解酒利胆汤对酒精性脂肪肝大鼠肝氧化应激状态的影响

【摘要】  　　目的:探讨解酒利胆汤对酒精性脂肪肝大鼠肝氧化应激状态及脂代谢的影响。方法:酒精灌胃加用高脂、高铁饲料方法诱导酒精性脂肪肝模型，用解酒利胆汤对其进行6周后检测肝MDA含量和GSH?Px、SOD活力以及肝TG含量。结果：解酒利胆汤能够明显降低酒精性脂肪肝大鼠肝MDA含量，提高GSH?Px、SOD活力，并能减少肝TG含量。结论：解酒利胆汤具有潜在的治疗酒精性脂肪肝的作用。

【关键词】  解酒利胆汤 酒精性脂肪肝 肝 氧化应激 大鼠

　　解酒利胆汤是具有疏肝健脾、解酒利胆功效的方剂，在临床上用以治疗酒精性脂肪肝，收到了良好的疗效。本文研究了解酒利胆汤对实验性酒精性脂肪肝大鼠肝氧化应激状态的影响，为今后临床应用提供了理论基础。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物  健康雄性Wistar大鼠50只，体重(200±20)g，由吉林大学白求恩医学部基础医学院实验动物中心提供。

　　1.1.2  试剂  解酒利胆汤由葛花、桂枝、白芍、生甘草、柴胡、茯苓、神曲、熊胆粉(单包后放)组成，饮片购自长春市永新大药房；胆固醇购自上海邦威化工有限公司；硫酸亚铁购自上海绿源精细化工厂；56%北京二锅头购自北京顺通三星酒业有限公司；熊胆粉购自黑龙江垦区野宝药业有限公司；凯西莱购自河南新谊医药集团公司新乡联谊制药厂；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽?过氧化物酶(GSH?Px)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

　　1.2  方法

　　1.2.1  模型制备  将60只大鼠适应性喂养1周后，随机分为5组，每组10只。除正常组外，均用56%北京二锅头以1.5 mL/100 g B.W剂量每日早晨灌胃1次，饲以高脂饲料，饮用自来水；给正常对照组灌胃同体积的生理盐水，饲以普通饲料，饮用自来水。于造模开始第2、4、5周末，从造模组随机抽取1只大鼠；第6周末随机抽取5只处死，根据肝病理检测结果判别是否达到模型标准。

　　1.2.2  实验动物分组及药物干预  造模成功后，将酒精性肝病大鼠随机分为酒精性肝病模型组、解酒利胆干预组和凯西莱干预组。给药剂量解酒利胆汤为1 mL/100 g，生药浓度为1.465 g/mL(相当于临床用量的7.5倍);凯西莱为1 mL/100 g，浓度为2.083 mg/mL(相当于临床用量的7.5倍)，每日1次，正常对照组和模型对照组均灌胃等体积生理盐水。药物干预期间，除正常组外，均饲以高脂饲料、灌胃酒精(1.5 mL/100 g B.W剂量)，正常组饲以普通饲料、灌胃0.9%生理盐水(1.5 mL/100 g B.W剂量)。按照以上分组给药方案给药6周后处死动物。

　　1.3  统计学分析  实验数据使用SPSS 13.0统计软件处理。

　　2  结果

　　2.1  模型制备情况  肉眼观察正常组肝表面颜色暗红，色泽鲜亮，硬度中等，模型组大鼠肝色泽晦暗，部分肝略呈淡黄色，质地比正常组较硬。镜下观察正常组肝小叶结构清晰，肝板以中央静脉为中心向周围呈放射状排列，肝血窦与肝板之间界限清楚，肝细胞胞浆丰富、均匀，核大而圆，位于细胞的中央。造模2周后肝细胞胞浆内出现细小的脂肪空泡，到4周模型组肝细胞内出现大小不等的脂肪空泡，部分脂防空泡将核推挤到细胞一侧，肝细胞核挤到周边。第6周模型组大鼠肝小叶结构略紊乱，肝血窦变窄，界限不清楚，大多数肝细胞质变(图略)。
       
