胃内容物中乐果的薄层色谱定性前处理及测定
【关键词】 乐果； 胃内容物； 色谱法，薄层
乐果是常用的有机磷杀虫剂，急性中毒时有发生。有机磷农药急性中毒时，仅仅靠嗅觉是不能判定中毒者是否吞服有机磷农药，还必须测定胃内容物是否含有有机磷农药，通常检测乐果大多需要昂贵的大型仪器，如气相色谱仪、高效液相色谱仪等，耗时长且难以普及[1,2]。2008年3月～2009年2月，在GA/T101-1995标准方法[3]的基础上，对提取方法做了改进，报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 仪器
CH?500型超声波清洗机（北京新德超声研究所），RE?3000型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），GF254硅胶薄层板（50 mm×100 mm，青海海洋化工分厂），展开槽（100 mm×200 mm，直立型、玻璃、带盖），10 μl微量注射器，喷雾器，SC型电热恒温干燥箱（浙江省嘉兴新腾电器仪器厂），真空泵，电子精密天秤（AR153/C）。
1.1.2 试剂及动物
苯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、正己烷、环己烷、石油醚、无水乙醇、庚烷、甲醇为分析纯，有机磷农药乐果（80%），乐果标准品（1.0 ｇ/L）来自农业部标准物质中心；无水硫酸钠，中性氧化铝，活性炭，5%醋酸溶液。溴酚蓝试剂：取0.1 g溴酚蓝溶解于10 ml丙酮中，再用1%硝酸银丙酮水溶液(丙酮 ∶水=1∶3)稀释至100 ml。大白鼠（250 g）5只。
1.2 方法
1.2.1 样品前处理
1.2.1.1 提取
大鼠断颈处死后取等量胃内容物4份各5 g于5个碾钵中，各加入有机磷农药乐果150 μl作为待测样品，乐果标准品250 μg作为标准对照，乐果标准品200 μg作为阳性对照，一份空白对照，进行平行操作。加入无水硫酸钠碾磨成干沙状后移入100 ml具塞三角瓶中，加入苯∶丙酮（2∶1）[4]50 ml，用超声波清洗机超声提取15 min[5],静置后分离出上清液装于收集瓶中，再加入上述混和溶剂30 ml，收集提取液；最后用20 ml此混和溶剂清洗，合并3次提取液待净化用。
1.2.1.2 装柱、净化步骤 参见[3]。
1.2.1.3 浓缩
将三角瓶中收集的净化液，移入旋转蒸发器中38 ℃水浴，负压0.055 MPa浓缩至0.5 ml待测。
1.2.2 样品测定
1.2..2.1 点样
用微量注射器分别取上述处理好的空白对照、标准对照、阳性对照、待测样品提取液10 μl，点在距底边2 cm的薄层板上。
1.2.2.2 展开剂及展开
选用实验室常用的混合展开剂做比较。将薄层板分别置于不同展开剂中进行展开，当溶剂前沿至距薄层板的上缘2 cm(预先标记)时取出，挥干薄层板上的溶剂。
1.2.2.3 显色及定性分析
用喷雾瓶喷溴酚蓝至板上出现均匀蓝色，在60 ℃电热恒温干燥箱中加热5～10 min,再喷5%醋酸溶液至背景出现浅黄色，农药斑点为蓝色[3]。根据斑点的比移值（Rf）进行定性，经过反复测定，得出不同展开剂中乐果的比移值Rf值。
1.2.2.4 检出限及回收率测定
为比较几种提取溶剂的效果选择最佳提取溶剂，用上述同样的方法以苯 ∶丙酮＝2 ∶1、正己烷 ∶丙酮＝2 ∶1、正己烷 ∶丙酮＝3 ∶1[6]、丙酮 ∶二氯甲烷=1∶1[7]、氯仿、苯为提取溶剂分别测定乐果加标量为200 μg、180 μg、160 μg、140 μg、130 μg、120 μg、110 μg、100 μg、90 μg、80 μg、70 μg及60 μg时的检出情况。根据GA/T101-1995[3]规定，在空白检材中加入200 μg乐果标准品，经处理后能检出回收率在60%以上，样品检材出现阳性或阴性结果均算可信。表1 乐果在不同展开剂中的Rf值（略）表2 不同提取溶剂提取时乐果的检出结果（略）
2 结果
乐果在不同展开剂中的展开结果以比移值（Rf）为定性标准，表1可见分离乐果较理想展开剂为环己烷∶丙酮（4∶1） 、石油醚∶丙酮（9∶1） 、氯仿∶丙酮（4∶1） 、正己烷∶丙酮∶无水乙醇（80∶20∶2）。不同加标量样品用不同提取溶剂提取后，浓缩至0.5 ml,点样量为10 μl与10 μg标准品对照点样，展开剂为氯仿∶丙酮=4∶1，含农药乐果的胃内容物在单一溶剂与混合溶剂提取后的结果。由表2可得出，加标量为80 μg时，苯∶丙酮=2∶1的提取溶剂仍能检出乐果。
3 讨论
由于胃内容物成分复杂，用薄层色谱的定性鉴定具有结果易观察，准确可靠，可满足普通的实验室进行有机磷农药中毒或致死的鉴定，相对大型仪器来说具有设备简单、成本低廉的优点。本实验方法中，将单一的提取溶剂改为混合的提取溶剂，提取效果大大提高。采用苯∶丙酮=2∶1时混合提取溶剂效果较好，同时又避免使用毒性较大的氯仿。针对有机磷农药不稳定，半衰期短的特点,缩短前处理时间是有效测定有机磷农药残留量的关键。本方法采用超声波技术提取胃内容物中有机磷农药残留,与传统的浸泡、振荡、均质提取相比具有操作简单方便、时间短、避免交叉污染[8]、适合批量处理的优点。另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，以提高提取效率[9]。样品浓缩选用旋转蒸发器，操作简单，样品损失少，水温在40 ℃以下仍能快速浓缩。对展开剂，可用范围是0.2～0.8，最佳范围是0.3～0.5[10] ，选用环己烷∶丙酮（4∶1）、石油醚∶丙酮（9∶1）、氯仿∶丙酮（4∶1）、正己烷∶丙酮∶无水乙醇（80∶20∶2）分离有机磷农药乐果，显色后斑点清晰、圆、无拖尾现象，效果较好；而有些展开剂不能展开或不能达到可用范围。本方法不但能检测出乐果，还能检测出敌敌畏，对硫磷等常见有机磷农药，且二者对乐果的检测结果无影响。
【】
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