TSG101基因在肉瘤中表达的初步研究
作者：康小玲，曾子华，郑佩娥，郭莉，陈艳宇，李红，蒋光愉，夏明汗
【摘要】 目的 检测肿瘤易感基因TSG101在肉瘤的表达情况，探讨其表达在肉瘤发生中的可能作用。方法 福尔马林固定、石蜡包埋40例肉瘤标本进行HE和TSG101免疫组织化学染色，观察TSG101的表达情况。结果 肿瘤易感基因TSG101在肉瘤中的表达率较低，仅为17.5％。 结论 TSG101基因的缺陷可能是间叶组织来源恶性肿瘤的常发事件，其表达情况与恶性上皮组织肿瘤中的显著差异对两者的鉴别诊断可能有帮助。
【关键词】 肿瘤易感基因TSG101；肉瘤；免疫组织化学
Preliminary Investigation of Expression of The Tumor Susceptibility Gene TSG101 in Sarcoma
Key words：Tumor susceptibility gene TSG101;Sarcoma; Immunohistochemistry
TSG101基因最初是由Li等［1］于1996年通过随机纯合子敲除法（Random Homozygous Knock Out，RHKO）在小鼠NIH3T3成纤维细胞中发现，敲除该基因获得的转化克隆可在裸鼠体内形成转移瘤，这种效应可由TSG101功能的恢复而逆转。
已有的研究表明［2］TSG101的表达异常可能与人类乳腺癌等恶性肿瘤的发生有关，但TSG101与肿瘤发生的关系仍有待进一步研究证实，杨旭宇等［3］有关鼻咽癌中TSG101基因突变的研究未发现该基因在鼻咽癌中存在突变。申慧琴等［4，5］认为野生型TSG101可能参与了胃癌多药耐药的发生，并在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用。而国内关于TSG101在肉瘤组织表达的研究尚未见报道，本文旨在检测TSG101在肉瘤的表达情况，探讨此基因在肉瘤发生中的角色。
1材料与方法
1．1标本来源
收集暨南大学第一附属病理科1999～2003年40例经手术切除的肉瘤石蜡包埋标本。所有标本经病理确诊，资料完整，手术前均未行放、化疗或生物。
1．2主要试剂
免疫组化一抗TSG101为Dako公司鼠抗人单克隆抗体,二抗试剂盒采用福州迈新生物技术有限公司生产的ElivisionTM plus广谱试剂盒(产品编号:KIT?9901/9902/9903)。
1．3实验方法
将石蜡切片脱蜡，常规HE染色和免疫组化染色。免疫组化染色采用二步法，TSG101抗原经高压修复，一抗工作浓度是1∶100，实验步骤按照试剂盒说明书操作，以TBS代替一抗作为阴性对照,光镜下观察结果。
1．4免疫组化结果判断
TSG101免疫组化阳性染色为棕黄色颗粒，位于细胞胞浆。姚广裕等［6］免疫组化评分标准，每张切片随机选取5个高倍视野，首先按阳性细胞所占百分比评分：阴性为0分，阳性细胞数≤10%为1分，11％～15％为2分，50％～75%为3分，＞75%为4分；再按染色强度评分：无色为0，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；最后按二者乘积分数分为4个等级：“?”（0,1,2），“+”（3,4），“++”（6,8），“+++ ”（9,12）。我们将分数≥3定为阳性，＜3 为阴性。
2结果
本实验中，在肉瘤病例组中肿瘤细胞阳性表达率为(17.5%)7/40，其呈颗粒状分布于胞浆，见图1，其余33例免疫组化染色均为阴性，见图2 。TSG101在肉瘤中的表达情况见表1。表1 TSG101在肉瘤组织中的表达情况
3讨论
抑癌基因的功能研究是恶性肿瘤发生机制研究的重点之一。报道，肉瘤中p53突变率多在30%～60%之间，p53突变多发生于转移的或高度恶性的肉瘤中［7，8］。此外,产生p53功能缺陷除p53突变外，还有其他间接途径，如MDM2蛋白可与p53结合，抑制p53介导的反式激活功能。骨肉瘤和一些软组织肉瘤中已经检测到了MDM2基因的扩增和MDM2蛋白的过表达［7］。
Li等［9］的研究证实了TSG101是泛素连接酶的转录抑制子，通过影响MDM2的稳定性从而调控了p53/MDM2反馈控制环，这种作用提示了TSG101可能在转录水平上与p53蛋白及MDM2蛋白一起共同参与了肿瘤的发生。
TSG101在肿瘤发生中的作用，目前尚有争议。申慧琴等［4，5］在有关TSG101与胃癌细胞耐药相关的研究，发现TSG101在mRNA和蛋白水平上在胃癌耐药细胞中表达明显增高，而且胃癌细胞中TSG101的高表达增加了其对抗癌药物ADR、VCR的耐受性。Liu等［10］研究显示TSG101蛋白在乳头状甲状腺癌组织中也过度表达。
我们的研究结果显示TSG101在肉瘤中的阳性表达率为17.5%，与消化道恶性上皮性肿瘤中48.45%的阳性表达率（另文报道）差异显著。我们推测肉瘤的发生可能与TSG101低水平表达，使其抑制MDM2降解和提高MDM2稳定性作用减弱，影响了p53/MDM2反馈控制环有关。有趣的是TSG101蛋白在恶性纤维组织细胞瘤和平滑肌肉瘤组织中的表达全部呈阴性，隆突性皮肤纤维肉瘤1/8的阳性率也很低（阴性病例评分大部分为0分）。上述肉瘤中是否存TGSG101基因缺失有待证实。
综上所述,TSG101蛋白在肉瘤中的表达率很低，是转录水平还是翻译水平受到影响，抑或存在此基因的缺失事件需要扩大病例做有关进一步的研究。另外TSG101在肉瘤中的表达与其在消化道恶性上皮肿瘤的表达存在明显的差异,提示TSG101在恶性间叶组织肿瘤和恶性上皮组织肿瘤的发生、机制上的作用可能存在差异，TSG101的表达是否可作为两种恶性肿瘤鉴别诊断的辅助指标值得进一步探讨。
【】
［1］ Li L, Cohen SN. TSG101: a novel tumor susceptibility gene isolated by controlled ho?mozygous functional knockout of allelic loci in mammalian cells[J]. Cell, 1996, 85(3):319?329.
［2］Lee MP, Feinberg AP. Aberrant splicing but not mutations of TSG101 in human breast cancer[J].Cancer Res,1997,57(15):3131?3134.
［3］杨旭宇，王磊，冯湘玲，等. 鼻咽癌中TSG101 基因的突变研究[J]. 生命研究, 2002,6（4）：296?299.
［4］申慧琴,韩者艺,韩霜，等. 肿瘤易感基因101在胃癌细胞中的表达及意义[J]. 肿瘤,2004,24(4):345?348.
［5］申慧琴，韩者艺，薛妍，等. 肿瘤易感基因101在胃癌耐药细胞中的表达及作用[J]. 中华消化杂志,2004,24( 9):515?518.
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［10］Liu RT,Huang CC,You HL,et al. Overexpression of tumor susceptibility gene TSG101 in human papillary thyroid carcinomas [J]. Oncogene,2002,21(31):4830?4837.