　　酒精灌胃6周后，模型组大鼠光镜下病理改变主要以单纯性肝细胞脂肪变性为主，其中有1只大鼠＜30%的肝细胞出现脂变，属轻症酒精性肝病病理变化范畴；有4只大鼠＞30%的肝细胞出现脂变，属酒精性脂肪肝病理变化的范畴。组间病理改变具有极显著性差异(P<0.01)。

　　2.2  解酒利胆汤对酒精性脂肪肝大鼠肝SOD、GSH?Px活力和MDA含量的影响  模型组大鼠肝SOD活力明显低于正常对照组(P＜0.01)，凯西莱组和解酒利胆汤组明显高于模型对照组(P＜0.01)。解酒利胆汤组肝SOD活力略高于凯西莱组，但没有显著差异。模型组大鼠肝GSH?Px活力明显低于正常对照组(P＜0.01)，凯西莱组和解酒利胆汤组明显高于模型对照组(P＜0.01)。凯西莱组肝GSH?Px活力略高于解酒利胆汤组，但没有统计学差异。模型组大鼠肝MDA含量明显高于正常对照组，凯西莱组和解酒利胆汤组明显低于模型对照组(分别为P＜0.05和P＜0.01)。解酒利胆汤组肝MDA含量略低于凯西莱组，但组间没有显著差异。

　　2.3  解酒利胆汤对酒精性脂肪肝大鼠肝TG含量的影响  模型组大鼠肝TG含量明显高于正常对照组(P＜0.01)，解酒利胆汤组和凯西莱组明显低于模型对照组(P＜0.01)，解酒利胆汤组TC含量略低于凯西莱组，但组间无显著差异。

　　3  结论
       
　　解酒利胆汤是根据中医传统理论和药理自拟的中药复方方剂，具有疏肝健脾、解酒利胆的功效，具有良好的降脂、降酶作用。现代药理研究已经证实，葛花可有效改善血中乙醇浓度，降低血中酐油三脂。熊胆提取物可能有类似胆固醇树脂消胆胺的作用，可降低血脂，具有利胆作用，可促进胆汁分泌，减轻胆汁酸瘀积，改善肝功能［1?2］；抑制脂质过氧化反应，稳定肝细胞膜，保护线粒体［3?5］；通过抑制TGF?β1，从而抗肝细胞凋亡［6］，阻断肝纤维化。
       
　　本实验结果表明解酒利胆汤对大鼠酒精性脂肪肝具有潜在的作用，其机理可能是与减少过量自由基的产生，抑制脂质过氧化，调节肝脂肪代谢有关。

【】
  　　［1］钟 岚,范建高.熊去氧胆酸在慢性肝病中的应用及机制［J］.国外医学:消化系疾病分册,1999,19(2):91.

　　［2］Elsing C,Sagesser H,Reichen J.Ursodeoxycholate?induced hypercholeresis in cirrhotic rats: further evidence for cholehepatic shunting［J］.Hepatology,1994,20(4?1):1 048.

　　［3］Rodrigues CM,Fan G,Ma X,et al.A novel role for ursodeoxycholic acid in inhibiting apoptosis by modulating mitochondrial membrane perturbation［J］.J Clin Invest,1998,101(12):2 790.

　　［4］Yerushalmi B,Dahl R,Devereaux MW,et al.Bile acid?induced rat hepatocyte apoptosis is inhibited by antioxidants and blockers of the mitochondrial permeability transition［J］.Hepatology,2001,33(3):616.

　　［5］Guldutuna S,Zimmer G,Imhof M,et al.Molecular aspects of membrane stabilization by ursodeoxycholate［see comment］［J］.Gastroenterology,1993,104(6):1 736.

　　［6］Keith BD.Ursodeoxycholic acid to inhibit the growth of hepatic metastases［J］.Med Hypotheses,2000,55(5):379.