艾氏腹水癌小鼠拓喜（羟基喜树碱）时辰给药的血象变化

      作者：吴江 袁志敏  林运政  邹丽宜  林晓辉  余海清  张岚

【摘要】  目的  探讨拓喜（羟基喜树碱）时辰用药除了对艾氏腹水癌小鼠的疗效有差异外，有无血象的变化。方法  160只艾氏腹水癌移植瘤小鼠模型按时间段分为给药组和对照组，给药组荷瘤小鼠在8个不同时辰段（00：00、03：00、06：00、09：00、12：00、15：00、18：00、21：00），腹腔内注射拓喜5.0mg/kg，对照组荷瘤小鼠也在8个不同的时辰段注射同量生理盐水，连续给药10天，10天后检测各组小鼠的WBC、RBC、PLT，然后剥取肿瘤并各组抑瘤率。结果  在09：00给药抑瘤率最大，与其他组比较差异有显著性(P<0.05)；09：00组给药后10天WBC数与第1、2、3组比较差异有显著性(P<0.01)，高于第5、6、7、8组，但P>0.05。结论  拓喜（羟基喜树碱）除了对小鼠艾氏腹水癌移植瘤抑制作用有明显的时辰差异外，对WBC的影响也有时辰的变化。
   
    【关键词】  羟基喜树碱  时间学  艾氏腹水癌  小鼠移植性肿瘤  白细胞
   
    The  blood changes of hydroxy camptothecin on chronotherapy in EAC  mice
    
        
    【Abstract】  Objective  To observe the effect and  blood  changes  of Hydroxy camptothecin in EAC mice.Methods  160 EAC mice were randomly divided into 16 groups.8 Groups were control，the other 8 groups were injected with hydroxy camptothecin once a day at dose of 5.0mg/kg  in abdominal cavity on 00：00，03：00，06：00，09：00，12：00，15：00，18：00，21：00.All  the mice  were killed after 10 days and examined  the  changes of WBC，RBC and PLT，the tumor weight  were to count the rate of tumor restrain.Results  The rate of tumor  restrain  on 09：00  was  highest than the others（ P < 0.05 ）；the  WBC  on  09：00 was also  highest  than  that  others.Conclusion  The effect and  WBC  change  of  hydroxy camptothecin  on  chronotherapy   in EAC mice  had   chrono-effect  and   changes.
   
    【Key words】  Hydroxy camptothecin  chronotherapy  EAC  mice transplanted tumor  WBC
   
    羟基喜树碱(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)为我国特有的珙垌科植物喜树中分离得到的纯天然生物碱抗肿瘤药物，本文研究在艾氏腹水癌小鼠移植瘤模型上用拓喜（羟基喜树碱冻干粉针）在不同时间腹腔内给药，观察其疗效及有无WBC、Hb、PLT的变化。
   
    1  材料与方法
   
    1.1  实验动物  清洁级昆明种小鼠160只，体重25～30g，雌雄兼有，由广东医学院实验动物中心提供（广东省动物实验合格证： 2002A014）。
   
    1.2  实验药物  拓喜（HCPT，羟基喜树碱冻干粉针，批号：0208H1，深圳万乐药业有限公司产品）。生理盐水(批号：E030520，四川科伦大药厂有限公司产品)。
   
    1.3  动物分组  160只清洁级小鼠右腋窝下接种艾氏腹水癌（皮下型，由中山大学肿瘤防治中心传代保株和提供，瘤株计数为3×105，0.2ml/只）后随机分为16组，即羟基喜树碱（拓喜）和生理盐水对照8对时辰给药组，每组10只，每对时辰给药组分别于00：00、03：00、06：00、09：00、12：00、15：00、18：00、21：00等8个时间段腹腔注射拓喜和生理盐水。
   
    1.4  实验方法  所有动物分组后分笼饲养观察1天后进行实验，每天按上述时间段分组在规定的时间给药，药物治疗组予拓喜（羟基喜树碱）5.0mg/kg，对照组予生理盐水，连续10天。10天后行摘眼球取血检测WBC、Hb、PLT后，彻底剥离瘤块称瘤重并计算抑癌率，药物治疗组和生理盐水组两两比较用 t 检验，不同时间给药组间比较行方差分析。
   
    2  结果
   
    见表1、2。
   
   
   
    Tab.1 The change and comparison of WBC、Hb、PLT in treatment groups and control groups    
    
    注：给药组与对照组比较，WBC有明显差异，*P＜0.01。在给药组中第4（09：00）组WBC数最高，与第1、2、3组比较差异有显著性，P＜0.01，虽高于第5、6、7、8组，但P＞0.05，差异无显著性。而Hb和PLT在给药组与对照组以及给药组之间均未见明显下降和差异性
   
                
   
    Tab.2 Comparison of average weight tomor and inhibitory rate in 8 groups of EAC mice on hydro camptothecin chronotherapy 
    
    注：**第4组（09：00给药）肿瘤重量最小，抑癌率最大，除6组（15：00）和7组（18：00）外，与其他5组比较，差异有显著性（P<0.05）   

    
    3  讨论
   
    抗癌药物在不同时间应用，其疗效和毒性是随着生物日周期节律的改变而波动，其范围可达50％或更多，这称为时辰耐受性和时辰效力（Chrono-telerence  and  efficence）［1～4］。研究发现烷化剂、铂类、蒽环类、嘧啶拮抗剂等细胞毒药物的药代动力学参数可随给药时间的不同而发生这种波动，法国Levi F等将上述几类药物的特性引入临床开展时辰化疗并取得颇为满意的效果［5～8］。
   
