E
作者：赵军，姚建锋，马建仓，赵光辉，罗亮
【关键词】 E
摘要：目的 研究Ecadherin、增殖细胞核抗原(PCNA)在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化方法对59例胰腺癌组织的Ecadherin、PCNA进行检测。结果 Ecadherin在胰腺癌组织比相应的癌旁正常胰腺组织中表达明显减低，高表达率仅为13.6%(8/59)，且各组间(与癌组织分化程度、淋巴结转移以及临床分期)Ecadherin表达差异有统计学意义(P<0.05)；PCNA在胰腺癌组织比相应的癌旁正常胰腺组织表达明显增高，强阳性表达率为67.8%(40/59)，且各组间PCNA表达差异有统计学意义(P<0.05)；在胰腺癌组织中，Ecadherin与PCNA表达呈负相关(P<0.05)。结论 Ecadherin与PCNA异常表达与胰腺癌的分化、增殖、侵袭以及转移有密切的关系。
关键词：E钙黏附素；增殖细胞核抗原；胰腺癌
Expression of Ecadherin and PCNA in pancreatic adenocarcinoma and their clinic significance
ABSTRACT: Objective To study the expression of Ecadherin and PCNA in pancreatic adenocarcinoma and their clinical significance. Methods Ecadherin and PCNA in 59 cases of pancreatic adenocarcinoma was studied by immunohistochemistry. Results The decreased expression of Ecadherin in pancreatic adenocarcinoma was significantly lower than that in normal pancreas; the higher rate of expression only was 13.6%(8/59); and the expression of Ecadherin in various groups was statistically significant with the differentiation of carcinoma; the metastasis of lymph nodes and the clinical stages(P<0.05); the increased expression of PCNA in pancreatic adenocarcinoma was significantly higher than that in normal pancreas; the higher positive rate of PCNA was 67.8%(40/59); and the expression of PCNA in various groups was significant in statistics with the differentiation of carcinoma; the metastasis of lymph nodes and the clinical stages(P<0.05); the correlation between Ecadherin and PCNA was negative in pancreatic adenocarcinoma.(P<0.05). Conclusion The abnormal expression of Ecadherin and PCNA are closely associated with the differentiation, proliferation, invasion and metastasis of pancreatic adenocarcinoma.
KEY WORDS: Ecadherin; proliferating cell nuclear antigen; pancreatic adenocarcinoma
E钙黏附素(Ecadherin)是一种同质性的黏附分子，参与细胞与细胞之间的黏附。它与肿瘤组织的表达程度和肿瘤的浸润与转移有密切的关系[1]。细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是研究细胞增殖状态的有效标记物，其过度表达与绝大多数恶性肿瘤的浸润、转移能力密切相关[2]。在胰腺癌的研究中，联合检测Ecadherin、PCNA的报道较少。本文采用免疫组织化学方法，检测Ecadherin、PCNA在胰腺癌组织中的表达，并选择PCNA作为反映胰腺癌增殖活性的指标，探讨Ecadherin与胰腺癌分化、增殖及浸润转移的关系。
