非小细胞肺癌组织中p16与p53等的表达及其相关性研究

                  作者：夏钰弘，杨国仪，洪建刚，虞敏红  

【关键词】  非小细胞肺癌；免疫组织化学；p16；p53；Ki

　　［摘  要］ 目的：探讨在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中p16、p53、Ki67的表达及其相关性。方法：采用免疫组化SP法检测p16、p53、Ki67在45例NSCLC组织中的表达情况。结果：45例NSCLC标本中p16阳性表达为17例（37.78%），p53阳性表达为25例（55.56%），Ki67阳性表达为34例（75.56%）。各种蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关（P<0.01），与年龄、性别、组织类型、分化程度无显著相关性（P>0.05）。p16和p53、Ki67的表达呈负相关。结论：p16、p53及Ki67对于判断NSCLC患者预后具有重要意义。

　　［关键词］ 非小细胞肺癌；免疫组织化学；p16；p53；Ki67

　　Study on the Expression and Correlation of p16 and p53 et al Proteins in Nonsmall Cell Lung Cancer

　　　Abstract：Objective To study the expression and correlation of p16,p53 and Ki67 proteins in nonsmall cell lung cancer (NSCLC).Methods Expression of p16,p53 and Ki67 proteins were detected in 45 cases of NSCLC by immunohistological technology (SP).Results Of the 45 cases NSCLC,17 cases (37.78%) were positive for p16,25 cases (55.56%) for p53 and 34 cases for Ki67 (75.56%).A significant relationship was found between the expression of p16,p53 and Ki67.That is,the cases with low expression of p16 and high expression of p53 and Ki67 were advanced cases and the rate of lymph node metastasis also increate.Conclusions p16,p53 and Ki67 maybe factors associated to estimate the prognosis of NSCLC.

　　Key words: Nonsmall cell lung cancer；Immunohistochemistry；p16；p53；Ki67

    肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来的发病率逐年上升，肺癌患者在确诊后5 a生存率不超过13%，因此，探讨肺癌的发生对于肺癌早期诊断具有重要意义。我们应用免疫组织化学方法观察NSCLC组织中的p16、p53和Ki67的表达情况及其相关性，分析其与肿瘤的增殖活性、恶性程度和预后的关系，为肿瘤的诊断和提供比较客观的依据。

　　1  材料与方法

　　1．1  标本来源 

　　收集无锡市第五人民病理科2004年5月至2005年5月手术切除后经病理诊断的非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer,NSCLC) 标本45例，其中男性34例，女性11例，年龄34岁～68岁，平均年龄53.7岁。按2004年WHO肺肿瘤分类标准［1］重新分类，鳞状细胞癌14例，腺癌23例，腺鳞癌8例。45例标本中伴淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者29例。标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，常规HE染色。

　　1．2  试剂 

　　鼠抗人p16单克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体、鼠抗人Ki67核抗原单克隆抗体，即用型，为美国Neomarkers公司产品，以上试剂均购自上海嘉晟科技发展有限公司。

　　1．3  免疫组织化学染色 

　　免疫组织化学采用SP法，切片经常规二甲苯脱蜡梯度乙醇水化。一抗孵育前切片经0.01M柠檬酸型缓冲液(pH=6.0)煮沸抗原修复。操作步骤按产品说明书进行。二氨基联苯胺(DAB) 显色。选用已知阳性的肺癌组织为阳性对照，以PBS液代替一抗作为空白对照。

　　1．4  结果判断 

　　p16、p53及Ki67染色结果以Liu［7］为标准，以胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞,阳性细胞数<25%为（-），阳性细胞数≥ 25%为（＋）。

　　1．5  统计学分析  采用χ2检验。

　　2  结果

　　2．1  p16、p53、Ki67在45例NSCLC表达，见表1  45例NSCLC标本中p16阳性表达为17例（37.78%），p53阳性表达为25例（55.56%），Ki67阳性表达为34例（75.56%）。各种蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关（P<0.01），与年龄、性别、组织类型、分化程度无显著相关性（P>0.05）。表1  NSCLC组织中p16、p53、Ki67的阳性表达率（略）   

