HPLC法测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量
作者：袁梦哲 袁文静 王超 许伟华
【关键词】 HPLC
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的方法。方法：色谱柱为Kromasil C18 (250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇∶水（1∶1），检测波长为245nm，流速为0.6ml・min-1。结果：对乙酰氨基酚和咖啡因的平均回收率分别为99.92%和99.74%；RSD分别为0.36%和0.43% (n=5)。
关键词：高效液相色谱法；对乙酰氨基酚；咖啡因；氨咖黄敏胶囊
氨咖黄敏胶囊曾用名速效伤风胶囊，是由对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏和人工牛黄组成的抗感冒复方制剂。其质量标准收载于国家药品标准［1］。现质量标准对主药对乙酰氨基酚和咖啡因的含量分别采用提取后滴定的方法。本研究采用高效液相色谱法同时测定这两种组分的含量，该法快速、简便、准确、重复性好，与标准法比较，结果较为满意，可适用于含量的测定。
1 仪器与试药
日本岛津LC10ATvp型液相色谱仪，SPD10Avp紫外检测器，N2000型色谱数据工作站，普利赛斯分析天平。对乙酰氨基酚（批号：100018200107）、咖啡因（批号：171215200305）对照品（购自药品生物制品检定所）；氨咖黄敏胶囊（市售品）；甲醇是色谱纯，水为蒸馏水。
2 色谱条件与系统适用性实验
色谱柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶水（1∶1）；检测波长：245nm；流速：0.6ml・min-1；柱温：室温；理论塔板数按咖啡因峰不低于5000，分离度大于1.5。
3 线性关系
精密称取对乙酰氨基酚对照品500.90mg、咖啡因对照品30.71mg，分别置于50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取上述储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml分别置于5个25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，按上述色谱条件，取20μl进样，记录色谱图（图1），以峰面积Y对对照品进样量（μl.ml-1）作线性回归。结果对乙酰氨基酚、咖啡因的回归归方程（n=5）分别为：Y=12 524.9X＋18 996 437 г=0.9962Y=71 704.2X－ 395 298г=0.9998
线性范围分别为：200.36~1001.80、12.28~61.42μg.ml-1，实验表明两种组分峰面积与进样量线性关系良好。
4 加样回收率试验
精密称取已知含量的胶囊（批号：040808）内容物适量（约相当于对乙酰氨基酚200mg）5份，置于50ml量瓶中，加流动相适量，振摇，溶解，再分别精密加入线性关系中的各对照品储备液5ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。照样品测定项下的方法测定加样回收率，测得对乙酰氨基酚和咖啡因的加样回收率（n=5），结果见表1。表1 回收率测定结果（略）
5 精密度试验
用线性关系考察中对乙酰氨基酚、咖啡因浓度分别为0.6、0.036mg・ml-1的对照品溶液，重复进样5次，结果对乙酰氨基酚、咖啡因峰面积RSD分别为0.97%、0.86%。
6 重复性试验
取同一批号样品(批号:040801)适量（约相当于对乙酰氨基酚500mg）5份，精密称定，按样品测定项下的方法测定对乙酰氨基酚、咖啡因的含量，RSD分别为0.81%、0.96%。
7 样品含量的测定
取本品10粒，精密称取内容物适量（约相当于对乙酰氨基酚500mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置于25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图(图2)，按外标法以峰面积，测得结果与国家药品标准［1］相比较，结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)注: P>0.1，两种方法无显著性差异。
8 结果与讨论
81 检测波长的选择
因对乙酰氨基酚量较大，在243246nm波长范围内有最大吸收，故选择245nm为检测波长。
82 流动相的确定
曾试用甲醇磷酸二氢钾 乙腈0.05mol/L的磷酸二氢胺及甲醇水不同比例的流动相系统进行考察，最后选用甲醇水（1:1）作为流动相，出峰快，分离好。
83 标准法中对乙酰氨基酚含量采用加热回流提取后用外指示剂法滴定，操作繁琐，终点不易判断；咖啡因含量采用氯仿提取后滴定，操作也比较麻烦且氯仿毒性较大，挥发性强。本研究采用高效液相色谱法同时测定两种组分的含量，操作简单，结果准确，与标准法测定结果比较无显著性差异。
1 国家药品标准. 化学药品地方标准上升国家标准第三册，2002，263
