抗血小板治疗对脑梗死患者血小板活化标记物表达的影响

                   作者：周武，舒晓春，王雪晴，刘汉伟，韩蓉蓉，张苏明

【关键词】  血小板聚集抑制剂；脑梗死；CD62P；PAC

　　Influence of antiplatelet therapy on the expressions of platelet activation markers in patients with acute cerebral infarction

　　【Abstract】 AIM: To study the influence of different antiplatelet drugs on the expressions of platelet activation markers in patients with acute cerebral infarction aspirin and  clopidogrel and provide reliable theoretical references for the prevention and therapy of acute cerebral infarction. METHODS: Flow cytometry was used to examine CD62P and PAC1, two platelet activation markers in patients with cerebral infarction. RESULTS: The expressions of platelet activation markers in patients with acute cerebral infarction patients was obviously higher than that in normal control group. The expression of platelet activation markers in acute cerebral infarction patients with diabetes and hypertension was much higher than that in acute cerebral infarction patients without diabetes and hypertension. Both aspirinand clopidogrel could inhibit the expression of platelet activation markers, but there was no remarkable difference between them. CONCLUSION: The activation of platelet plays a main role in the pathogenesis of acute cerebral infarction. Diabetes and Hypertension can aggravate the occurrence of acute cerebral infarction by enhancing the activation of platelet Both Aspirin and Clopidogrel could inhibit the expression of platelet activation markers and prevent relapse in acute cerebral infarction patients.

　　【Keywords】 platelet aggregation inhibitors； acute cerebral infarction； CD62P； PAC1

　　【摘要】 目的：探讨急性脑梗死患者血小板活化状态及抗血小板药物阿司匹林和氯吡格雷对血小板活化状态的影响, 为急性脑血管病的预防和治疗提供可靠的理论依据. 方法：采用流式细胞检测方法，对急性脑梗死血小板活化标记物P选择素（CD62P）及PAC1进行检测研究. 结果：急性脑梗死患者血小板活化标记物表达明显高于正常对照组,脑梗死伴糖尿病及高血压者血小板活化标记物表达明显高于单纯脑梗死组,阿司匹林及氯吡格雷治疗能明显抑制血小板活化标记物表达，但二者在治疗后相比较无统计学差异. 结论：急性脑梗死疾病发生过程中，血小板活化起了主要作用，且高血压及糖尿病有促进体内血小板活化的作用，加重脑血管病的发生,阿司匹林及氯吡格雷在治疗急性脑梗死中能明显抑制血小板活化,在一定程度上阻断血小板活化过程，预防复发.

　　【关键词】 血小板聚集抑制剂；脑梗死；CD62P；PAC1

　　0引言

　　血小板活化在急性缺血性脑血管的发生过程中起着重要作用. 研究表明，血小板膜表面蛋白标记物P选择素（CD62P）及PAC1为检测血小板活化程度和功能状态的灵敏指标，流式细胞技术的应用为评价血小板在体内的活化程度提供了可靠方法［1］. 本研究我们通过流式细胞技术，对急性脑梗死患者采用不同抗血小板治疗，分析对照阿司匹林及氯吡格雷两种抗血小板药物对血小板活化标记物表达的影响.为急性缺血性脑血管病的预防、治疗提供可靠理论依据.

