环氧化酶?2及表皮生长因子受体在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

【摘要】  目的 探讨环氧化酶?2(COX?2)与表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与肺癌发生的关系。方法 采用免疫组化(SP)法检测56例NSCLC和20例正常肺组织中COX?2与EGFR的表达。结果 56例NSCLC组织中，COX?2与EGFR表达阳性率分别为64.2%和67.8%，显著高于正常肺组织(P<0.01)，COX?2与EGFR表达与临床分期、病理分级、组织学分型和淋巴结转移密切相关(P<0.05)，肿瘤分期愈晚，细胞分化越差，淋巴结转移越高，COX?2与EGFR表达阳性率越高，腺癌中COX?2表达明显高于鳞癌，鳞癌中EGFR表达高于腺癌(P<0.05)。结论 COX?2与EGFR在NSCLC中异常表达说明其在肺癌发生发展中有重要作用，可作为判断NSCLC的生物学行为及估计预后的指标。

【关键词】  环氧化酶；表皮生长因子受体；非小细胞肺癌

　　Expressions of cyclooxygenase?2 and epidermal growth　factor receptor in non?small cell lung cancer

　　ABSTRACT: Objective  To study the expressions of cyclooxygenase?2 (COX?2) and epidermal growth factor receptor (EGFR) in tumor tissues and explore the effect of COX?2 and EGFR in NSCLC development. Methods  The expression of COX?2 and EGFR was detected by immunohistochemical technique in 56 cases of non?small cell lung cancer (NSCLC) and in 20 cases of normal lung tissues. Results  The expression of COX?2 and EGFR in NSCLC was significantly higher than that in normal lung tissues (P<0.01), the positive expression rate of COX?2 and EGFR being 64.2% and 67.8%, respectively. The expression of COX?2 and EGFR in NSCLC was associated with clinical stage, histologic grade, tumor pathological type and lymponode metastasis (P<0.05). The expression of COX?2 and EGFR in stage III and stage IV of NSCLC was significantly higher than that in stage I and stage II of NSCLC. The expression of COX?2 and EGFR in the poorly?differentiated NSCLC was significantly higher than that in the well?differentiated NSCLC, and lymponode metastasis in NSCLC was higher than non?lymponode metastasis(P<0.05). The expression of COX?2 in adenocarcinoma cell was obviously higher than that in squmaous cell carcinoma; the expression of EGFR in squmaous cell carcinoma was higher than that in adenocarcinoma cell (P<0.05). The positive correlation was found between COX?2 and EGFR. Conclusion  The experiment suggests that COX?2 and EGFR play roles in oncogenesis and progression of NSCLC. Therefore, the expression of COX?2 and EGFR seems to be a useful tumor marker for patients with NSCLC and can be used to evaluate the tumor biological behavior and prognosis.

　　KEY WORDS: cyclooxygenase; epidermal growth factor receptor; non?small cell lung cancer

　　肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率呈明显上升趋势，已位居肿瘤第一位。近年来发现环氧化酶?2(cyclooxygenase?2, COX?2)与肺癌的发生发展密切相关[ 1 ]。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，属于I型受体酪氨酸激酶超家族的成员之一，EGFR信号转导通道的激活与细胞恶性转化过程相关[ 2 ]。本研究采用免疫组化(SP)法检测人非小细胞肺癌组织中COX?2和EGFR的表达，探讨其在肺癌发生发展过程中的作用。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  标本来自我院肺癌切除标本和气管镜活检的非小细胞肺癌(non?small cell lung cancer, NSCLC)癌组织56例，其中腺癌22例，鳞癌34例；男性42例，女性14例，年龄38-75岁，中位年龄58岁，所有患者均未接受化疗、放疗等特殊。按WHO 2000年标准行病分组：低分化癌19例，中高分化37例，以1977年UICC标准进行TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期13例，Ⅲ期18例，Ⅳ期20例。取材常规100mL/L甲醛固定、石腊包埋，切片厚度5μm，取同期手术非肿瘤病例的肺组织20例作为对照组。

　　1.2  试剂与方法  山羊抗人COX?2多克隆抗体(美国Santa Cruz公司产品)，VEGF单抗由北京中山生物技术有限公司提供，操作按照试剂盒说明书进行。采用辣根过氧化物酶标记SP法。标本经100g/L多聚甲醛固定，石腊包埋后连续切片(5μm)，常规脱腊至水，30mL/L过氧化氢封闭，微波炉抗原修复后加入1∶100稀释的COX?2多克隆抗体4℃过夜，二抗置室温下15min，加入辣根酶标记的链霉菌卵白素工作液静置15min，PBS漂洗后DAB显色，苏木精复染，逐级乙醇脱水，透明树脂封片。

