中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的概况
【关键词】 C6胶质瘤 细胞凋亡 中药
脑胶质瘤目前尚缺乏有效化疗药物，患者预后较差，术后平均生存时间＜2年。因此，除了研究新的靶向分子疗法外，尚需开发更加安全有效的药物或开展中西医结合综合，对于延长胶质瘤患者生存期很有意义。本文就近年中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究进展综述如下。
1 诱导C6胶质瘤细胞凋亡
近年来，中药干预肿瘤细胞凋亡的研究日益增多，热点多集中于Fas系统、TNF?d系统、Bcl?2家族、线粒体膜电位、脂质过氧化等方面。
Bcl?2高表达能抑制多种因素诱导的细胞凋亡，提示Bcl?2可能参与凋亡的信号途径的最后步骤的调节。周立祥[1]等研究发现，槲皮素（quercetin，QUE）通过抑制Bcl?2蛋白产物的表达来诱导C6细胞凋亡。实验中还发现随着Bcl?2的被抑制，p53表现出被激活趋势。肿瘤抑制基因p53作为一种转录因子可结合于许多重要的细胞蛋白，参与基因的表达调控，在存活中起重要作用。槲皮素诱导DNA损伤后，细胞有时间进行DNA 损伤修复，如果不能修复，则p53诱导细胞凋亡。应用免疫细胞化学染色技术检测p53(野生型wtp53)的表达，发现处理组p53蛋白表达水平增强，说明槲皮素激活了p53的表达，并最终启动细胞凋亡。徐英辉[2]等观察到，莪术提取物榄香烯能有效抑制C6胶质瘤细胞的恶性增殖，对胶质瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性，随着药物浓度的增加，榄香烯的抑制作用增强。在同一作用浓度下具有时间依从性关系，随着药物作用时间的延长，抑制作用增强。认为下调Bcl?2／Bcl?x／1基因及蛋白质表达可能是榄香烯诱导凋亡、抑制C6细胞增殖的主要机制。
Bax基因是 Bcl?2同源基因，其过表达可拮抗 Bcl?2的保护效应而使细胞走向凋亡。Bcl?2 蛋白与Bax蛋白的比值影响着细胞受到刺激后发生凋亡的比率。宋萍[3]等实验结果表明，Bax基因蛋白的高表达可能是鲜壁虎诱导C6胶质瘤凋亡的重要分子机制。研究认为，蛤蚧可诱导C6胶质瘤细胞凋亡，使Bax基因表达增高，并认为C6胶质瘤细胞的凋亡机制可能与Bax基因上调有关。周幽心[4]等研究表明，雷公藤甲素与雷公藤红素在一定浓度提高促凋亡基因Bax的表达而降低抑凋亡基因Bcl?2的表达，导致决定细胞凋亡发生与的Bax／Bcl?2比值显著提高。
编码蛋白C?myc是真核细胞内重要的转录因子，可诱导下游报道基因mRNA转录和蛋白表达，参与细胞增殖和凋亡调控。其表达异常增加可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡，诱导细胞转化和肿瘤形成。邓惠[5]研究发现，苦参碱抑制了C6细胞的恶性增殖和C?myc基因的转录调节作用，转录过程被抑制，使肿瘤细胞中RNA的合成减少，原癌基因C?myc蛋白表达受抑制，降低了C6细胞恶性度。这可能是苦参碱抑制大鼠胶质瘤细胞株C6增殖作用的机制之一。Kim[6]证实，人参皂苷G?Rh2可以通过ROS及Caspase激活通路诱导C6胶质瘤细胞凋亡。
2 影响C6胶质瘤细胞信号转导
细胞信号转导是指细胞接受胞外信号刺激，引起多种信号分子的转换，而产生生物学功能。各种细胞内外信号分子通过细胞内的信号转导过程，调节代谢酶、离子通道、转录因子等的活性，从而产生多种生物效应。研究表明，如果控制细胞增殖、分化的信息传递通路中某一环节的异常，可引起细胞生长失控，导致肿瘤的产生、转移、复发。研究发现，抗肿瘤中草药可从多条途径调节细胞信号转导通路，而发挥抗肿瘤作用。
