白英总苷抗肿瘤作用初步研究

【关键词】  肿瘤

　　Ｔhe Primary Study on the Anti?tumor Effect of  Total Saponin of Solanum Lyratum Thunb

　　Abstract：Objective  To observe the anti-tumor activity of the total saponin of Solanum Lyratum in vitro and vivo. Methods  In vitro, the inhibitory effects of total saponin of Solanum lyratum on proliferation of human hepatoma BEL?7402 cells and gastric carcinoma SGC?7901 cells were measured by MTT colorimetric assay. The mouse tumor model was used to investigate the effects of total saponin on tumor growth. Results  The studies demonstrate that total saponin of Solanum lyratum inhibited proliferation of BEL?7402 cells and SGC?7901 cells, and the IC50 values on them were (180.22±6.32) μg/ml  and (14.89±4.89)  μg/ml, respectively. The tumor inhibitory rate of high dose of total saponin on  S180 sarcoma?transplanted mice were 33.76%±3.24%. When the dose of total saponin varied from low to high, it was able to inhibit the growth of S180    sarcoma?transplanted mice in a dose?dependent manner. There was no influence of total saponin on the growth of H22 hepatic cancer. Conclusion  The total saponin of Solanum lyratum could inhibit the proliferation of tumor cells and inhibit the growth of graft tumor in mice. No acute toxic effect was seen in our experiment.

　　Key words：Solanum Lyratum Thunb；Anti?tumor；MTT method；S180；H22

　　摘要：目的  研究白英总苷体内外抗肿瘤作用。方法  采用MTT法考察白英总苷体外对人肝癌BEL?7402细胞及人胃腺癌SGC?7901细胞的增殖抑制作用；以小鼠S180肉瘤及H22肝癌为模型，考察白英总苷体内对肿瘤生长的抑制作用。结果  白英总苷对人肝癌BEL?7402细胞及人胃腺癌SGC?7901细胞有显著地增殖抑制作用，且均呈现良好的浓度?效应依赖关系，作用48h的IC50值分别为（180.22±6.32）μg/ml和（114.89±4.89）μg/ml；白英总苷对小鼠S180肉瘤有显著的抑制作用，且呈现良好的剂量-效应关系，三次重复实验，高剂量组的抑瘤率达到33.76%±3.24%；白英总苷各剂量对小鼠H22肝癌抑制作用均不显著。结论  白英总苷体内外有一定的抗肿瘤作用。

　　关键词：白英；抗肿瘤；MTT法；小鼠S180 肉瘤；小鼠H22肝癌

　　0  引言
   
　　茄科植物白英（Solanum Lyratum Thumb）又名白毛藤，主产于江苏、浙江、江西，具有清热解毒，祛风利湿，化瘀等作用。临床常用于感冒发热，胆囊炎，胆石病，癌症，子宫颈糜烂，白带等病症[1]。有研究表明，白英水提物体外有较强的肿瘤细胞增殖抑制活性[2],脂溶性提取物能促进癌细胞凋亡[3]。前期研究结果表明，白英总苷对A375细胞等多种体外培养的肿瘤细胞系具有良好的细胞增殖抑制活性[4]，本研究进一步对白英总苷体内外的抗肿瘤作用进行系统的观察。

　　1  材料与方法

　　1.1   动物及瘤株
   
　　昆明种小鼠，购自医科大学第二临床实验动物中心，许可证号： SCXK（辽）2003?0013。人肝癌BEL?7402细胞株与人胃腺癌细胞SGC?7901细胞株，由本实验室传代保种。小鼠S180肉瘤和H22肝癌瘤株，由沈阳药科大学吴英良教授惠赠。

　　1.2  药物
   
　　白英饮片购于上海徐汇中药饮片厂， 由沈阳药科大学孙启时教授鉴定。 取白英全草干品1 000.0g， 用95%正丁醇适量浸泡过夜后， 回流提取3次， 每次1h， 冷却， 过滤， 挥去溶剂得浸膏， 浸膏以适量水分散， 等量石油醚萃取3次， 水层再以等量正丁醇萃取3次， 正丁醇层减压干燥， 得白英总苷10.0g。 配制成不同浓度溶液备用。 注射用环磷酰胺（CTX）（江苏恒瑞医药股份有限公司产品， 批号0020266?0020270）。 5?氟尿嘧啶（5?Fu）水剂250毫克/瓶（上海旭东海普药业有限公司， 批号002302）。

　　1.3  试剂
   
　　RPMI-1640培养液（MEDIUM HyClone，批号AML17586B），胎牛血清（北京元亨圣马生物技术研究所，批号020902），四甲基偶氮唑盐 (Thiazolyl Blue Tetrazolium Eromide，MTT)（美国Amresco, 批号2072B77）。

