毛细支气管炎患儿血清细胞因子水平变化及分析
作者：母发光，张剑波，李敏，何海兰，翟雪松
【摘要】 目的：探讨细胞因子在毛细支气管炎中的发病机制。方法：采用双抗体夹心ELISA法测定毛细支气管炎组32例患儿和对照组20例正常儿童血清中IL?4、IL?10、TNF?α水平。结果：血清中IL?4、TNF?α水平，毛细支气管炎组显著高于对照组（P<0.05），而IL?10水平毛细支气管炎组显著低于对照组（P<0.05）。血清中IL?4与TNF?α水平之间呈正相关，相关系数r=0.70（P<0.001）。IL?10与IL?4、TNF?α之间无相关关系（P>0.05）。结论：毛细支气管炎患儿血清中IL?4、IL?10、TNF?α水平检测结果与哮喘患儿相近，两者有相似的细胞因子紊乱，细胞因子在毛细支气管炎的发病中起着重要的作用。
【关键词】 毛细支气管炎；白细胞介素?4；白细胞介素?10；肿瘤坏死因子α
毛细支气管炎是婴幼儿时期较常见的下呼吸道感染性疾病。呼吸道合胞病毒是最常见的病原体，首次发作后5年内30%～40%的患儿成哮喘，严重危害儿童健康［1］。其发病机制仍未阐明，但有关研究已经证实支气管哮喘存在着细胞因子失衡［2］，而毛细支气管炎与哮喘有着相似的病理生理过程。因此，研究毛细支气管炎时细胞因子IL?4、IL?10、TNF?α水平的改变，对探讨毛细支气管炎的发病机制，预防毛细支气管炎发展成为哮喘具有重要意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象
毛细支气管炎组(毛支组)32例为我院2005年10月～2006年3月毛细支气管炎急性期住院患儿，均符合毛细支气管炎的诊断标准［3］，男18例，女14例，年龄3月～1.2岁，平均(6.4±3.1)月。正常对照组20
作者简介：母发光（1969～），男，大学本科，主治医师，主要从事小儿内科疾病研究，E?mail: mufaguang@vip.sina.com。例为同期健康体检儿童，男13例，女7例，年龄3月～1.4岁，平均(6.9±3.8)月。以上研究对象均无个人和家族过敏史（包括哮喘、湿疹、鼻炎）。
1.2 方法
1.2.1 标本采集
全部患儿均在发病72 h内入院，采血时间在次日清晨采静脉血3 mL，置于含10% EDTANa 40 μL和500个单位抑肽酶的试管中混匀，3 000 r/min离心10 min后置于?20 ℃冰箱保存以备统一检测。同期完成正常对照组标本采集。
1.2.2 细胞因子测定
均采用双抗体夹心ELISA法。IL?4试剂盒由美国GENZYME公司提供，IL?10试剂盒购自深圳晶美生物制品公司，TNF?α试剂盒由美国Sigma chemical Co. 提供。仪器采用美国伯乐公司酶标仪（Bio?Rad Benchmark）。以上检测由专人严格按说明书进行操作。
1.3 统计方法
用SPSS 11.0软件包进行统计学处理，数据以±s表示。组间比较采用独立样本t检验。各指标相关关系采用Pearson相关分析。P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 两组血清中IL?4、IL?10、TNF?α检测结果
结果见表1。血清中IL?4、TNF?α水平，毛细支气管炎组显著高于对照组（P<0.05），而IL?10水平毛支组显著低于对照组（P<0.05）。
表1 各组血清中IL?4、IL?10、TNF?α水平比较（略）
2.2 三种细胞因子间的相关分析
血清中IL?4与TNF?α水平之间呈正相关，相关系数r=0.70（P<0.001）。IL?10与IL?4、TNF?α之间无相关关系（P>0.05）。
3 讨论
毛细支气管炎由病毒感染引起，但临床表现及转归与普通呼吸道感染不同，部分患儿转为哮喘。由于喘息和高IgE血症是毛细支气管炎和哮喘的共同特点，推测在免疫调节的细胞因子水平可能有相似之处。已有大量的动物实验和人体研究证实，哮喘患者存在机体免疫功能异常。IgE升高、Th1/Th2功能失衡，其中Th2功能异常增高而致Th2类细胞因子IL?4、IL?5、IL?6、IL?10等促炎因子变化，诱导气道炎症反应［4，5］。TNF?α与其他细胞因子类似，参与气道炎症反应［6］。
IL?4是T细胞分泌的一种促进B细胞分化、增殖及其活化的细胞因子。它在刺激和促进B细胞合成IgE的过程中具有关键作用，诱导IgE产生增加，从而介导哮喘的变态反应［7］，因而哮喘患儿常伴IgE增高。另一方面IL?4作为一种重要的非特异性炎症因子参与肺部的炎症病理过程。本研究显示，毛细支气管炎患儿IL?4水平显著高于正常儿童，因此可以说明毛细支气管炎与哮喘存在相似的免疫功能异常。
IL?10是近年发现的一个重要的Th2类细胞因子，主要由单核巨噬细胞、T细胞、B细胞产生，具有很强的抗炎及免疫抑制作用。它既能抑制Th1细胞因子的释放，又能抑制Th2细胞增生和细胞因子的产生，是对抗气道炎症反应的抗炎因子［8］，在哮喘发病中具有减缓气道炎症发生的作用。临床研究发现，哮喘患者肺泡灌洗液中IL?10浓度明显低于正常人，哮喘患者全身及局部IL?10的减少被证实与发病有关［9，10］。另有实验发现，转基因鼠感染RSV后，鼻腔产生的IL?10对RSV有明显的抑制作用［11］。RSV感染患儿气道分泌物中的IL?10水平与病情呈负相关［12，13］。本研究结果显示，毛细支气管炎患儿血清中IL?10水平显著低于正常儿童，与上述研究结果相符合，进一步说明毛细支气管炎与哮喘有相似的发病机制。IL?10有减轻气道炎症的作用，这可能对哮喘和毛细支气管炎的有潜在应用价值。
