黄芪失笑散对血管内皮功能的影响

                     作者：祝光礼 魏丽萍 方伟 钱宝庆

【摘要】  目的 观察黄芪失笑散对大鼠血管内皮功能的保护作用。方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟伐他汀组、黄芪失笑散大、中、小剂量组共6个实验组，除正常对照组外分别予以高脂饲料喂养， 12周时观察血清一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET)的变化。结果 黄芪失笑散各剂量组均能明显升高NO，降低ET，与模型组比较有显著差异（P<0.05），作用与氟伐他汀组相当（P>0.05）。结论 黄芪失笑散具有调节NO/ET的平衡，有效保护血管内皮细胞的功能。

【关键词】  黄芪失笑散 血管内皮功能 一氧化氮 血浆内皮素

　　【Abstract】  Objective  To investigate the protective effect of Astragalus Shixiao Decoction on vascular endothelial function in rats. Methods  SD rats were randomly divided into six groups: control group, model group, fluvastatin group, large-dosage Astragalus Shixiao Decoction group, moderate dosage Astragalus Shixiao Decoction group, small-dosage Astragalus Shixiao Decoction group.The fatty foodstuff were given to the treated groups and model group, but none to control group. The nitricoxid (NO) and endothelin(ET)in the serum were determined at the 12th week.  Results  The function in reducing ET and increasing the concentration of NO is similar between the Astragalus Shixiao Decoction groups and the fluvastatin group（P>0.05）,but different from the model group（P<0.05）. Conclusions  Astragalus Shixiao Decoction plays an essential role in keeping the vascular endothelial function by the balance of NO/ET.

　　【Key words】  Astragalus shixiao Decoction  vascular endothelial function  nitricoxid  endothelin   
　　动脉粥样硬化(AS)的形成包括一系列病理过程，其中血管内皮细胞功能受损是导致AS形成的始动环节。血管内皮细胞具有代谢活性，分泌许多活性物质，通过分泌内皮源性血管收缩因子和内皮源性血管舒张因子调节血管平滑肌张力，前者包括内皮素、血栓素A2(TXA2)、前列腺素H2等，后者包括一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、内皮源性超极化因子等。这些因子调节着血管壁的舒缩功能和平滑肌细胞的稳态和增殖，并在血液和血管内壁的界面上调节着凝血、纤溶、白细胞黏附与迁移的过程。内皮功能失常使这些调节过程发生障碍而导致AS发生、。
   
　　中医并无动脉粥样硬化这一病名，根据其症候、病因、病机，多散见于“心痛”、“胸痹”、“痰饮”、“眩晕”、“水肿”等病症门类中。其病机为本虚标实，心肝脾肾虚损为本，血瘀痰浊为标，尤以气虚血瘀多见，上以益气活血居多。黄芪失笑散是由大剂量的黄芪合用失笑散而成，具有补益心脾之气，活化心胸之瘀滞的功效。为验证其疗效及进一步阐述其机理，我们设计了这一实验来观察其对大鼠血管内皮功能的保护作用，为进一步阐释该方抗动脉粥样硬化机制打下基础。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料 

　　动物：清洁级SD大鼠48只，一级质量标准，雄性，体重(130±20)g，由浙江中医药大学动物实验中心提供。药物与试剂：黄芪失笑散(由黄芪30g、蒲黄20g、五灵脂20g组成)，煎煮浓缩成2g/ml的生药煎剂，实验前用蒸馏水配成相应的浓度备用；氟伐他汀钠(北京诺华制药有限公司)，用时以蒸馏水配置成1mg/ml的液体；一氧化氮试剂盒（南京生物工程研究所生产）；内皮素放免试剂盒（解放军总科技中心放免所生产）；维生素D3（上海化学试剂公司生产）。

