Midkine在食管鳞癌中的表达及其与微血管密度的关系
作者：王琼， 赵永年，刘钧，朱治键
【摘要】 目的 研究MK在食管鳞癌中的表达及与肿瘤血管形成的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测45例食管鳞癌组织中MK的表达，同时以CD34标记微血管内皮细胞测定微血管密度（microvessel density，MVD）。结果 45例食管鳞癌组织中MK阳性表达率为77.8%，MK阳性的食管鳞癌组织MVD为40.43±6.27，MK阴性的食管鳞癌组织MVD为31.34±3.89 ，两者有显著性差异(P＜0.01)。结论 MK在食管鳞癌中高表达并与血管形成有关。
【关键词】 食管癌 MK 血管生成
Expression and Significance of Midkine（MK）in Esophageal Squamous Cell Carcinoma and Correlation with Microvessel Density
Abstract：Objective To study the expression of midkine in esophageal squamous cell carcinoma and the relation to angiogenesis.Methods A Immunohistochemical SP technique was used to detect the expression of MK in 45 cases who suffer from esophageal squamous cell carcinoma ， Microvessel density（MVD）was also determined in endothelial as CD34.Results Positive MK Immunostaining was detected in 77．8% of esophageal carcinoma，MVD was 40.43±6.27 in esophageal carcinoma positive for MK while it was 31.34±3.89 in esophageal carcinoma negative for MK (P＜0.01)．Conclusion Overexpression of Mk in esophageal carcinoma, and correlation with angiogenesis of esophageal carcinoma.
Key words：Esophageal carcinoma; Midkine; Angiogenesis
0 引言
近年来，有报道Midkine(MK)对肿瘤新生血管生成具有明显的调控作用[1]。在国内，MK与食管鳞癌血管生成的有关报道较少。我们在对贲门癌血管生成及食管癌MK观察的基础上[2,3]，应用免疫组化方法检测45例食管鳞癌组织中MK表达及与微血管密度的关系，初步探讨MK与血管生成的可能关系。
1 资料与方法
1．1 资料 收集川北医学院附属病理科2003年1月～6月间具有完整临床病理资料的手术切除食管鳞癌45例。男性35例，女性10例，年龄38～72岁（平均57.9岁）。组织学上：高分化鳞癌17例，中等分化22例，低分化6例。术前均无放疗、化疗及其他史。另选10例正常食管组织作对照研究。
1．2 方法
1．2．1 试剂 羊抗人MK单克隆抗体及试剂盒购自美国Santa Crue公司，鼠抗人CD34单克隆抗体及试剂盒购自福州迈新公式。
1．2．2 免疫组化染色方法 将原病理常规石蜡包埋的蜡块作4μm切片，每例作连续切片3张，分别作HE染色、MK，CD34免疫组织化学SP法染色。各组织切片常规脱蜡及水化后，依次按说明书完成免疫组化染色各步骤。所有切片均在同一实验室，由同一技术人员使用同一批号试剂完成免疫组织化学染色。用已知阳性对照片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1．3 结果判断 MK阳性判断：凡细胞质和/或细胞膜出现清晰的棕黄色染色的细胞即为阳性细胞。结果以阳性细胞所占百分比表示。无MK抗体免疫反应细胞存在为阴性（-），MK抗体免疫反应细胞数≤30%为弱阳性（+），MK抗体免疫反应细胞＞30%为强阳性（++）。每张切片随机选取5个代表性的视野计数100个细胞。肿瘤MVD测定方法：按Weidner[4]报道的方法进行，即先在低倍镜（×100）下观察CD34阳性染色的微血管，选择染色最多的区域，然后在高倍镜（×200）下进行观察，任何被CD34抗体染成棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇，有或无管腔，只要与其他结缔组织成分有明显区别，均作为一个微血管计数，计数5个高倍镜下的微血管数，取其平均值作为微血管密度。
1．4 统计学处理 MK蛋白表达与各临床病理指标间的关系处理采用χ2检验， MVD与临床病理指标间的关系处理采用方差分析。
2 结果
2．1 食管鳞癌组织中MK蛋白的表达特征与MVD的计数和分布特征 在正常食管黏膜组织及癌旁组织中未见MK蛋白表达或仅见微弱表达，而在食管鳞癌中明显表达，主要位于胞质和胞膜上（图略）。45例食管鳞癌中35例为阳性，表达率为77.8%，其中14例为强阳性。 食管鳞癌细胞外间质中尚见纤维组织、小血管内皮细胞及弹力膜着色。血管密集处MK表达较高。食管鳞癌组织中血管内皮细胞阳性染色主要位于癌灶边缘（图略），且在肿瘤浸润前缘血管密度高于其他区域，MVD均值为37.31±6.89。
2．2 食管鳞癌组织中MK蛋白表达及MVD与临床病理的关系，见表1。
表1 MK的表达及MVD与食管鳞癌的临床病理的关系（略）
2.3 食管鳞癌组织中MK蛋白表达与MVD的关系 MK表达阳性的食管鳞癌组织平均MVD为40.43±6.27，MK表达阴性的食管癌组织MVD为31.34±3.89，F值为21.5，两者有显著性差异(P＜0.01)。
3 讨论
中期因子（MK）是一个新发现的肝素结合性生长因子，已有报告指出，在Wilms瘤和其他许多人类恶性肿瘤中均发现MKmRNA高水平表达, 可能参与肿瘤发生、演进、生长及转移过程[1,5,6]，并且有人研究发现，中期因子对肿瘤新生血管的生成具有明显的促进作用[7,8]。
我们在前期研究中发现，MK在食管鳞癌中高表达，表达率为77.8%。MK蛋白的表达与食管鳞癌的淋巴结转移无相关性（P＞0.05）；与肿瘤分化程度密切相关（P＜0.01）, 与癌浸润深度相关（P＜0.05）。分化高与浸润深的食管鳞癌中表达高。这在一定程度上说明MK参与食管鳞癌的形成，因此,提示MK蛋白定量分析有可能成为食管鳞癌的一个实验室诊断指标。 同时我们还发现，在食管鳞癌细胞外的间质血管内皮细胞呈MK阳性表达，提示MK可能具有刺激血管内皮细胞增殖,促进癌间质血管生成的作用。 本研究表明，MK表达阳性的食管鳞癌组织中MVD明显高于MK表达阴性的食管鳞癌组织，在浸润深的食管鳞癌中，MK表达高，MVD也高，且在浸润前缘血管密度高于其他区域，亦提示MK与食管鳞癌新生血管形成有关，并能促进肿瘤的浸润。但在肿瘤分化程度和转移方面，MK表达和MVD表达不一致，这显示在食管癌的新生血管生成中，还可能有其他的因素在影响血管的生成。在食管鳞癌中，MK 究竟与哪些因素一道参与血管的生成，有待进一步探讨。
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