　　1对象和方法

　　1.1对象脑梗死组80（男49，女31）例，年龄40～75（平均51.3±8.8）岁，全部病例选自200501/200604我科住院治疗患者，诊断符合第四届脑血管病制定的诊断标准，全部经头颅CT或MRI检查证实. 病程在起病3 d以内，其中伴高血压者53例，伴糖尿病者29例，排除肿瘤及免疫性疾病. 患者入院后按随机分组的原则又分成3组，第一组(n=32)给予阿司匹林治疗，每次200 mg，1次/d，顿服；第二组(n=28)给予氯吡格雷75 mg治疗，1次/d，顿服；第三组(n=20)不用抗血小板药物治疗，所有患者在入院第1日开始治疗，基础治疗相同，全部给予血塞通注射液及脑蛋白水解物（丽珠赛乐）静脉滴注. 连用2 wk，期间根据病情对症治疗. 2 wk后复查血小板活化标记物的表达. 正常对照组30(男18，女12)例，年龄28～60（平均48.3±7.9）岁，为同期体检中心健康者，排除高血压、糖尿病、冠心病，全位头颅CT检查排除脑梗死.
　　
　　主要试剂： 荧光mAb CD61 PerCP, CD62P PE, PAC1 FITC, Mouse IgM FITC和Mouse IgG PE均为BD公司产品. 测定中以CD61 PerCP对血小板标记和设门、Mouse IgM FITC和Mouse IgG PE的表达作阴性对照、观察和统计CD62P 和PAC1的表达率.  流式细胞仪为BECTONDICKISON公司的FACS Galiber，用Cell Queset软件.

　　1.2方法患者入院后第2日清晨空腹采血，采血时间用大号针头，不扎止血带，1∶9枸橼酸钠抗凝，用第二管血，避免震荡，30 min内应用流式细胞仪进行检测. 对照组及治疗后2 wk采血过程同前.
　　
　　统计学处理： 数据以x±s表示，两组间比较采用t检验，组内前后比较用配对t检验，以P<0.05为有统计学差异.

　　2结果

　　2.1急性脑梗死患者治疗前血小板活化标记物表达与正常对照组比较有极显著性差异(P<0.01,表1).

　　表1急性脑梗死患者与正常组血PAC1，CD62P的比较(略)

　　2.2急性脑梗死伴糖尿病患者与不伴糖尿病患者血小板活化标记物表达二者之间有显著性差异(P<0.05, P<0.01，表2).

　　表2脑梗死合并糖尿病与非糖尿病血PAC1，CD62P的比较(略)

　　2.3急性脑梗死伴高血压患者与不伴高血压患者血小板活化标记物表达二者有显著性差异(P<0.05, 表3).

　　表3脑梗死合并高血压与非高血压血PAC1，CD62P的比较(略)

　　2.4三组不同治疗方法前后血小板活化标记物前后情况阿司匹林治疗组与氯吡格雷治疗组治疗前后血小板活化标记物表达有统计学差异(P<0.01)，但二者在治疗后相比较无统计学差异. 空白对照治疗前后血小板活化标记物表达有所下降,但无统计学差异;空白组治疗后与治疗组治疗后比较有统计学差异（P<0.01, 表4）.

　　表4三组不同治疗方法对脑梗死血PAC1，CD62P的比较(略)

　　3讨论

　　急性脑血管病是一种常见多发病，脑动脉硬化与缺血性脑血管病的发生、密切相关，脑动脉硬化、血管内皮损伤、胶原暴露使血小板黏附，同时，血管内皮造成局部血流动力学改变，产生高切变力，以及脂肪斑块破溃，使血小板活化［2］. 此外，β血小板球蛋白，血小板Ⅳ因子，ADP、花生四烯酸、血小板活化因子也是血小板活化的主要因素［3］. 血小板活化是一个复杂的病理过程，其相互影响因素目前还不十分清楚. 研究表明， CD62P及PAC1为检测血小板活化程度和功能状态的灵敏度指标，CD62P属于黏附分子选择素家族成员，正常血小板表面无CD62P表达或持续性低表达,当血小板受炎症介质刺激几分钟CD62P便移至细胞表面,可介导血小板与粒细胞及内皮细胞的黏附及连接［4］. PAC1是血小板质膜表面变化的糖蛋白表位, GDⅡb/Ⅲa的PAC1表位仅在血小板活化时才因构象变化而暴露出［5］.
   
