正常结膜囊细菌培养397例分析
作者：曾树森 吴晓梅 宋建 曾昌洪 刘盛春
【摘要】 目的：调查不同人群正常结膜囊带菌情况及其对常用抗生素的敏感情况。方法：对4wk内未使用滴眼液和抗生素的397名受调查者，常规眼科检查排除泪囊、眼表、前节疾病后，进行结膜囊细菌培养和药物敏感试验。结果：＜12岁人群、＞60岁人群结膜囊带菌率明显高于12～60岁人群，高于城市。细菌培养阳性率为21.2%，共培养出13个菌种，84个菌株。葡萄球菌属最多，共54株（64.3%），其中表皮葡萄球菌43株（51.2%），金黄色葡萄球菌10株（11.9%）。革兰阳性细菌对万古霉素、呋喃坦啶、利福平敏感；大部分革兰阴性菌对复达欣、亚胺硫霉素、丁胺卡那霉素、妥布霉素敏感；对β-内酰胺类和喹诺酮类耐药菌株增多。结论：正常结膜囊可能带有细菌，并可致眼部感染。术前滴敏感抗生素眼液可减少结膜囊细菌，以防止眼部感染。
【关键词】 结膜囊 细菌培养 药物敏感试验
Analysis of bacterial culture results in 397 normal conjunctiva
Abstract AIM: To investigation the positive rate of bacterial culture of normal conjunctiva and the sensitivity to commonly used antibiotics among different kinds of people. METHODS: Sample were enrolled to separated from 397 normal eyes of 397 persons and they accepted no any eye drops, antibiotics in 4 weeks. Regular eye examination was performed to exclude the inflammations of the lacrimal sac, the surface and anterior segment of eyes. The bacteria on the conjunctiva were cultured and their sensibilities to antibiotics were tested. RESULTS: Patients (＜12 or ＞60 years) showed a significantly higher bacterial positive rate than did 12 to 60 age group. It was the same between urban and city. Bacterial positive rate was 21.2% in 397 eyes. There were 84 strains of bacteria which belong to 13 species. The most prominent was staphylococcus(54 strains,64.3%),in which there were 43 strains of staphylococcus epidermis(51.2%)and 10 strains of staphylococcus aureus (11.9%). The most gram positive bacteria to vancomycin, nitrofurantoin, rifampin and most gram negative bacteria to imipenem, ceftazidine, amikacin ,tobramycin were sensitive. The resistance strains of bacteria to b-lactams and quinolones were increased. CONCLUSION: Bacteria may be found in conjunctiva without any sign of infection.These bacteria may produce infectious inflammation. Sensible antibiotic eye drop can reduce the bacteria in the conjunctiva and prevent the postoperative infection.
· KEYWORDS: conjunctiva; bacterial culture; drug sensitivity test
0引言
结膜囊长期暴露于界、直接与皮肤相连，出生不久就可以有细菌共生，并随生活环境、年龄的变化而不断变化。由于抗生素的广泛应用,结膜囊内菌种、耐药性、药敏也在变化。了解结膜囊细菌的分布与变化,对合理选择抗生素细菌感染性眼炎症及术前的结膜囊清洁有着重要指导意义。本文就我院2005-04/2006-06对397例正常结膜囊细菌培养、药敏试验结果报告如下。
1材料和方法
1.1材料 2005-04/2006-06我科住院病员的家属和部分工作人员，自愿或监护人愿意接受调查者，共397例。男215例,女182例,其中＜12岁者44例,12～60岁204例，＞60岁者149例，年龄2.5～82，（平均54.3+14.3）岁。受试者采样前4wk未使用任何滴眼液和抗生素；常规裂隙灯检查排除眼睑、眼表、葡萄膜、泪囊炎症、眼睑和眼球畸形、有干眼病史者。
