对灵丹片中灵芝多糖含量测定方法进行了研究。现将结果报道如下。
1 仪器与材料
1.1 试药0.2%蒽酮硫酸试液:称取蒽酮0.2 ｇ,加上95%浓硫酸充分溶解定容至100 ml,作显色剂溶液备用； 葡萄糖对照品（购于药品生物制品检定所），浓硫酸,95%乙醇,蒽酮为分析纯;灵丹片及灵芝药材均来自于本院，灵丹片批号为041009，041210，050320)。
1.2 仪器TU1800S型紫外分光光度仪，北京普析通用分析仪器厂。
2 方法与结果
2.1 供试液的制备
2.1.1 灵丹片供试液制备取同批号片剂10片，除去色衣，研碎，混匀,精称约1.5ｇ，加80%乙醇回流提取2次，200 ml/次，30 min/次，过滤，滤渣洗至无色 ；再取滤渣加蒸馏水煎煮2次，200 ml/次，30 min/次，合并，定容至500 ml，即为灵丹片供试液。
2.1.2 灵芝药材供试液制备取灵芝药材切制成条状(宽0.5 cm左右)60℃烘5 h,粉碎,过1号筛,精取粉末约5 g,用80%乙醇回流提取2次,200 ml/次, 30 min/次，过滤, 滤渣洗至无色；滤渣加水微沸煎煮2次，200 ml/次,2 h/次，过滤,滤渣加水洗涤,洗液并入滤液加水定容至500 ml,即为药材供试液。
2.1.3 标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量,配制成每毫升含0.107 mg的葡萄糖标准溶液即得。
2.2 最大吸收波长的确定精取葡萄糖标准溶液1.0 ml,置试管中,加蒽酮-硫酸试液2.0 ml,混匀。置水浴中加温10 min。取出，放人冰浴中冷却15 min,以1.0 ml水加2.0 ml 0.2%的蒽酮硫酸试液为空白,在TU1800S型分光光度计上,于580～700 nm波长范围内测定吸收度。结果在625 nm处有最大吸收,同法测得灵丹片供试液、灵芝药材供试液均在625 nm处有最大吸收。
2.3 标准曲线的绘制精密吸取葡萄糖标准溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加水定容至刻度，分别吸取1.00 ml至6支试管中，各加2.0 ml 0.2％蒽酮硫酸试液，振摇均匀，水浴中加温10 min，取出，放人冰浴中冷却15 min，以1.0 ml水加2.0 ml 0.2％蒽酮硫酸试液作空白，在625 ml处测吸收度，在30 min以内完成。吸光度测定结果如下表1。以A为纵坐标,C为横坐标,绘制标准曲线,得： A =0.017 7C+0.023 6，r＝0.999 2线性范围：5.35～ 32.1 μg/ml 。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度实验取标准品溶液重复测定5次,吸收度为0.584，0.584，0.584，0.584，0.583。 RSD =0.077％。
2.4.2 稳定性考察将供试品溶液分别在10，20，30，40，50，60 min内测定,结果表明在40min内稳定。
2.4.3 加样回收率实验取同批号片剂10片，除去色衣，研碎，混匀，精称约0.3 g，加葡萄糖适量按含量测定方法测定,计算回收率。结果见表2。
2.5 样品含量测定精密吸取灵丹片供试液和灵芝药材供试液各1.00 ml,分别置试管中,按标准曲线制备项下的方法测定。结果见表3。
表1 标准品溶液的吸光度测定结果（略）
表2 回收率测定结果（略）
表3 样品含量测定结果（略）
3 讨论
本方法中对灵芝多糖的提取采用少量多次的水醇法,简便易行,但含醇量应控制在80%以上。蒽酮硫酸法对灵芝多糖的测定,本实验属首次应用,从方法学考察结果看,本实验方法简便易行、速度快、稳定性好、回收率较高，适宜于实际生产中快速测定［4］。从测定结果看，灵芝药材各批的多糖含量比较接近，而灵丹片各批的多糖含量相差较大，可能与生产工艺有关，应对半成品、成品分别进行多糖含量控制，从而更好的控制制剂质量。
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［1］ 顾学裘.抗癌中药的研究及展望［M］.北京：医药科技出版社，1989：22.
［2］ 李荣芷.灵芝抗衰老机理与活性成分灵芝多糖的化学与构效研究［J］.中国医科大学学报，1996，23（6）：473.
［3］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学出版社，2005：130.
［4］ 毛维伦，许腊英，李顺超，等.灵芝胶囊中多糖含量的测定［J］.中国药学杂志，2001，2（7）：644.
