何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响
作者：熊平源 王强 郭凯文 唐朝晖 白惠卿
【摘要】 目的：了解何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响。方法：采用溶血素测定法检测何首乌对老龄大鼠溶血素抗体产生的影响；参照LDH法检测何首乌对老龄大鼠NK细胞活性的影响；采用 3H?TdR掺入法检测何首乌对老龄大鼠淋巴细胞增殖活性的影响；采用姬姆萨染色法检测老龄大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果：药物实验组与老龄对照组比较，溶血素抗体产生水平明显增加(P<0.01)；NK细胞的细胞毒活性明显增强(P<0.01)；T、B淋巴细胞的转化增殖活性增强（P<0.05；P<0.01）；腹腔巨噬细胞吞噬功能也明显增强。结论：何首乌能增强老龄大鼠的免疫功能。
【关键词】 何首乌； 溶血素抗体； NK细胞； 淋巴细胞； 腹腔巨噬细胞
医学认为，何首乌（Tuber Fleeceflower Root）具有延缓衰老、降低血脂、保护肝脏及抗菌消炎等作用。有报道，何首乌可延缓胸腺退化、萎缩，并增加胸腺重量。何首乌不仅可增强小鼠T、B淋巴细胞对非特异性有丝分裂原的反应性，而且可增强小鼠对抗原的特异性细胞免疫及体液免疫应答，具有免疫增强作用［1］。本研究就何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响进行了研究。
1 材料
1?1 动物分组 27月龄清洁级雄性SD老年大鼠45只,由武汉科技大学医学院实验动物中心提供，随机分为青年对照组(YC)、老年对照组（OM）、老年实验组，每组15只。实验组给予何首乌水提物灌胃，YC组和OM组给予蒸馏水灌胃，灌胃时间为连续3个月［2］。
1?2 主要仪器Ls?5801型液体闪烁计数器，美国Backman公司产品；DG3022型酶联免疫测定仪，华东管厂产品；CO2培养箱，美国NaP Co.产品；DYQ?III型微量多头细胞收集器，绍兴医疗器械厂产品。
2 方法与结果
2?1 何首乌对老龄大鼠体液免疫功能的影响 采用溶血素测定法［3］。取2×108个/mL绵羊红细胞，按每只鼠0.5mL腹腔注射,免疫4d后,将小鼠处死,摘除小鼠眼球,将每只小鼠血分别滴至小试管内,室温放置1h,使血清充分渗出后离心,上层血清用生理盐水稀释后取1mL,再加入0.5mL绵羊红细胞，置冰浴中冷却，加入1mL补体,离心，取上清液1mL及3mL都氏度剂,震荡均匀，放置10min，于540nm波长下比色，测定样品及绵羊红细胞半数溶血时的OD540值。结果见图1。
图1 何首乌对老龄大鼠溶血素抗体的影响（略）
图1结果显示，老年对照（OM）组与青年对照 (YC) 组比较，抗体产生水平明显低下(P<0.05)；而药物实验组与老龄对照组比较, 则抗体产生水平明显增加(P<0.01)。
2?2 NK细胞活性测定参照LDH法，取脾细胞悬液（2×107/mL）0.25mL作为效应细胞,加入YAC?1靶细胞悬液（2×106/mL）0.05 mL于96孔培养板中，,使效靶比为50∶1。同时设效应细胞和靶细胞对照, 每份样品设3个复孔,置37℃ 5%CO2培养箱中培养6h。加入 3H?TdR 0.5μCi/孔，培养6h后收获，置于液体闪烁仪中测cpm值［4，5］。结果见图2。
图2 何首乌对老龄大鼠NK细胞活性的影响（略）
图2结果显示，老年对照（OM）组与青年对照 (YC) 组比较，NK细胞活性明显低下(P<0.05)；而药物实验组与老龄对照组比较, 则NK细胞活性明显增强(P<0.01)。
2?3 何首乌对老龄大鼠脾细胞增殖的影响无菌取大鼠脾细胞,洗涤两次,用含10%小牛血清的IMDM培养液调细胞浓度至5×106/mL,加入96孔培养板每孔100μL。然后分别加入ConA和LPS 100μL（每份样品设3个复孔），置CO2孵箱培养68h，培养结束前8h掺入3H?TdR2.85μBq/孔,收获细胞,测定闪烁值［6］。
图3 何首乌对老龄大鼠脾细胞增殖活性的影响（略）
图3结果显示, 何首乌能增加老龄大鼠脾细胞对ConA和LPS的增殖活性,说明何首乌对老年大鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的转化增殖有促进作用。其中药物实验组对ConA的增殖活性，与老年对照组比较P<0.01；而药物实验组对LPS的增殖活性，与老年对照组比较P<0.05。
