高效液相色谱法测定脑得安颗粒有效成分含量

【摘要】  　　目的：建立测定脑得安颗粒有效成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)对脑得安颗粒中葛根的含量进行测定。结果：葛根素在0.081～0.41 μg之间具有良好的线性关系，平均回收率为100.05%,RSD=1.22%(n=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于脑得安颗粒中葛根的含量测定。

【关键词】  脑得安颗粒 葛根素 色谱法 高压液相

　　脑得安颗粒由三七、川芎、红花、葛根等中药组成。具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍的功效。为了控制脑得安颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定脑得安颗粒中葛根的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。

　　1  实验材料
   
　　Waters600高效液相色谱仪；Waters 2487紫外?可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；葛根素(购自药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；脑得安颗粒由本院自制。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件［1?2］  色谱柱：EclipseXDB?C18(4.6 mm×250 mm，5 μg)；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0 mL/min；柱温25℃;检测波长：245 nm；进样量10 μg。

　　2.2  对照品溶液的制备  精密称取葛根素对照品5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度,摇匀，精密量取1 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　2.3  供试品溶液的制备  取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL,称定重量，加热回流20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置蒸发皿中蒸干,残渣用甲醇定容至10 mL，摇匀，即得。

　　2.4  阴性对照品溶液的制备  按处方制备取不含葛根药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。

　　2.5  线性关系考察  精密吸取葛根素对照品溶液2、4、6、8、10 μg分别注入液相色谱仪，测定葛根素色谱峰面积。以葛根素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.45×103+8.05×106X，r=0.999 6。结果表明在0.081～0.4 μg之间具有良好的线性关系。

　　2.6  精密度实验  精密吸取同一供试品溶液(批号:050502)10 μg，重复进样6次，分别葛根素的质量分数，结果其RSD分别为0.95%和1.08%。

　　2.7  稳定性试验  精密吸取对照品溶液10 μL，分别于0、2、4、24、36 h测定峰面积,计算得葛根素峰面积RSD分别为1.23%和1.88%，表明对照品葛根素在36 h内稳定。

　　2.8  重现性实验  取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，计算葛根素质量分数，其RSD为0.96%。

　　2.9  回收率实验  采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0.50 g，置具塞锥形瓶中，各精密加入葛根素对照品0.08 mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果葛根素平均加样回收率为100.05%，RSD为1.20%。

　　2.10  样品测定  取3批脑得安颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，进样，测定，结果RSD为1.22%。

　　3  小结
   
　　流动相的确定：本实验曾选择乙腈?水溶液系统，结果不太理想，葛根的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-水系统，葛根的峰形得到明显的改善，且干扰减少［1?2］。

【】
  　　［1］杨美林,仲崇林,刘诗月.高效液相色谱法测定乳增胶囊中芍药苷的含量［J］.长春中医药大学学报,2006,22(3):44.

　　［2］王秋香,季宏伟,张彦彤.高效液相色谱法测定三磷酸胞苷二钠中的含量［J］.长春中医药大学学报,2007,23(3):26.