1 材料与方法
1.1 临床资料 收集西安大学医学院第一附属、第二附属医院病理科2000年1月至2005年6月间诊断为胰腺癌的标本59例，患者均有详细的临床资料和手术记录，术前均未接受放疗和化疗。其中男31例，女28例；年龄38-71岁，平均56.7岁。均经病诊断证实为腺癌，因其他组织分型标本较少，故未纳入。按Klopper标准对原发胰腺癌进行组织学分级：Ⅰ级(高分化)23例，Ⅱ级(中分化)18例，Ⅲ级(低分化)18例。临床分期按2002年UICC胰腺癌TNM分期系统分为：Ⅰ-Ⅱ期36例，Ⅲ-Ⅳ期23例。按有无淋巴结转移分为：有淋巴结转移24例，无淋巴结转移35例。取16例癌周正常胰腺组织作为对照。
1.2 主要试剂 兔抗人Ecadherin单克隆抗体(即用型)购自福建迈新公司；鼠抗人PCNA单克隆抗体(浓缩型)(稀释至1∶50)购自北京中山公司；ELiVisionTMPlus试剂盒购自福建迈新公司。
1.3 方法 全部标本经10%(体积分数)甲醛溶液固定,常规石蜡包埋，4μm厚的连续切片3张，分别做HE和免疫组织化学染色及病理诊断。免疫组织化学染色采用ELiVision TMPlus法(具体操作按相关试剂盒说明)。
1.4 免疫组化染色结果判定 Ecadherin染色结果判断标准：以癌细胞膜染为棕黄色,定为染色阳性细胞。观察整个切片，选取5个相邻的表达最强的高倍视野(×400)阳性染色细胞。当≥90%的细胞染色阳性时为强阳性()，10%-89%的细胞染色阳性或呈胞浆染色为弱阳性(+)，阳性染色细胞低于10%为阴性染色(-)。
PCNA染色结果判断及分级：细胞核内出现棕黄色颗粒为PCNA阳性反应细胞；阳性细胞百分率表示每100个计数的肿瘤细胞中呈现阳性反应的细胞数,每例标本计数400个细胞。根据PCNA阳性细胞数量分为四级:阳性细胞百分率≤20%为Ⅰ级；阳性细胞百分率20%-50%为Ⅱ级；阳性细胞百分率50%-75%为Ⅲ级；阳性细胞百分率>75%为Ⅳ级。将Ⅰ、Ⅱ级定为低增殖活性,Ⅲ、Ⅳ级定为高增殖活性。
1.5 统计学处理 Ecadherin在不同分化组、有无淋巴结转移组及不同临床分期组表达差异比较采用秩和检验，PCNA在不同分化组、有无淋巴结转移组及不同临床分期组表达差异比较采用χ2检验，Ecadherin与PCNA间有无关联采用χ2检验，关联性密切程度采用Pearson列联系数C值衡量。所有数据均采用SPSS12.0处理。
2 结果
2.1 Ecadherin及PCNA在胰腺癌组织中的表达 对照组Ecadherin在细胞膜表达，染色为棕黄色，未见胞浆染色(图1a)；胰腺癌组Ecadherin异常表达，在胰腺癌组织比相应癌旁正常胰腺组织表达明显减低(图1b、图1c)，高表达率仅为13.6%(8/59)，而癌旁正常胰腺组织中高表达率为87.5%(14/16)。PCNA阳性表达呈弥漫或颗粒状分布，位于细胞核，胞浆未见着色(图2a)，所有切片均有阳性反应。PCNA在胰腺癌组织强阳性表达率为67.8%(40/59)，而癌旁正常胰腺组织中强阳性表达率是6.3%(1/16)(图2b、图2c)。
图1 Ecadherin在正常胰腺组织及胰腺癌组织中的表达（略）
Fig.1 The expression of Ecadherin in normal pancreas and pancreatic adenocarcinoma tissues
1a: Expression of Ecadherin in normal pancreas (×400); 1b: Expression of Ecadherin in high differential carcinoma (×400); 1c: Expression of Ecadherin in low differential carcinoma (×400)
图2 PCNA在正常胰腺组织及胰腺癌组织中的表达（略）
Fig.2 The expression of PCNA in normal pancreas and pancreatic adenocarcinoma tissues
2a: Expression of PCNA in normal pancreas (×400); 2b: Expression of PCNA in high differential carcinoma (×400); 2c: Expression of PCNA in low differential carcinoma (×400)