　　1.4  方法

　　1.4.1  白英总苷对多种人癌细胞的体外增殖抑制作用
   
　　取对数生长期的SGC?7901、BEL?7402细胞，以1×105/ml密度埋96孔板，每孔100μl，埋板12h后加药。白英总苷设5个浓度，分别为250、50、10、2、0.4μg/ml，阳性对照药5?Fu同样设250、50、10、2、0.4μg/ml等浓度，每个浓度设3个复孔。给药48h后，小心吸弃孔内培养液，每孔以PBS洗一次，再将上清液吸弃。每孔加培养液100μl，MTT 液10μl，37℃，5 % CO2饱湿继续孵育4h后中止培养，小心吸弃孔内培养液。每孔加入150μl   DMSO，振荡10min。用酶标仪在492nm处测吸光度值Ａ[5]，求出IC50值。

　　生长抑制率=［(对照组平均Ａ值-用药组平均Ａ值)/ 对照组平均Ａ值］×100%

　　1.4.2  白英总苷最大给药量实验[6]
   
　　健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g，禁食10h并自由饮水，白英总苷以生理盐水配置成2.0g/ml，按灌胃动物能允许的最大容积0.4ml/10 g灌服给药1次，给药量相当于8000.0g生药/kg/d，观察24h及2周内动物的状态及死亡数，每日记录，以下式计算此剂量相当于人日用剂量的倍数。
   
　　小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量小鼠的平均体表面积（0.00442m2)×成人的平均体表面积（1.36m2)成人每日用量

　　1.4.3  白英总苷体内对小鼠移植性肿瘤的作用[7，8]
   
　　选择腹腔接种7～9d，生长良好的荷S180肉瘤或Ｈ22肝癌的小鼠，断颈处死，无菌抽取腹水，以无菌生理盐水稀释成1×107/ml瘤细胞悬液，接种于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2ml，接种60只。接种次日，按体重随机分为5组，灌胃给予受试药物各剂量或生理盐水，每日一次，连续８d。阳性对照组腹腔注射CTX（0.02g/kg/d）。白英总苷高、中、低剂量组分别为62.4、31.2、15.6g生药/kg/d。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药后24 h，处死动物，称瘤重并计算抑瘤率，实验结果进行t检验。实验重复3批，每批实验中动物选取同一性别。
   
　　抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%

　　2  结果

　　2.1  白英总苷对BEL?7402和SGC?7901细胞的体外增殖抑制作用
   
　　白英总苷对体外培养的BEL?7402细胞与SGC?7901细胞具有一定的增殖抑制作用，且呈现良好的浓度依赖性关系，见表1。

　　表1  白英总苷对BEL?7402与SGC?7901细胞的增殖抑制作用（略）

　　表2  白英总苷对小鼠S180肉瘤及肝癌H22的抑制作用（略）

　　* P<0.05，** P<0.01，与荷瘤对照组相比

　　2.2  白英总苷最大耐受量实验
   
　　给药后小鼠活动均正常，2周后亦全部存活，且体重增加，据此动物的最大耐受量为人日用量的1  641.0倍，表明白英总苷急性毒性甚小。

　　2.3  白英总苷的体内抗癌活性
   
　　荷S180肉瘤小鼠给予总苷各剂量肿瘤重量明显减轻，与ＮＳ对照组比较，有显著性差异，见表2。

　　3  讨论
   
　　体外实验表明，总苷对多种体外培养的人癌细胞均呈现一定的增殖抑制作用，并呈现良好的浓度?剂量依赖关系。
   
　　动物实验表明，白英总苷的小鼠最大耐受量相当于人用剂量的1  641.0倍，急性毒性甚小。
   
　　体内小鼠移植瘤实验表明，白英总苷对小鼠移植性S180肉瘤有显著的抗肿瘤作用，高剂量组抑瘤率大于30%，且与荷瘤对照组有显著性差异，同时药物的作用强度与剂量呈现良好的依赖关系，但其对小鼠移植性H22肝癌虽有肿瘤平均重量的减少，但不具有显著性差异，肿瘤重量的变异范围较大，高剂量组抑瘤率仅16.7%。
   
　　通过较为系统的研究认为，白英总苷体内外具有一定的抗肿瘤作用，且其作用存在一定的选择性，考虑可能与不同肿瘤的生物学性状的差别有关，其抗肿瘤作用机制有待进一步的研究。

【】
  　　［1］ 全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编[M]．北京：人民卫生出版社，1988.291．

　　[2] 施文荣，刘艳． 白英对人急性早幼粒白血病HL?60细胞生长的影响[J]．福建中医学院学报，2002，12(1)：36?38．

　　[3] 单长民，胡娟娟，杜冠华，等．白英提取物诱导人肝癌BEL?7404细胞凋亡作用[J] ．临床药与学，2001,6（3）：200?203．

　　[4] 孙立新，任靖，王敏伟，等．白英抗肿瘤有效部位筛选[J]．沈阳药科大学学报，2005，22(3)：210?212．

　　[5] 徐叔云．药理实验方法学[M]．第３版．北京：人民卫生出版社，2002.1762?1763．

　　[6] 陈奇．中药药理研究方法学[M]．第１版.北京：人民卫生出版社，1993.119?120．

　　[7] 徐叔云．药理实验方法学[M]．第３版．北京：人民卫生出版社，2002.1757?1779．

　　[8] 李仪奎．中药药理实验方法学[M]．上海：上海技术出版社，1991.513?514．