1.2方法 取样均由专门眼科医生进行。取材时嘱受试者头后倾，向上注视，用无菌棉签向后下方轻压下睑，以咽拭子轻压下睑结膜和下穹窿结膜，然后接种于肉汤增菌培养基，放于35oC恒温细菌培养箱培养72h，阳性标本及时转种巧克力琼脂、麦康凯琼脂平板和多粘菌素B血平板（购自郑州安图绿科生物工程有限公司），35oC培养24～48h分离纯化后鉴定。细菌鉴定通过美国德灵公司MicroScan微生物自动鉴定/药敏分析系统Walkaway-40进行。细菌鉴定在德灵公司专用的革兰阳性菌、革兰阴性菌鉴定板上进行。该仪器能同时鉴定细菌种类并检测出各种抗生素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration MIC)。药敏根据美国国家临床实验标准委员会(national committee for clinical laboratory standards NCCLS)标准由微生物分析仪操作。
统计学处理：用SPSS 13.0 行四格表的χ２检验，取P ＜0.05有统计学意义。
2结果
送检397份标本中，共培养出阳性细菌84株，分属13个菌属，阳性率21.2%。正常人结膜囊阳性菌株主要是革兰氏阳性细菌，占82.1%，其中表皮葡萄球菌51.2%，金黄色葡萄球菌11.9%，棒状杆菌属7.1%，微球菌属6%，肺炎链球菌和甲型链球菌各2.4%，溶血性链球菌1.2%；革兰阴性菌17.9%，其中绿脓假单胞菌6.0%，大肠埃希氏菌4.8%，淋球奈瑟氏菌3.6%,阴沟肠杆菌、产碱假单胞菌、少动假单胞菌各1.2%。不同年龄、居住区、不同性别人群带菌率及相应统计学结果详见表1。药敏情况见表2和表3。
3讨论
结膜囊因其直接与自然界接触、与皮肤连接而可能带有细菌，并且受环境、年龄、抗生素应用情况等因素的影响，培养结果差异较大[1-3]。抗生素的使用导致了新的耐药菌株产生[4-6]。近期重点转向眼部、全身非炎症性疾病患者等正常结膜细菌的比较研究，单独对正常人结膜囊细菌进行的研究较少。因此，我们对397例正常结膜囊细菌培养、药敏结果进行分析，以期发现本地区正常结膜囊细菌分布和药物敏感情况，为临床用药提供依据。
本组调查中，＜12岁者带菌率29.6%，多于超过60岁人群的27.5%，但差异无统计学意义（P ＞0.05）；＜12岁与超过60岁人群，结膜囊带菌率均高于12～60岁人群的14.7%，且差异有统计学意义（P ＜0.05），这种差异可能与不同年龄免疫力、泪液成分、泪液动力学、暴露环境、抗生素使用情况、皮肤和上呼吸道菌落的不同有关 [7,8]。农村人群带菌率26.9%，明显高于城市的16.8%（P ＜0.05）；男性的带菌率20.9%高于女性的21.4%，但这种差异无统计学意义。同时我们发现3例淋病奈瑟氏菌带菌者均为青年女性，结合其生活史，其原因除了结膜囊暴露环境、抗生素使用情况的差异，可能还与生活方式及卫生状况有关。
报道正常结膜囊细菌带菌率为20.6%～98.8%[9 10]。本组人群中共培养出13种菌属，细菌培养阳性率为21.2%，前3位为表皮葡萄球菌（51.2%）、金黄色葡萄球菌（11.9%）、棒状杆菌属（7.1%），这与王忠海等[3]的细菌培养阳性率相近，占首位的均为表皮葡萄球菌，但培养出的菌属多于其结果；居第2位的金黄色葡萄球菌带菌率与Miüo等[9]的报道一致。革兰阴性杆菌中绿脓假单胞菌最多。绿脓假单胞菌、淋病奈瑟氏菌与国内同类文献[11,12]比较有增高趋势。此外还发现了微球菌属，肺炎链球菌和甲型链球菌各，溶血性链球菌，棒状杆菌属等革兰阳性菌，以及大肠埃希氏菌淋、阴沟肠杆菌、产碱假单胞菌、少动假单胞菌等革兰阴性菌。
既往认为正常人眼部的这些菌属属于正常菌群，无致病性或偶有致病性，现在已有其成为化脓性眼内炎首要致病菌的报道[11]。有文献报道在细菌性眼内炎、细菌性角膜溃疡、睑缘炎、结膜炎等眼部感染性疾病中，表皮葡萄球菌占多数[4,13,14]；部分细菌性眼内炎致病菌与其结膜囊分离细菌一致，术前结膜囊滴抗生素眼液虽不能达到结膜囊完全无菌，但可以明显减少结膜囊细菌[15]。通常认为属于条件致病菌的绿脓杆菌，随着角膜屈光手术的广泛开展，发病率有增加[16]。这与本调查中两种细菌分别占革兰阳性、阴性第一位的结果相一致，同时也表明条件致病菌与致病菌之间并没有本质的区别。
目前眼部及全身使用的抗生素品种繁多，我们选用了美国德灵公司提供的常用药物分别对革兰阳性和革兰阴性细菌进行药敏试验。结果表明革兰阳性细菌对万古霉素、呋喃坦啶、利福平敏感；表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、棒状杆菌属对使用率较高的多种抗生素耐药菌株也较多；尤其是表皮葡萄球菌，对常用的14种β-内酰胺类、大环内酯类、磺胺都出现多量耐药菌株。革兰阴性细菌中居前3位的绿脓假单胞菌、大肠埃希氏菌、淋病奈瑟氏菌对复达欣、亚胺硫霉素、哌拉西林/三唑巴坦敏感；对丁胺卡那霉素、妥布霉素、菌克单耐药菌株也较少。绿脓假单胞菌对多种β-内酰胺类药物耐药。正常结膜囊细菌对临床常用药物耐药性增加，对不常用抗生素耐药性降低，表明细菌耐药性的发生与临床用药密切相关，大量、广泛使用的抗生素将导致结膜囊内正常的细菌对这些抗生素耐药性的增加[4-6,11]。
正常结膜囊细菌带菌及药敏的调查，对于预防眼内炎或感染发生后细菌培养结果回报前的用药具有指导意义[17]。由于利福平和万古霉素对革兰阳性细菌高度敏感，亚胺硫霉素和丁胺卡那霉素对革兰阴性细菌的敏感性，局部滴眼首选利福平和丁胺卡那霉素，全身使用宜首选万古霉素和亚胺硫霉素。
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