2.1 对[Ca2+]依赖性蛋白激酶途径的影响 [Ca2+]信使分子参与许多重要的生命活动，如调节细胞的分裂、环核苷酸的代谢、磷酯酰肌醇循环和DNA 的合成等。许多学者认为，它处于多种细胞信号传递途径的中心地位。细胞内钙离子主要源于细胞外的钙离子通过分布于细胞膜上的离子通道内流和细胞内钙贮库的钙释放。吕晓川[7]等研究显示，柴胡皂苷元D(Saikogenin D，SGD)能剂量依赖性地引起神经胶质瘤C6细胞[Ca2+]升高，且在细胞外液无钙下此现象仍维持，表明[Ca2+]升高是细胞内钙贮库的钙释放引起的。SGD升高[Ca2+]，从而抑制C6细胞。
2.2 影响NF?κB途径 核转录因子?κB(nuclear factor?kappa B，NF?κB)通过调控多种基因的表达，参与机体防御反应、组织损伤和应激、细胞分化和凋亡以及肿瘤生长抑制过程的信息传递。NF?κB的异常活化和肿瘤有密切的关系，持续活化可促进肿瘤细胞的增生，抑制肿瘤细胞的凋亡，促进血管新生，提高肿瘤细胞的转移能力。杨正钦[8]实验发现，姜黄素（Curcumin）能够抑制C6细胞增殖，使细胞阻滞在 G1／S期，并诱导C6细胞凋亡；其作用机制可能与其上调 PTEN基因、增加 iROS的产生，进一步影响核转录因子 NF?κB和AP?1的活性，从而调节凋亡相关基因的表达有关。
2.3 影响蛋白激酶途径 蛋白激酶C(PKC)系统是神经胶质瘤信号转导途径之一，恶性神经胶质瘤对PKC调节十分敏感。PKC活性与这些肿瘤细胞的增殖有密切关系。PKC活性的提高是胶质瘤细胞恶性程度的标志。Baltuch[9]等研究发现贯叶连翘提取物金丝桃素可能是PKC的抑制剂，它可对多种肿瘤细胞产生细胞毒作用。
2.4 影响MAPK通路 MAPK信号通路在胶质瘤的发生中起着重要作用，与细胞的增殖、转移密切相关。其中细胞外信号调节激酶(ERK)通路可以促进细胞增殖，对抗细胞死亡信号。Akt作为细胞生存通路磷脂酰肌醇3?激酶／Akt(PI3K／Akt)的关键分子，在介导细胞生长和增殖 、运动和侵袭方面有着重要作用。Akt的活化与肿瘤的发生发展密切相关，在多种恶性肿瘤中都有 Akt的过度表达。姚轶群[10]等通过Western印迹法检测从中药莪术中提取的非细胞毒性抗肿瘤药物榄香烯(elemene)处理后的鼠胶质瘤C6细胞中ERK和Akt蛋白的表达,发现榄香烯可以下调C6胶质瘤细胞中磷酸化ERK的蛋白表达，对磷酸化Akt的蛋白表达没有明显影响，榄香烯对磷酸化ERK的下调作用同样呈剂量、时间依赖性。由此，推断榄香烯下调磷酸化ERK的蛋白表达与其抑制C6胶质瘤细胞的增殖相关。
3 影响C6胶质瘤细胞周期
肿瘤治疗的中心环节是干扰肿瘤细胞的细胞周期，从而使肿瘤细胞增殖速率减慢或诱导细胞凋亡。某些中药用药后肿瘤细胞都会发生增殖抑制(包括G1期停滞、S期蓄积和G2／M期阻滞)。王殿洪[11]等实验中发现，黄芩苷能阻滞 G1期C6细胞向S期移行，从而使进入S期的细胞数量减少。S期是细胞DNA合成期。黄芩苷使肿瘤细胞DNA合成障碍，从而抑制C6胶质瘤细胞的生长代谢增殖等过程，最终诱导细胞凋亡。李殿友[12]等证实，人参皂苷Rh2使C6细胞在S期发生阻滞，在S期启动并诱导C6细胞凋亡，从而抑制C6细胞增殖。李振飞[13]等使用中药平瘤康方剂（由蛇六谷、夏枯草、昆布、冰球子、莪术、白芷和全蝎等药物组成）含药血清能使DNA合成期(S期)细胞减少，合成前期(G1期)细胞增加，阻滞C6胶质瘤细胞G1期向S期的进程，干扰DNA的合成和分裂。
肖玉强[14]等研究发现，C6胶质瘤细胞凋亡随三氧化二砷作用的时间和剂量的增加而增加，但三氧化二砷对正常神经细胞生长的抑制作用较弱，提示三氧化二砷抑制细胞生长的作用具有一定的选择性。王殿洪[15]等实验发现，脱脂水提醇沉法提取的白花蛇舌草提取液对C6胶质瘤细胞的有效作用时间为12小时。在光动力学疗法与不同浓度白花蛇草提取液联合应用时，抑制率均较单独应用光动力学疗法或白花蛇舌草时提高，表明二者在抑制C6胶质瘤细胞增殖时有协同作用，这种作用在白花蛇舌草浓度为5.0μg／ml作用12小时时最明显。
4 展 望
