P27和skp2在肝细胞癌中的表达及其意义
【摘要】 目的 探讨肝细胞癌P27和skp2蛋白的表达情况与临床病理意义。方法 用免疫组化二步法检测P27和skp2在60例肝细胞癌及20例癌旁组织中的表达。结果 60例肝细胞癌P27的阳性表达率为23%(14/60)，癌旁组织为80%(16/20)，60例肝细胞癌高分化癌阳性表达率为47%(7/15)，低分化癌为16%(7/45)。P27在肝细胞癌中的表达明显低于癌旁组织，P27蛋白的表达随病理分级增高而降低。60例肝细胞癌skp2阳性表达率为47%(28/60) ，癌旁组织为15%(3/20)，60例肝细胞癌高分化癌阳性表达率13%(2/15)，低分化癌为58%(26/45)，可见skp2在肝细胞癌中表达明显高于癌旁组织(P<0.05)，低分化癌明显高于高分化癌(P<0.01)。 结论 P27和skp2蛋白的表达情况与肝细胞癌的发生及恶性度有关。
【关键词】 肝细胞癌 P27 skp2 免疫组织化学
Abstract: Objective To explore the expression and significance of P27 and skp2 proteins in hepatocellular carcinoma (HCC). Methods Immunohistochemical(S-P) method was used to detect the expression of P27 and skp2 proteins in the 60 patients with HCC and 20 cases of peri-cancer tissues. Results The positive rate of P27 protein in 60 cases of hepatocellular carcinoma was 23% , that in the adjacent tumor tissue was 80% , The positive rate of p27 protein expression was significantly lower in tumor than in adjacent tumor tissue. The expression of p27 protein becomes lower with the increase in grading. The positive rate of skp2 protein in 60 cases of hepatocellular carcinoma was 47% , that in the adjacent tumor was 15% , The positive rate of skp2 protein expression was significantly higher in tumor than that in adjacent tumor tissue(P<0.05), lower grade differentiation was significantly higher than high grade differentitiation (P<0.01).Conclusions Expression of p27 and skp2 protein is closely correlated to the occurrence, development and malignancy degree of hepatocellular carcinoma.
Keywords:hepatocellular carcinoma; protein p27; protein skp2; immunohistochemistry
p27是skp2降解的靶蛋白，关于p27和skp2在肝细胞癌中的表达研究甚少，本文检测60例肝细胞癌p27和skp2蛋白的表达情况，以探讨它们在肝细胞癌中的作用及临床病理意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集我院2004.8-2007.8手术切除，经病理证实的60例肝细胞癌标本，患者年龄(18-66)岁，其中男性42例，女性18例。术前均未行化疗和放疗，其中高分化癌15例，低分化癌45例，同时取20例癌旁组织作对照。所有标本均为中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚切片。
1.2 免疫组织化学 操作步骤按免疫组化试剂盒说明进行，用已知的乳腺癌阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。
1.3 结果判定标准 p27和skp2判定标准[1]以细胞核出现棕黄色颗粒沉淀为阳性细胞(图1，2)，阳性细胞率 >10%为阳性，在病变处随机选取至少5个高倍视野(×400)，计数1000个细胞核，阳性细胞所占的百分率，作为p27和skp2的阳性率，每例标本重复三次，由两位有经验的病理医师在没有患者任何临床资料的情况下采用双盲法进行评估。
1.4 统计学处理 采用t检验和x2检验。
肝细胞癌p27蛋白表达细胞核阳性。S-P法10×10
肝细胞癌skp2蛋白表达细胞核阳性。S-P法10×10
2 结果
2.1 p27在肝细胞癌和癌旁组织中表达 见表1。
肝细胞癌与癌旁组织比，x2=20.6, P<0.05 ，高分化与低分化癌比x2=6.09, P<0.05
2.2 skp2在肝细胞癌和癌旁组织中的表达 见表2。
肝细胞癌与癌旁组织比，x2=6.34，P<0.05，高分化与低分化癌比x2=8.93，P<0.01。
3 讨论
研究表明，肝癌的发生与细胞生长调控机制紊乱、癌基因的激活、染色体缺失、抑癌基因缺失、黄曲霉素以及HBV和HCV感染等多种因素有关。P27是近年来发现的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂家族中重要的一员，作为细胞周期的负性调控因子，被认为是一种抑癌基因，可直接抑制Cyclin-CDK复合物的生物学活性，从而阻止细胞通过G1期到S期转换的关卡。[2，3]P27基因的突变、丢失与细胞增殖、癌变有密切关系。本组资料表明，p27在肝细胞癌中表达率为23%，显著低于癌旁组织(P<0.05)，p27在肝细胞癌中的表达率随着分化程度的降低而显著降低。这表明p27在肝细胞癌中的表达降低与肝细胞癌生物学行为，肿瘤细胞发生等相关，本文研究结果表明，p27可以作为一个判断预后的有用指标。Skp2作为人类F-box蛋白家族中的一员，在许多细胞周期调控因子的泛素依赖性蛋白水解途径中起到特异性识别底物的作用，从而参与细胞周期的调控。[4]我们的研究显示，skp2在60例肝细胞癌中47%(28/60)阳性表达，癌旁组织中为15%(3/20)，差异有统计学意义，说明skp2与肝细胞癌发生发展有密切关系。60例肝细胞癌中高分化癌13%(2/15)阳性表达，低分化癌为58%(26/45)，skp2蛋白在肝细胞癌中的表达率随着分化程度的降低而增高，提示skp2与肿瘤的恶性度有一定关系。本研究与Koga等[5]的研究基本吻合，由于skp2的表达特异性，故对于skp2的检测可能可以作为判断肝细胞癌预后的一个指标，也是中低分化肝细胞癌的一个靶位点。
【】
[1]Oliveira AM, Okuno SH, Nascimento AG, et al. Skp2 protein expression in soft tissue sarcomas[J].J Clin Oncol, 2003, 21(4)∶722.
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[5]Koga H, Harada M, Ohtsubo M， et al. Troglitazone incluces p27kip1-associated cell-cycle arrest through downregulating skp2 in human hepatoma cells[J].Hepatology, 2003, 37(5)∶1086.
