甲状腺癌Ⅰ型β-转化生长因子受体蛋白表达的研究

　　β-转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)可影响细胞增殖与分化，对上皮来源的细胞则主要是细胞生长负性调节因子。TGF-β受体在TGF-β信号传导中起重要作用，其水平降低是TGF-β抵抗的主要机制。本研究在甲状腺癌中Ⅰ型TGF-β(TGF-βⅠ)受体在TGF-β抵抗机制中的状态。

　　一、材料与方法

　　1.材料：甲状腺癌标本32例，其中男6例，女26例，年龄21～82岁，平均42.7岁，其中甲状腺乳头状癌25例，甲状腺滤泡状癌7例。19例癌旁正常组织标本，其中男3例，女16例，年龄21～82岁，平均32.5岁。均为1990～1995年北京医科大学第一外科病理标本。甲状腺癌组织鉴定及分类依据HE染色结果。

　　2.检测方法：标本经甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片。采用ABC免疫组织化学检测试剂盒(Sino-American Biotechnology Co.),Ⅰ型TGF-β受体单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology Inc.)和增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体(Calbiochem)工作浓度1∶100，4℃冰箱过夜，DAB显色，苏木精复染。随抗体获赠相应阳性对照片，阴性对照以0.01 mol/l PBS代替一抗，做空白对照。细胞浆或核呈棕褐色着色为阳性。每标本切片中选40×10高倍视野5个，阳性细胞百分数作为该抗体阳性率。阴性：阳性率小于20%；阳性：阳性率大于20%。

　　3.统计学方法：计数资料四格表χ2检验和计数资料相关分析。

　　二、结果

　　Ⅰ型TGF-β受体与PCNA在甲状腺癌中阳性率显著高于正常甲状腺组织。甲状腺癌TGF-βⅠ阳性18例，阴性14例，PCNA阳性24例，阴性8例；甲状腺组织TGF-βⅠ与PCNA各阳性1例，阴性18例(P＜0.01)；TGF-βⅠ与PCNA在甲状腺癌呈正相关关系(r=0.363?7,P＜0.05).

　　三、讨论

　　PCNA是一种DNA聚合酶δ的辅助蛋白质，作用于DNA合成过程，特别是晚G1期与S期。它定位于胞核，是必需的细胞周期物质(周期蛋白)，可反映细胞增殖活性。细胞增殖活性是肿瘤恶性倾向的标志。本研究结果显示，甲状腺癌PCNA蛋白表达阳性率较正常甲状腺组织显著增高。甲状腺癌组织切片PCNA免疫组化检测可作为反映肿瘤生物学行为的一个重要指标。

　　TGF-β受体存在于上皮细胞，内皮细胞、成纤维细胞等组织细胞，有3种类型：Ⅰ型和Ⅱ型受体为糖蛋白，相对分子质量分别是55×103和75×103，为跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶，由1个细胞外配体结合链和细胞内可传递信号的酶结构组成，又称信号受体，可传导TGF-β的多种生物活性。有学者认为，Ⅰ型受体主要介导TGF-β对细胞DNA和Fn合成信号，Ⅱ型受体主要介导TGF-β对细胞生长和增殖作用［1］。许多证据表明，Ⅰ型和Ⅱ型受体复合物是TGF-β信号传导所必须的。而Ⅲ型受体则间接调节TGF-β的作用。目前，甲状腺癌中TGF-β受体在TGF-β信号传导过程中的状态研究鲜见报道。

　　本研究结果显示，在甲状腺癌中Ⅰ型TGF-β受体蛋白表达阳性率较正常甲状腺组织显著增高在TGF-β抵抗机制中最可能的是丢失TGF-β受体［2］。TGF-β信号传递需要Ⅰ、Ⅱ型受体的合作，几种TGF-β抵抗细胞系通常丢失Ⅰ型或(和)Ⅱ型受体。这是一种脱离TGF-β生长控制的“经典”途径。但本研究中甲状腺癌存在较高水平Ⅰ型TGF-β受体的同时，PCNA所代表的肿瘤细胞增殖活性亦达到较正常对照组织更高的水平，即拮抗了TGF-β的抗有丝分裂作用。这一现象提示，在甲状腺癌造成TGF-β抵抗的机制中并非因为Ⅰ型TGF-β受体丢失，而更可能是Ⅱ型TGF-β受体丢失或TGF-β合成水平降低所至。这同以往研究中，如大肠癌等肿瘤TGF-β抵抗机制中同时存在的Ⅰ、Ⅱ型TGF-β受体丢失不同。

　　1，Ebner R,Chen&nb sp;RH,Shum L,et al.Colon-ing of a type 1 TGF-β receptor or and its effect on TGF-β binding to the type 2 receptor. Science, 1993，260:1344-1348.

　　2，Norgaard P,Spang TM,Poulsen HS. Expression and autoregulation of transforming growth factor beta receptor mRNA in small-cell lung cancer cell lines. Br J Cancer, 1996，73:1037-1043.