创伤性休克大鼠血浆AT-Ⅲ与中性粒细胞选择素-L表达的相关性研究
【摘要】 目的 研究创伤性休克大鼠血浆抗凝血酶AT-Ⅲ变化与中性粒细胞选择素-L表达的相关性。方法采用Lamson ， s法建立大鼠创伤性休克模型。观察创伤性休克大鼠休克前、休克后1h、3h、5h、7h中性粒细胞选择素L表达的动态变化，并监测各时间点血浆AT-Ⅲ变化。结果创伤性休克大鼠血浆AT-Ⅲ与中性粒细胞选择素-L表达呈负相关。结论大鼠创伤性休克时间逐渐延长，中性粒细胞选择素-L表达逐渐上调，而血浆AT-Ⅲ逐渐下降。
【关键词】 创伤性休克 血浆AT-Ⅲ 选择素-L
【Abstract】Objective To study the relationship between the changes of antithrombin AT-Ⅲand the expression of neutrophil selectin-L in traumatic shock rats.Methods Themodel oftraumatic shockratswas establishedbyLamson ， s method.Dynamicchangesofneutrophilselectin-Lpre-shock，atthetime1hr，3hr，5hr，and7hraftershockwereobserved.Atthe same time，the changes of blood plasma antithrombin AT-Ⅲwere monitored.Results The relationship of blood plasmaantithrombinAT-Ⅲandtheexpressionofneutrophilselectin-Lwerenegative.Conclusion Withthetimeofshock intraumaticratprolonginggradually，theexpressionofneutrophilselectin-LincreasedbutbloodplasmaantithrombinAT-Ⅲdecreased.
【Keywords】traumatic shock;AT-Ⅲ;neutrophil selectin-L
随着事故伤增多，创伤性休克明显增加。创伤性休克后弥散性血管内凝血（DIC）和多器官功能不全综合征（MODS）发生率较高。笔者采用Lamson's法建立大鼠创伤性休克模型，观察创伤大鼠性休克前、后中性粒细胞选择素-L表达的动态变化，并监测各时间点大鼠血浆AT-Ⅲ变化，报告如下。
1资料和方法
1.1创伤性休克模型的建立 实验动物随机分为对照组及休克组，每组20只健康的普通级SD大鼠，雌雄不拘，由温州医学院动物实验室提供。采用Lamson's法建立创伤性休克模型，麻醉后行颈动静脉插管，动脉插管接压力换能器多功能监护仪，监测平均动脉压。静脉插管用于补液及留取血标本。上述操作完成后休克组用3kg铁锤自0.5m高处垂直下落，击中股 骨中段处致粉碎性骨折，经颈静脉放血使平均动脉压稳于45mmHg左右，并留取血标本即开始休克计时，休克后1h、3h、5h、7h留取血标本。对照组麻醉后行颈动静脉插管，动脉插管接压力换能器多功能监护仪，监测平均动脉压，不致休克。各组各时间点所采之血样本置入含有0.5ml浓度为0.109mmol/L枸橼酸钠的试管中抗凝，3000r/min离心5min，分离上清液及沉淀物待测。
1.2 方法 检测中性粒细胞选择素-L的表达采用流式细胞仪（FACSCalibur，Becton-Dickinson，美国），血浆抗凝血酶含量（AT-Ⅲ）采用Laureu免疫火箭电泳法，测试药盒由上海生物制品研究所提供。
1.3 统计学处理 数据采用SPSS10.0统计软件进行处理，计量资料用配对t检验，计数资料用χ 2 检验，应用直线相关分析作相关性分析。
2结果
创伤性休克大鼠血浆AT-Ⅲ与中性粒细胞选择表1创伤性休克大鼠各时间点血浆AT-Ⅲ含量与中性粒细胞选择素-L表达的动态变化（注: 与休克前比较， * P<0.01。素-L表达的动态变化详见表1。创伤性休克大鼠血浆AT-Ⅲ与中性粒细胞选择素-L表达的关系，因变量中性粒细胞选择素-L表达量（Y），自变量AT-Ⅲ（X）直线回归与相关结果为:Y=14.68-247.93X，r=0.96，P<0.01，表明线形回归方程有显著性，两者呈负相关。
3讨论
创伤性休克是机体遭受剧烈创伤打击后产生的全身神经内分泌体液血管血液反应。病检查发现，休克发生后，大量血小板和炎性细胞在全身各脏器微循环中粘附并聚集，组织中白细胞浸润和凝血系统活化 ［1］ 。创伤性休克导致血液凝固性增高，有利于血栓形成 ［2］ 。创伤性休克诱导选择素-L、细胞粘附分子表达 ［3］ 。休克发生后由于氧自由基、细胞因子等作用，可损伤血管内皮细胞释放组织因子而激活触发凝血反应，出现高凝状态。近来发现发生DIC过程中血浆AT-Ⅲ变化较为重要，休克发生后炎症反应导致血管通透性增加，血浆渗出，血液粘滞性增高，加重高凝状态。组织缺血缺氧，红细胞ATP酶活性下降，钙离子超载，红细胞变形能力降低及易于粘附、聚集。创伤性休克常伴有内毒素血症存在刺激缓激肽、TNF、白细胞介素（IL）等多种炎症介质和补体分泌增多，最终导致出血加重、低血压、休克。上述诸因素，均提示休克发生发展过程中存在发生弥漫性血管内凝血（DIC）的潜在条件。本研究采用Lamson ， s法建立创伤性休克模型，观察创伤性休克大鼠休克前、休克后1h、3h、5h、7h中性粒细胞选择素-L表达动态变化并监测各时间点的血浆AT-Ⅲ变化。AT-Ⅲ是抗凝血酶中最重要的一种因子，是体内主要的凝血系统抑制物，能抑制或灭活凝血酶。当体内AT-Ⅲ水平降低时，仅外加肝素难以阻断凝血过程，近年来的研究结果显示，AT-Ⅲ不仅具有抗凝的特性，而且还具有抗炎的作用，这可能是由于凝血系统与炎症细胞因子之间本身就存在一种相互作用的联系。有学者通过细胞培养及动物实验发现，AT-Ⅲ能削弱由内毒素所诱导的白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素8（IL-8）的反应。最近发表的一项Meta分析的结果显示:经过 对严重脓毒症患者30天的随访期后，AT-Ⅲ组总体死亡率的相对危险度较安慰剂组减少22.9% ［4］ 。AT-Ⅲ的这种抑制机体产生过度炎症细胞因子，从而减少机体死亡率的机制目前尚不明确，其机制可能与以下两个环节有关:①AT-Ⅲ促进内皮细胞合成前列环素，从而通过cAMP介导的途径抑制前炎症细胞因子的生成;②AT-Ⅲ干扰炎症细胞内信息的传递、核因子κB的活化、mRNA的合成及转译，从而将细胞的炎症反应降低到一个更接近生理的水平。
选择素-L又称白细胞选择素，主要表达在中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞表面，通过与唾液酸化路易斯寡糖的松散结合介导白细胞沿内皮细胞滚动，为能与内皮细胞紧密连接创造条件。此外，还在介导中性粒细胞向炎症部位浸润中起重要作用。本研究表明，创伤性休克时间越长，AT-Ⅲ含量越低，而中性粒细胞选择素-L表达越上调。在控制出血去除创伤性休克的原因后，适当地补充外源性AT-Ⅲ可能有助于改善创伤性休克的预后。
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