　　1.2  方法 

　　动物分组与造模：选用健康成年SD大鼠48只，随机分为六组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、氟伐他汀组（C组）、黄芪失笑散大剂量组（D组）、黄芪失笑散中剂量组（E组）、黄芪失笑散小剂量组（F组）。正常对照组喂以普通饲料加蒸馏水灌胃；黄芪失笑散大、中、小剂量组喂以造模饲料加黄芪失笑散相应剂量（分别为成人剂量的20倍、10倍、5倍，即28g/kg·d、14g/kg·d、7g/kg·d）灌胃；氟伐他汀组喂以造模饲料加氟伐他汀（相当于成人剂量10倍，即8mg/kg·d）灌胃；模型组喂以造模饲料加蒸馏水灌胃。黄芪失笑散各组、模型组和氟伐他汀组在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D360万IU/kg，正常对照组给予同等体积的生理盐水，实验为期12周。造模饲料成分：普通饲料+3%胆固醇粉+0.5%胆酸钠＋5%蛋黄粉+10%猪油＋5%白糖。仪器：主要仪器有SN-682放射免疫r计数器（院上海原子核研究日环仪器厂），分光光度仪（上海第二仪器厂），高速离心机（上海医用分析仪器厂），电热恒温水浴箱（上海精宏实验设备有限公司）等。

　　1.3  指标检测 

　　(1)血清NO的测定：实验12周从大鼠股静脉采取静脉血，3000prm离心15min，分离血清，-20℃冰箱保存待测。采用硝酸还原酶法，硝酸还原酶法按试剂盒说明进行。分三管：空白管内置双蒸水0.1ml，试剂Ⅰ 0.2ml，试剂Ⅱ 0.2ml；标准管内置100μmmol/L 试剂Ⅰ 0.2ml和试剂Ⅱ 0.2ml；测定管 内置样本0.1ml，试剂Ⅰ0.2ml，试剂Ⅱ0.2ml。三管均震混匀，于37℃水浴60min，然后各管加入试剂Ⅲ 0.2ml和试剂Ⅳ0.1ml，充分旋涡混匀30s,室温静置10min，3500～4000转/min，离心10min，取上清显色(上清液各0.5ml，显色剂各0.6ml)混匀，室温静置10min，蒸馏水调零，550nm，0.5cm光径，测各管吸光度值。公式：     NO含量（ummol/L）=测定管吸光度-空白管吸光度标准管吸光度-空白管吸光度×标准品浓度 ×样品测试前倍数（100ummol/L）血浆ET的测定：实验12周结束后从大鼠股静脉采取静脉血2ml，注入含10％EDTA二钠30ul和抑肽酶40ul，混匀4℃，3000prm离心10min，分离血浆，-20℃冰箱保存待测。(2)血浆内皮素检测：采用放射免疫法检测，放免法按试剂盒说明进行。

　　1.4  统计学方法 

　　计量资料以（x±s）表示，用SPSS 12.0 统计软件对其进行单因素方差分析。

　　2  结果

　　2.1  黄芪失笑散对大鼠血清NO的影响
 
　　见表1，模型组大鼠血清NO水平比正常对照组显著降低(P<0.01), 黄芪失笑散各组、氟伐他汀组与模型组相比明显升高(P<0.05)，各组之间比较无统计学意义（P>0.05），黄芪失笑散各组与氟伐他汀组比较也无统计学意义（P>0.05），但各治疗组之间的疗效存在着一定的趋势，依次为黄芪失笑散大剂量组、氟伐他汀组、黄芪失笑散中剂量组、黄芪失笑散小剂量组。表1  黄芪失笑散对大鼠血清NO的影响（略）］注：与模型组比较，?P<0.05，??P＜0.01

　　2.2  黄芪失笑散对大鼠血浆ET的影响 

　　结果见表2，模型组大鼠血浆ET水平比正常对照组显著升高(P<0.01)，黄芪失笑散各组、氟伐他汀组与模型组相比明显降低(P<0.05)，各治疗组之间比较无统计学意义（P>0.05），黄芪失笑散各组与氟伐他汀组比较也无统计学意义（P>0.05），但各治疗组之间的疗效存在着一定的趋势，依次为黄芪失笑散大剂量组、氟伐他汀组、黄芪失笑散中剂量组、黄芪失笑散小剂量组。表2  黄芪失笑散对大鼠血浆ET的影响［n=6，(略)］注：与模型组比较，?P<0.05，??P<0.01