　　2．2  NSCLC组织中p16和p53、Ki67的表达及相关性表2。表2  NSCLC中p16和p53、Ki67的表达关系（略）

　　3  讨论

　　p53是目前公认的抑癌基因，参与细胞增殖和分化的调控，与细胞周期、细胞增殖密切相关［3］，其主要生物学功能是引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡，促进细胞分化。除G1期阻滞外，p53还可使细胞阻滞在G2期［11］。此外，促进细胞终末分化可能是p53起抑癌基因作用的又一机制。肿瘤组织中p53的改变主要有突变、基因缺失和基因重组。最常见的p53基因突变为点突变。当基因发生突变时即由野生型变成了突变型,伴随基因突变而来的是p53肿瘤抑制功能的丧失和致癌功能的获得［2］。本实验结果显示鳞状细胞癌、腺癌、鳞腺混合癌及细支气管肺泡癌组织的p53表达基本一致，但在淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组。p16基因是目前为止发现的第1个直接控制细胞增殖周期的细胞固有蛋白，p16的抑制作用缺失，将使细胞异常增生［4］。p16基因突变和缺失广泛存在于各种肿瘤中，在胃癌、食管癌、黑色素瘤、胰腺癌等肿瘤中都检测到p16基因的高频率突变及缺失，提示p16基因变异是肿瘤发生与过程中的一个重要事件［5,6］。本实验结果显示NSCLC细胞及癌旁支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞均有p16的表达，NSCLC淋巴结转移组的p16表达低于无淋巴结转移组，与报道一致［8］。Ki67是一种细胞增殖因子，是出现在除G0期和G1早期所有细胞周期中的特异性非组蛋白，与细胞的合成代谢有关,能较正确地反映肿瘤性质。细胞的过度增殖与癌症的发生有关［9,10］，而低增殖率与5 a复发率、死亡率较低,患者缓解期、存活期较长有关，因此Ki67可作为一临床预后判断的重要标志物。

　　本实验结果表明p16、p53、Ki67的表达与淋巴结转移有明显关系，而与患者年龄、性别、组织类型、分化程度无明显关系。p16在有淋巴结转移的NSCLC组织中的表达明显低于无淋巴结转移者，p53、Ki67在有淋巴结转移的NSCLC组织中的表达则高于无淋巴结转移者，两者呈负相关。推测p16、p53、Ki67在NSCLC的发生发展及侵袭、转移中起着重要作用。在NSCLC患者中进行这三项指标的测定，对于患者预后的判断具有重要意义。

　　文献：

　　［1］冯晓冬，张震，赖日权，等.肺肿瘤分类（2004）［J］.诊断病杂志，2005，12（3）:239.

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　　［3］Kennedy MM，Lamb D，King G，et al.Cell proliferation,cell loss and expression of bcl2 and p53 in human pulmonary neoplasms ［J］.Br J Cancer,1997,75(4):545547.

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　　［6］Geradts J,Ingram CD.Abnormal expression of cell cycle regulatory proteins in ductal and lobular carcinomas of the breast［J］.Mod Pathol,2000,13:945953.

　　［7］Liu TJ,Tsai SC,Ho YJ,et al.Comparison of the expression of Ki67,and P53 to technetium tetrofosmin mammoscintigraphic findings［J］.Cancer Invest,2002,20(2):199205.

　　［8］Ito Y,Kobayash i T,Takeda T,et al.Exp ression of p16 and cyclin dependent in proteins in primary breast carcinomas［J］.Onco logy,1997,54(6):508.

　　［9］Riehard J,Oliver D,MacDonald G.Aspects of cell proliferation in oral epithelia dysplasia lesions［J］.J Oral Pathol Med,2000,29(2):4955.

　　［10］Kushner J,Bradley G,Joldan RCK.Pattens of p53 and Ki67 protein expression in epithelial dysplasia from the floor of the mouth［J］.J Pathol,1997,183(3):418423.

　　［11］支学军，薛军，邢立强，等.p53、p27、bcl2在非小细胞肺癌中表达的研究［J］.中国肺癌杂志，2002,1(5):5153.