综上所述，中药主要通过诱导C6胶质瘤细胞凋亡、影响C6胶质瘤细胞信号转导、影响C6胶质瘤细胞周期等途径作用于C6细胞，使C6细胞凋亡或是细胞分裂停滞，从而达到抗肿瘤的效果。目前，虽然对中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡机制的研究有一定的进展，但确切的机制尚未阐明。而且部分中药仅说明体外有效，体内的作用机制尚不明确，有待进一步研究。
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1 周立祥，罗毅男，付双林，等.槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用．吉林大学学报（医学版），2006，32（2）：251?253
2 徐英辉，董 斌，罗其中，等.榄香烯对大鼠胶质瘤C6细胞Bcl?2家族基因及蛋白表达的影响．中华医学杂志，2005,85(24):1700?1703
3 宋 萍，王学美，谢 爽，等.鲜壁虎冻干粉诱导 C6胶质瘤细胞凋亡的血清药研究.中西医结合杂志，2004，24（10）：919?921
4 周幽心，黄煜伦，许期年，等.雷公藤单体体外抑制胶质瘤细胞的实验研究．癌症，2002，21(10)：1106?1108
5 邓 惠,罗焕敏,黄 丰,等.苦参碱对C6胶质瘤细胞的增殖和原癌基因表达的影响．中药材，2004，27（6）：416?419
6 Kim HE，Oh JH，Lee SK．et al．Ginsenoside RH?2 induces apoptotic cell death in rat C6 glioma via a reactive oxygen? and caspase?dependent but Bcl?x(L)?independent pathway.Life Sci，1999，65(3)：33?40
7 吕晓川,白 林,王晓蕾.柴胡皂苷元D对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2+浓度的影响．安徽医科大学学报，2004，39（4）：250?252
8 杨正钦.姜黄素抑制 C6胶质瘤细胞增殖＼诱导其凋亡的分子机制.中国药理通讯，2006，23（4）：31?32
9 Baltuch GH,Couldwell WT,Villemure JG,et al．Protein kinase C inhibitors suppress cell growth in established and low?passage glioma cell lines.A comparison between staurosporine and tamoxifen．Neurosurgery,1993，33：495?501
10姚轶群，徐英辉，周洪语，等.ERK在榄香烯抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖中的作用．肿瘤,2007,27(10):777?779
11王殿洪，岳 武，杜智敏，等．黄芩甙诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究．中国肿瘤，2005，14（7）：468?471
12李殿友，罗毅男,杨 红,等．人参皂甙 Rh2诱导 G6胶质瘤细胞凋亡的实验研究．中国肿瘤临床，2003，30（7）：474?477
13李振飞，张梅奎，张笑明，等.平瘤康方剂对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用．中国康复理论与实践，2007，13（5）：438?439
14肖玉强，唐海涛，张良玉，等．三氧化二砷诱导C6胶质瘤细胞凋亡实验研究．中华神经外科疾病研究杂志，2007，6（4）315?318
15王殿洪，岳 武，史怀璋，等.光动力学疗法与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用．中国激光医学杂志，2005，14（5）：279?284