　　3  讨论

    根据动脉粥样硬化的病因特点，益气活血方药在动脉粥样硬化的治疗中发挥了更多的优势。黄芪失笑散是由大剂量的黄芪合失笑散而成，全方以益气为本，活血化淤为标，标本同治，虚实兼顾。我们在长期的临床实践中摸索出应用的黄芪失笑散可以降低血脂，延缓甚至消退动脉粥样硬斑块。方中黄芪味甘，性温，归脾、肺经，是补气中的要药。药理研究表明，其具有保护血管内皮及血管平滑肌、促进NO合成等作用。五灵脂配蒲黄，二药相须为用共奏活血散结、祛瘀止痛之效。现代研究发现，蒲黄具有保护血管内皮细胞，抗血小板聚集与抗血栓形成等作用，蒲黄中的不饱和脂肪酸榭皮素有明显的抗动脉粥样硬化作用［１］；五灵脂具有抗炎、抗血小板聚集、清除自由基作用［２］。

    血管内皮细胞在维持血管正常功能方面起着重要作用，人们把内皮细胞视为治疗和预防心血管疾病的靶点［３］。内皮细胞不仅是血液和组织间进行交换的屏障，而且它也是一种多功能的细胞，可合成和分泌多种生物活性物质，如NO、ET。NO是以L-精氨酸为底物在血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)作用下合成的血管活性物质。其是一种重要的内皮源性血管舒张因子，还具有抗氧化、抑制白细胞和血小板黏附与激活、抑制SMC增殖与诱导SMC凋亡等多种生理和病理作用。ET是内皮细胞分泌的一种由21个氨基酸组成的血管多肽，是目前发现的最强的内源性缩血管物质。当ET增高到一定程度时，引起冠状动脉痉挛，从而损害内皮细胞，促进AS的形成，并通过刺激SMC增殖的作用，进一步加重AS的［4］。NO/ET是一对具有拮抗效应的血管活性物质，两者合成释放作用的协调是维持血管张力的主要因素之一［５］，是反映血管内皮功能的主要生物学指标。动脉粥样硬化的始动环节是血管内皮细胞的损伤，当内皮损伤时，NO合成减少，导致血管舒张功能障碍，加速血小板的黏附和聚集，同时刺激内皮细胞分泌过多的ET，使血管痉挛。内皮细胞损伤时极易发生脂质沉积，单核细胞吞噬脂质形成泡沫细胞，进一步加速动脉粥样硬化的形成。

　　本实验结果显示，模型组大鼠血清NO含量降低，ET含量升高，说明大鼠动脉粥样硬化时内皮功能受损。黄芪失笑散治疗后的大鼠血清NO含量升高，ET含量降低，说明黄芪失笑散改善了内皮细胞功能，增加内皮细胞合成NO的能力,减少ET的释放，保护了内皮依赖性舒张功能，从而起到抗动脉粥样硬化形成的作用。

【】
  　　1 杨芳.蒲黄之药理.浙江中医学院学报,1998,22(1):49.

　　2 陈月开,王海雄,袁勤生.五灵脂对小鼠血液中SOD活性的影响.生化药物杂志,1994;15(3):161.

　　3 Rosss R. The pathogenesisof atherosclerosis：A perspective for the1990s.Nature, 1993,362:801.

　　4 许爱梅，庄向华. 内皮素-1的研究进展. 国外医学·内分册,2004,31(5):198.

　　5 康文英，沃兴德.巨噬细胞与动脉粥样硬化斑块稳定性.中国动脉硬化杂志，1997（4）：354～356.