　　1.3  结果判定  以PBS代替一抗设定为阴性空白对照，同时用已知阳性标本作为阳性对照。COX?2、EGFR蛋白主要位于细胞浆中，胞浆中显示黄色颗粒者为阳性表达，COX?2及EGFR表达以细胞染色强度和细胞阳性百分率进行判定[3]。随机选择5个高倍视野(×400)进行判断：无染色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分，细胞阳性率<10% 0分，10%-25% 1分，26%-50% 2分，>50% 3分，上述两项相加，0分为阴性(-)，1-2分为弱阳性(1+)，3-4分为中等阳性(2+)，5-6分为强阳性(3+)。

　　1.4  统计学处理  应用SPSS 11.0统计学软件进行统计分析，率的比较采用χ2检验。相关分析采用person correlation法，P<0.05为差异有显著性。

　　2  结果

　　2.1  NSCLC组织中COX?2和EGFR的表达  见表1。

　　表1  NSCLC与对照组COX?2和EGFR蛋白表达的比较（略）

　　Table 1  The expression of COX?2 and EGFR in NSCLC and normal lung tissues

　　*P<0.01 vs. control group; NSCLC: non?small cell lung cancer

　　2.2  COX?2、EGFR蛋白表达与NSCLC临床病理特征的关系  COX?2、EGFR在NSCLC组织中表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05)，与TNM分期、组织学类型、肿瘤分化程度和有无淋巴转移有关(P<0.05)。在NSCLC组织中，COX?2、EGFR蛋白表达，III、IV期肺癌显著高于I、II期；低分化癌表达明显高于高分化肺癌；有淋巴结转移肺癌高于无淋巴结转移者，腺癌COX?2蛋白高于鳞癌，鳞癌EGFR表达高于腺癌(P<0.05，表2)。

　　表2  NSCLC病理特征与COX?2、EGFR蛋白表达的关系（略）

　　Table 2  The relationship between COX?2, EGFR and clinicopathological characteristics of NSCLC

　　2.3  COX?2与EGFR表达的相关性  有65%的NSCLC病例COX?2与EGFR表达一致(同时阳性或同时阴性)，两者呈正相关关系(r=0.354，P<0.05)。

　　3  讨论

　　环氧化酶(cyclooxygenase, COX)是前列腺素合成中的一个重要限速酶。COX?2 是可诱导型表达蛋白，被认为是快速反应基因，定位于核膜与内质网，仅在细胞受到刺激时迅速合成，静息时不表达。COX?2主要在肿瘤组织中表达，在正常组织中很少表达[4]，近年来研究发现，COX?2在肺癌发生中有重要作用，COX?2在正常肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞未见表达或弱表达，而在支气管上皮的癌前病变和已癌变的支气管上皮表达增强[5?6]。COX?2与肺癌发生发展关系密切，可能是通过促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡、促进肿瘤新生血管形成等机制发挥作用的[7?8] 。EGFR是原癌基因C?erb?1(HER?1)的表达产物，具有酪氨酸激酶活性。EGFR与配体表皮生长因子、转化生长因子结合后可激活受体酪氨酸激酶，导致受体本身及细胞内酪氨酸残基的磷酸化，从而引起细胞分裂增值[9?12]，Piyathilake[13]用免疫组化检测肺癌组织中EGFR发现存在高表达。EGFR的高表达可以促进肿瘤细胞的增殖、肿瘤血管生成、黏附、侵袭、转移，提示患者预后不良[14]。Milas等[15]在2003年用免疫组化法检测了29例非小细胞肺癌脑转移患者肿瘤组织中EGFR、COX?2与Bax，它们均与肺癌淋巴结转移有关。本研究发现在NSCLC组织中，COX?2与EGFR蛋白表达阳性率分别为64.2%和67.8%，显著高于正常对照组(P<0.05)，III、IV期时COX?2与EGFR蛋白表达明显高于I、II期，低分化肺癌显著高于中高分化癌，有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。提示NSCLC分期愈高，病情愈晚，细胞分化程度愈差；有淋巴结转移者，COX?2与EGFR蛋白表达率愈高。另外，肺腺癌COX?2表达比鳞癌高，可能是腺癌比鳞癌细胞更具有早期血液转移的生物学特点[13?17]，肺鳞癌EGFR表达阳性率76.5%，显著高于腺癌(P<0.05)。这种特点有利于肺鳞癌和腺癌的鉴别。这些结果表明检测COX?2与EGFR表达对判断肺癌生物学行为和估计预后有一定的临床价值。COX?2与EGFR蛋白在非小细胞肺癌中呈现高表达，且在癌前病变及癌的早期阶段已经发挥作用。对COX?2与EGFR的作用机制进行深入研究有助于进一步探索肺癌发生发展的，而且COX?2与EGFR有可能作为新的靶点，对非小细胞肺癌的早期防治具有重要意义。

【参考】
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