TNF?α是由单核巨噬细胞产生的具有广泛生物学活性的多肽类调节因子，与其他细胞因子一样，作为炎症介质参与机体免疫和炎症反应。TNF?α广泛分布于大小气道参与气道慢性炎症过程［9］。炎症反应主要通过血管内皮细胞增加某些粘附分子（如ICAM?1）的表达，诱发血小板活化因子（PAF）及IL?1的释放，而促进炎症细胞粘附、游走、浸润及中性粒细胞脱颗粒。同时也通过自分泌方式作用于单核巨噬细胞本身而释放炎症介质（白三烯、前列腺素等）加剧炎症反应，导致组织损伤。此外TNF?α可促进IL?8的分泌，二者协同加剧炎症反应［14］。本研究结果显示，毛细支气管炎患儿血清中TNF?α水平显著高于正常儿童且与IL?4呈正相关，表明TNF?α与IL?4是构成气道炎症的复杂细胞因子的重要组成部分，两者相互促进，加速局部炎症的发生，参与毛细支气管炎和哮喘的发病。
由此可见，毛细支气管炎患儿血清中IL?4、IL?10、TNF?α水平检测结果与哮喘相近，两者有相似的细胞因子紊乱，细胞因子在毛细支气管炎的发病机制中起着重要的作用。病毒感染是毛细支气管炎患儿细胞因子异常的诱因，随着病情的好转可恢复正常。而哮喘的诱因较多，气道慢性炎症反复发作，细胞因子的异常可持续存在。毛细支气管炎和哮喘两者的内在联系有待进一步研究,以为早期防治毛细支气管炎向哮喘转化提供理论依据。
【】
［1］Martin MA. Respiratory syncytial virus infection and asthma ［J］. Allergol Immunopathol, 2001, 29: 140?146.
［2］吴福玲, 冯学斌, 将少峰. 支气管哮喘相关细胞因子的研究进展［J］. 滨洲医学院学报, 2004, 27(2): 122?124.
［3］胡亚美, 江载芳. 诸福棠实用儿［M］. 第7版. 北京: 人民卫生出版社, 2002: 1199?1201.
［4］Len fant C. Global strategy for asthma management and prevention ［S］. Maryland: National Institute of Health (USA), 1995: 6.
［5］符 洲, 李成荣, 杨锡强, 等. 毛细支气管炎患者细胞因子异常与发病机理研究［J］. 中华微生物学与免疫学杂志, 1998, 18(1): 57.
［6］Lampinen M, Carlson M. Hakansson LD, et al. Cytokine regulated accumulation of eosinophils in inflammatory disease ［J］. Allergy, 2004, 59(8): 793?805.
［7］Savelkoul HFJ, Ommen R. Role of IL?4 persistent IgE formation ［J］. Eur Respir J, 1996, 9(Suppl22): 67.
［8］Chung F. Anti?inflammatory cytokines in asthma and allergy: interleukin?10, interleukin?12, interferon?gamma ［J］. Mediators inflamm, 2001, 10(2): 51?59.
［9］ Bolish L, Aaronsa A, Rumbyrt J, et al. IL?10 regulation in normal subjects and patients with asthma ［J］. J Allergy Clin Immunol, 1996, 97: 1288?1296.
［10］Oh JW, Seroogy CM, Meyer EH, et al. CD4 T?helper cells engineered to produce IL?10 prevent allergen?induced airway hyperreactivity and inflammation ［J］. J Allergy Clin Immunol, 2002, 110(3): 460?468.
［11］Ruan Y, Okamoto Y, Matsuzaki Z, et al. Suppressive effect of locally produced interleukin?10 on respiratory syncytial virus infection ［J］. Immunology, 2001, 104(3): 355?360.
［12］Sheeran P, Jafri H, Carubelli C, et al. Elevated cytokine concentration in the nasopharyngeal and tracheal secretion of children with respiratory syncytial virus disease ［J］. Pediatr Infect Dis J, 1999, 18(2): 115?122.
［13］Monocyte. IL?10 production during respiratory syncytial virus bronchiolitis is associated with recurrent wheezing in a one year follow study ［J］. Am J Respir Crit Care Med, 2000, 161: 1518?1523.
［14］Griffths CEM, Voor hees JJ, Nickoloff BJ. Characterization of intercellular adhesion molecular?1 and HLA?DR expression in normal and inflamed skin:modulation by recombinant interferon and tumor necrosis factor ［J］. J Am Acad Dermatol, 1989, 20: 617?622.