2.2 Ecadherin、PCNA表达与胰腺癌临床病理特征的关系 Ecadherin在高、中、低分化各组、淋巴结有无转移以及Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期表达相比均有显著性差异(P<0.05)，且 Ecadherin高表达随胰腺癌组织分化程度进展、淋巴结转移出现以及临床分期增加而降低。PCNA强阳性表达率亦在高、中、低分化各组、淋巴结有无转移以及Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期相比均有显著性差异(P<0.05)，且PCNA强阳性表达随胰腺癌组织分化程度进展、淋巴结转移出现以及临床分期增加而升高(表1)。
表1 Ecadherin、PCNA的表达与胰腺癌临床病理特征的关系（略）
Table 1 Relationship between Ecadherin and PCNA expression and pancreatic adenocarcinoma clinicopathology
*P<0.05, compared with the differentiation; △P<0.05, compared with the metastasis; #P<0.05, compared with the clinical stages
2.3 Ecadherin与PCNA之间的关系 染色结果还发现，在Ecadherin表达阴性组的胰腺癌组织中，PCNA强阳性表达的有32例，强阳性表达率为91.4%(32/35)，而Ecadherin表达阳性的胰腺癌组织中，PCNA强阳性表达的仅有8例，强阳性表达率为33.3%(8/24)，表明Ecadherin和PCNA存在负相关关系(χ2=22.009，P<0.05)。二者关联性密切程度采用Pearson列联系数值的大小衡量。得Pearson列联系数C=0.52(C值越接近1)，从而证明两者关系较密切。
3 讨论
3.1 Ecadherin的表达与胰腺癌的关系 Ecadherin是钙黏附素家族的一个重要成员,参与介导上皮型细胞 、细胞间的黏附、胚胎发育以及正常组织中上皮细胞层的形成和维持,是细胞连接的重要分子[3]。当其表达减少或功能异常时,将导致肿瘤的侵袭和转移，因而具有侵袭抑制因子的作用[4]。研究发现，Ecadherin黏附功能的丧失可使细胞转为高侵袭性表型。进一步研究表明,在多种肿瘤组织中，包括肝癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌及结直肠癌等,都发现有Ecadherin表达的异常,特别是在肿瘤的转移灶中，癌细胞Ecadherin的表达减少甚至消失。用抗Ecadherin抗体可阻断细胞间的联接,从而使癌细胞获得高侵袭力。将Ecadherin的反义RNA导入高表达钙黏附蛋白的肿瘤细胞株,可明显提高其转移能力，进一步证实，Ecadherin具有侵袭抑制因子的作用[5]，能够抑制肿瘤的转移。从我们的实验结果来看，Ecadherin在胰腺癌组织中的表达明显低于癌周正常胰腺组织，高表达率仅为13.6%(8/59)，并且这种高表达不仅与肿瘤的分化、临床分期有关，还与淋巴结转移有关(P<0.05)，且 Ecadherin高表达随胰腺癌组织分化程度进展、淋巴结转移出现以及临床分期增加而降低。这充分说明，Ecadherin在肿瘤的侵袭、转移过程中起着十分重要的作用。其机制可能是Ecadherin表达异常,导致其功能障碍,引起癌细胞相互黏着力下降,造成细胞容易分散而脱离原发灶。
3.2 PCNA的表达与胰腺癌的关系 PCNA是细胞增殖必需的核抗原，作为DNA聚合酶δ的重要辅助因子，参与DNA的合成及修复，在DNA复制、核酸代谢、细胞增殖和细胞周期调控中发挥重要作用[6]。目前，认为PCNA能反映细胞群体增殖活性。研究发现PCNA与许多恶性肿瘤的病理分级、临床分期及淋巴结或脏器转移有关，并可应用于临床诊断、指导以及预后评估。本研究结果显示，PCNA在胰腺癌组织的强阳性表达率为67.8%(40/59)，PCNA强阳性表达与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移以及临床分期有关(P<0.05)，且PCNA强阳性表达随胰腺癌组织分化程度进展、淋巴结转移出现以及临床分期增加而升高。提示肿瘤的细胞增殖活性越高，其进展越快，侵袭力越强，越容易发生淋巴结转移。
3.3 Ecadherin与PCNA间的关系 本文的结果表明Ecadherin和PCNA存在负相关。PCNA是反映细胞增殖活性的一项指标，一般认为增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，细胞间的黏附性降低，致使肿瘤细胞更容易脱离原发灶向远处扩散转移[7]。本文的结果亦证实了这一观点，从而进一步提示，采用Ecadherin和PCNA联合检测具有预测肿瘤的增殖、分化、侵袭及转移能力的作用，同时对的评价胰腺癌临床预后乃至治疗方案的选择同样具有重要的临床价值。
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