    羟基喜树碱为我国特有的珙桐科植物喜树（Camptotheca  auminata  decaisne）中分离得到的纯天然生物碱抗肿瘤药物，主要作用于S期细胞，作用靶点是DNA拓朴异构酶I（TOPO I ），参与调节DNA的拓朴构象，涉及DNA复制、修复及RNA转录，导致双链DNA断裂和不可逆的DNA复制停滞，最后致细胞死亡。在抗癌活性方面，羟基喜树碱有很宽的抗癌谱，对多种癌细胞株及移植性动物肿瘤有较高的抑制率；近来研究其作用机制时发现羟基喜树碱能使HL160细胞产生典型的凋亡变化，还能促进HL160细胞和U937细胞向成熟方向分化，说明羟基喜树碱对癌细胞有诱导分化作用，由于具有独特的作用位点，有广谱抗癌作用，
   
    不产生多药抗药性，与铂类、鬼臼类、嘧啶拮抗剂、阿霉素、TOPO II抑制剂和细胞因子联合应用有增加疗效的协同作用，临床得到广泛应用，但因对骨髓抑制较明显，白细胞下降造成临床应用上的剂量限制性，影响疗效的提高，同时若和上述药物在同一时间给药却无协同作用甚至相反而产生拮抗作用，疗效降低［9，10］。随着时辰化疗的研究和开展，不同的化疗药物在其治愈率高峰值时间给药可提高疗效，毒副反应降低。铂类、阿霉素、5-氟脲嘧啶等在已知的峰值浓度时间用药，剂量与常规或与在谷值浓度时间相同，但疗效提高，毒性降低。如环磷酰胺分别在治愈率峰值时间（18：00）和谷值时间（09：00）给药其疗效相差近5倍（34％：7％），药物治愈率 / 毒死率相差12倍（1.74 ：0.14）。可见药物的指数在一天中是有差别的，在治愈率峰值时间或毒死率谷值时间给药可以获得最好的效果，而且毒副作用降低［11］；因此时辰化疗是目前肿瘤治疗的一个热点课题，法国Levi F应用5-Fu、草酸铂治疗晚期大肠癌使疗效提高20％多，毒性降低5.4倍，显示了令人兴奋的前景。
   
    拓喜为羟基喜树碱冻干粉针，经HPLC检测，其纯度明显高于水针剂，达98％以上，同时具有更高的稳定性，它的最佳给药时间以及时间用药对恶性肿瘤的疗效，已在艾氏腹水癌移植瘤小鼠模型上观察到呈现时辰效力，09：00给药时，艾氏腹水癌移植瘤小鼠的肿瘤抑癌率为最大［12］。本实验在此基础上了解时辰给药对血细胞的影响，结果显示与对照组与给药组的WBC有明显差异，给药组的WBC明显低于对照组(P＜0.01)。在给药组之间，第4组（09：00）WBC数最高，与第1、2、3组比较差异有显著性(P＜0.01)，虽高于第5、6、7、8组，但P＞0.05，差异无显著性。而Hb和PLT在给药组与对照组以及给药组之间均未见明显下降和差异性。可见拓喜（羟基喜树碱）除了对小鼠艾氏腹水癌移植瘤抑制作用有明显的时辰差异外，对WBC的影响也有时辰的变化。
   
                               【】
   
    1  Levi  F.Chronopharmacology   and  chronotherapy  of  cancer.Pathol  Biol  (Paris)，1996，44(7)：631～644.    
    2  Levi  F.Chrono-chemotherapy  and  dose  intensity.Bull  Cancer，1995，82，(suppl I)：29-36.    
    3  Focan  C.Marker  rhythms  for  cancer  chronotherapy.From  laboratory  animals  to  human   beings.In  Vivo，1995，9 ( 4 )：283-298.
   
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    6  Levi  F，Zidani  R，Misset  JL，et  al.Randomised   Multicenter  trial  of  chronotherapy  with  oxaliplatin，fluorouracil，and  folinic  acid  in  metastatic  colorectal  cancer.International  Organization  for  Cancer  Chronotherapy.Lancet，1997，350(9079)：681-686.    
    7  Levi  F.Chronopharmacology  of  anticancer  agents  in  Redfems  PH，Lemmer  B  ( Ed )  “  Physiology  and  pharmacology  of  tiologicol  rhythms ”，1997，299-331.    
    8  Giacchetti  S，Zidani  B，Perpoint B，et  al.Phase  III  trial  of  5-flourouracil ( 5-fu )，Folinic  acid  ( FA )，with  or  without  oxaliplatin  (OXA)  in  previously  untreated  patients  ( pst )  with  metastatic  colorectal  cancer  ( MCRC ).Proc  Am  Soc  Clin  Oncol，1997，16：805.    
    9  潘启超，胥彬.肿瘤药与化疗治疗学，郑州：河南医科大学出版社，2000，191-194.    
    10  刘建.羟基喜树碱类药物作用机制及在合并治疗中机理的研究.肿瘤临床，1998，25(5)：223-251.    
    11  何绍雄，宋开源，苏兆虞.时间药理学与时间治疗学，天津：天津出版社，1998，164-165；246-251.    
    12  吴江，袁志敏，林运政，等.实验性艾氏腹水癌小鼠羟基喜树碱（拓喜）时辰给药疗效观察.中国肿瘤临床，2004，31（21）：1215-1217.