　　本研究我们应用流式细胞监测方法，对急性脑梗死血小板活化标记物进行检测研究发现，急性脑梗死患者血小板活化标记物表达明显增加，说明在脑梗死急性期，血小板明显活化，明显高于正常对照组，证实了在急性脑梗死疾病发生过程中，血小板活化起了主要作用; 同时我们还发现，脑梗死伴高血压及糖尿病患者，血小板活性标记物的表达更明显，显著高于不伴高血压及糖尿病者，表明高血压及糖尿病更容易使体内血小板活化，加重脑血管病的发生. 这可能与长期高血压可使患者血管内皮损伤，胶原纤维暴露，血小板黏附聚集、活化有关，说明高血压是心脑血管的重要危险因素. 同样，高血糖及脂质代谢紊乱也可损伤内皮细胞，促使血小板活化，糖尿病也是心脑血管病的重要危险因素.
　　
　　研究表明，对超出有效窗的急性卒中患者，根据国际卒中试验（IST）［6］和急性卒中试验（CAST）［7］，推荐早期抗血小板治疗，阿司匹林和氯吡格雷为两种常用抗血小板药物，阿司匹林主要通过环氧合酶（COX）失活，阻断花生四烯酸的级联反应. 氯吡格雷是ADP受体拮抗剂，可抑制血小板活化，目前尚未见有关两种药物在治疗急性脑梗死中对血小板活化标记物表达影响的临床研究，同时关于这两种药物抗血小板的疗效存在不同观点，谁的抗血小板作用更强，目前还无更多临床证据. 我们通过随机分组，采用两种不同抗血小板药物进行治疗，应用流式细胞检测方法检测血小板活化标记物表达的不同影响，并与正常空白组对照研究，发现二者均能明显抑制血小板活化标记物的表达，但二者在抑制表达程度上亦无差异. 二者治疗2 wk后血小板活化标记物的表达明显低于正常空白组，但仍高于正常人群组，说明两种药物在治疗急性脑梗死中，能明显抑制血小板活化,在一定程度上，阻断血小板活化过程，预防复发.
　　
　　本研究显示，脑梗塞患者存在明显血小板活化，尤其伴糖尿病及高血压患者血小板活化更明显，证明高血压及糖尿病更容易使体内血小板活化，加重脑血管病的发生，二者是急性脑梗塞的独立危险因子. 应用氯吡格雷及阿司匹林治疗能有效抑制血小板活化，但二者抑制血小板活化的程度无明显差异，廉价的阿司匹林可完全代替昂贵的氯吡格雷，特别对于我国国人目前条件尚不富裕的情况下，应用阿司匹林预防、治疗脑血管病既经济又有效.
    
　　总之，血小板活化作为脑梗死的早期因素，应早期检测血小板活化标记物PACI及CD62P水平，提早应用抗血小板药物预防，并有效治疗高血压和糖尿病，对防止脑血管病发生具有重要意义.

　　【】

　　［1］ Ault KA. The clinical utility of flow cytometry in the study of platelete［J］. Cemin Hematal,2001,38(2):160-168.

　　［2］ Nonura S, Nakamura T, Cone J, et al. Cyyometric analysis of high shearinducedplatelet microparticles and effect of cytokines on microparticle generation［J］. Cytometry, 2000,40(3):173-181.

　　［3］ 王芳，刘征雁，牛保华. 内皮细胞损伤血小板活化及功能状态与2型糖尿病的相关性［J］. 第四军医大学学报，2006，27 (7):637-638.

　　［4］ Nurden A, Klene W, Muttada L, et al. Platelet activation in thrombotic disorders［J］. New Rev Fr Hemstol, 1993:35-67.

　　［5］ Davies TA, Drotts DJ, Weil GJ, et al. Flow cytometric measurements of cytoplasmic calcium changes in human platelet［J］. Cytometry,1988,9:138-142.

　　［6］ International Stroke Trial Collaborative Group. The International Stroke Troke Trial (IST): A randomised trial of aspirin,subcutaneous heparin, both, or neither among 19435 patients with acute ischemic stroke［J］. Stroke, 2000, 31:1240-1249.

　　［7］ CAST (Chinese Acute Stroke Trial) Collaborative Group.CAST: Randomised placebocontrolled trial of carly aspirin use in 20 000 patients with acute ischaemic stroke ［J］. Lancet, 1997, 349: 1641-1649.