2?4 何首乌对老龄大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响实验前3天，腹腔注射2%糖原2mL作为巨噬细胞诱导剂。测时脱颈椎处死小鼠，用pH6.5~pH6.7的无钙镁Hank′s液2mL洗出全部腹腔巨噬细胞，取1mL腹腔洗液置于5mL离心管中，加入10%鸡红细胞0.2mL，插入5×20mm2盖玻片条，经37℃30min后取出，洗涤，固定，姬姆萨染色，油镜下计数巨噬细胞吞噬百分率，并其吞噬指数［7］。结果见表1。
表1 何首乌对老龄大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响（略）
注：* 与青年对照组比较，P<0.001；** 与老年对照组比较，P<0.01。
表1结果显示，与青年对照组比较，老年对照组腹腔巨噬细胞吞噬功能明显低下(P<0.001)；与老年对照组比较，药物实验组腹腔巨噬细胞吞噬功能明显增强(P<0.01)。
3 讨论
免疫衰老状态下的机体，脾淋巴细胞过度凋亡，其免疫应答功能下降、细胞因子水平低下、免疫监视功能减退。有报道提示，随着衰老，每一种细胞因子不同分泌量的变化都对免疫衰老进程有不同影响，如Th1类细胞因子减少，Th2类细胞因子分泌增多，伴随着这种Th1/ Th2的不平衡可显著刺激Th3呈高分泌状态，导致机体的抗免疫衰老机制受到严重干扰［2］。衰老状态下，B细胞的成熟过程明显减慢，成熟周期延长，其各亚型的活力不同程度下降，产生抗体的能力及免疫应答反应亦随增龄而降低；老年机体胸腺细胞数减少，T细胞增殖力也低下，在T细胞亚群中，胸腺细胞毒型T细胞（CTL）的免疫杀伤活性明显下降，对同种细胞的清除作用也显著低下，辅助型T细胞的数量随胸腺退化明显减少，其成熟速度也减慢，增殖活力伴随下降。本研究结果显示，药物实验组与老龄对照组比较,抗体产生水平明显增加(P<0.01)。药物实验组对ConA的增殖活性与老年对照组比较明显增加(P<0.01)；药物实验组对LPS的增殖活性亦增强，与老年对照组比较，P<0.05。说明何首乌对老年大鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的转化增殖均有促进作用，并能促进抗体产生。天然杀伤细胞（NK细胞）具有直接杀伤病毒感染细胞与肿瘤细胞活性，且病毒感染又可诱导NK细胞产生干扰素，干扰素则反馈促进NK细胞的细胞毒作用，增强其对感染细胞的再杀伤活性。而免疫衰老状态下的机体，骨髓与脾产生的NK细胞数减少。本研究结果表明，药物实验组与老龄对照组比较, NK细胞活性明显增强(P<0.01)。此外，免疫衰老状态下，机体巨噬细胞的代谢活力亦表现下降。巨噬细胞是体内执行非特异性免疫作用的效应细胞，同时，在特异性免疫应答的各个阶段也起重要作用，主要发挥吞噬抗原、分泌淋巴因子、促进T细胞与B细胞增殖等免疫作用。本结果研究显示，与老年对照组比较，药物实验组巨噬细胞的吞噬功能明显增强P<0.01。综上所述，何首乌能增强老龄大鼠的免疫功能。关于何首乌对衰老机体的免疫调控值得进一步研究。
【】
1 秦凤华，谢蜀生，张文仁，等.何首乌对小鼠免疫功能的影响. 免疫学杂志,1990， 6（4）：252~254?
2 刘小雨 沈自尹 王琦，等. 淫羊藿总黄酮(EF)对老龄大鼠Th1、Th2、Th3细胞的调节作用. 免疫学杂志,2005，21（11）：842~845?
3 石磊,谭岩,刘志强，等.虎眼万年青多糖对小鼠免疫功能的调节作用. 中国免疫学杂志, 2002，18（11）：799~803?
4 刘杰麟，章灵华，钱玉昆.枸杞多糖对S180荷瘤小鼠的免疫抑瘤作用. 中国免疫学杂志,1996，12（2）：115~117?
5 Kumagai K，Itoh K，Suzuki R， et al.Studies of murine large granular lymphocytes 1,identification as effector cells in NK and Kcytotoxicities.J Immunol，1982，129：88?
6 侯芳玉,孙延波,陈飞，等.长白山产软枣猕猴茎多糖免疫药理作用的研究. 中国中药杂志,1995，20(1)42~44?
7 王金华，熊玉兰，屠国瑞，等. 桂附地黄丸与其口服液的免疫等作用比较. 中国中药杂志,1993，18(4)234~235?
