腹腔镜阑尾切除术对免疫功能影响的探讨

[摘要] 目的：比较腹腔镜阑尾切除术与开腹阑尾切除术对腹腔局部免疫功能的影响。方法：检测62例腹腔镜阑尾切除术患者(A组)和66例开腹阑尾切除术患者(B组)腹腔中性粒细胞吞噬功能、巨噬细胞产生TNFα生物学活性、腹腔T细胞亚群CD4+/CD8+的比值，并采用T检验比较两组各项指标的差异。结果：B组和A组腹腔pH 值分别为7.13和7.39；中性粒细胞化学发光峰值为分别为98和102；L929细胞OD570值分别为0.183和0.152；CD4+/CD8+比值分别为0.53和0.57。除CD4+/CD8+比值外，其余三项指标的差异均有显著性。结论：与腹腔镜阑尾切除术比较，开腹阑尾切除术对腹腔局部免疫特别是细胞免疫有明显的抑制效应，对巨噬细胞功能的影响尤为显著。
[关键词] 阑尾切除术；腹腔镜手术；开腹手术；免疫功能
 
　　[Abstract] Objective：To compare the influence of laparoscopic and open ecphyadectom on the immune function of the local peritoneal cavity. Methods：Determination of the phagocytic function of neutrophils, the biological viability of TNF α produced by macrophages and the T lymphocytes subsets CD4+/CD8+ ratio of the peritoneal cavity in a group of 62 cases who underwent laparoscopic ecphyadectom and in another group of 66 cases who underwent open ecphyadectom. We used T test to compare the difference of these 4 indexes between both groups. Results：The group B and group A, The mean peak value of chemiluminescence was 98 and 102 respectively; the mean OD570 of L929 Cells was 0.183 and 0.152 respectively; and the CD4+/CD8+ ratio was 0.53 and 0.57 respectively. Except for the CD4+/CD8+ ratio, the difference of the other 3 indexes between both groups were of significance. Conclusion：Compared to laparoscopic surgery, open ecphyadectom has obvious depressive effects on the immune functions particularly cell-mediated immune function of the local peritoneal cavity.
　　[Key words] Ecphyadectom; Laparoscopic ecphyadectom; Open ecphyadectom; Immune function
　　
　　研究发现腹腔镜手术对全身创伤损伤较小，但创伤损伤小是否免疫功能影响也较小目前不清楚。自2005年1月～2007年12月，我们在收治的腹腔镜阑尾切除术患者和开腹阑尾切除术患者中检测相关指标并比较两者对全身免疫功能的影响，现报道如下：
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　腹腔镜阑尾切除术组(A组)共62例，男16例，女46例，年龄22～62岁，平均41岁。采用CO2气腹，压力12～14 mmHg。手术时间35～60 min，平均32 min。本组病例无中转开腹。开腹阑尾切除术组共66例(B组)，男24例，女42例，年龄21～68岁，平均42岁。本组手术时间30～50 min，平均40 min。
　　1.2方法
　　1.2.1腹腔液的获取两组患者均于手术结束关腹或关闭CO2气腹前，于腹腔液pH值测定后，以50 ml冷生理盐水冲洗腹腔内无血液污染处，2 min后收集灌洗液作进一步分析之用。
　　1.2.2中性粒细胞和巨噬细胞的分离腹腔灌洗液经葡聚糖沉降和淋巴细胞分离液离心分离二步方法获得中性粒细胞悬液(经低渗液除去红细胞)，台酚兰法检测中性粒细胞活性为95%以上。500 g离心腹腔灌洗液7 min沉淀细胞后弃去上清液，重新悬浮沉淀于1 ml含抗生素和10%胎牛血清的RPMI溶液中。将细胞接种于一个六孔板并稀释细胞悬浮液，使细胞终浓度为1×106/孔。台酚蓝法测得所有的巨噬细胞活力大于95%。
　　1.2.3中性粒细胞吞噬功能测定采用发光剂―鲁米诺法测定中性粒细胞吞噬功能。中性粒细胞悬液混匀置5% CO2培养箱37℃， 60 min，取悬液0.1 ml(5×106 cells/ml)，血浆活化酵母多糖(ZAS)0.2 ml(10 mg/ml)和鲁米诺0.7 ml(10～4 M)置测定管中。用LKB 1 250发光仪(Luminometer，Finland)测定出化学发光峰值，单位为V/mv，重复3次。峰值降低则表明吞噬功能受损。
　　1.2.4 TNF-α生物学活性检测将分离所得巨噬细胞置于37°C 5% CO2培养4 h以使细胞贴壁。以PBS洗涤两次。加入含脂多糖（LPS： E Coli:B4，Sigma：终浓度2 g/ml）的RPMI溶液，37℃培养过夜后收集上清液，离心除去细胞碎片，存于70℃备用。胰酶消化L929细胞，调整细胞浓度为2×105/ml。于96孔培养板每孔接种100 μl细胞悬液，37℃ 5% CO2培养4 h使细胞贴壁。每孔加入100 μl 4倍稀释的上清液，并置阴性对照。于37℃ 5% CO2孵育24 h后每孔各加50 μl MTT，继续培养4 h后弃上清，每孔各加150 μl DMSO，即在酶标自动分析仪570 nm波长下读取OD值。OD值越高则L929细胞生长抑制越轻，TNF-α生物学活性越低。