怀牛膝“泛糖”前后齐墩果酸的含量变化研究

                 作者：赵玉梅，王静，梁生旺，张翠英，冯卫生，张广强

【摘要】  目的 分析“泛糖”前后怀牛膝三萜皂苷类成分的变化。方法 采用双波长锯齿扫描法，以齐墩果酸为对照品，λs=665 nm, λR=380 nm。结果 不同程度“泛糖”牛膝中齐墩果酸的含量分别为：1.52%，1.36%，1.30%，1.25%。结论 “泛糖”后牛膝中三萜皂苷的含量降低。

【关键词】  怀牛膝；泛糖；齐墩果酸；薄层扫描法

　　Abstract:Objective and methods To determine the content of triterpenoid saponins before and after strorage by double wavelength spectrophotometry. The wavelength was 665 nm, and oleanolic acid was used as standard reference material. Results The contents of oleanolic acid varied from 1.25% to 1.52%. Conclusion  The contents of triterpenoid saponins decreased after storage.

　　Key words:Achyranthes bidentata; floating sugar; oleanolic acid; thin layer chromatography

　　牛膝系苋科Amaranthaceae牛膝属植物牛膝Achyranthes  bidentata Blume的根，具有补肝肾、强筋骨、活血逐瘀、引血下行之功效。牛膝在贮藏过程中易“泛糖”，引起药材的质变，使药效降低，影响临床疗效［1-4］。本文对牛膝“泛糖”前后齐墩果酸含量变化的情况进行研究，报道如下。

　　1  仪器与材料

　　1.1  仪器
    　　
　　FN202?2型电热干燥箱（长沙仪器仪表厂），SHZ?B水浴恒温振荡器（上海跃进医疗器械厂），DZF?1B型真空干燥箱（上海跃进医疗器械厂），CS?9301 PC双波长飞点扫描分析仪（日本岛津），METTLER  AE 240分析天平（瑞士），939薄层制板器（重庆南岸贝尔德仪器技术厂），定量毛细管（美国Drummond  Co.）。

　　1.2  药品
    　　
　　齐墩果酸对照品（药品生物制品检定所，批号：8501）；其余所用试剂为分析纯。

　　1.3  药材
       
　　采自河南省武陟县大丰乡驾部村，经河南中医学院曹继华教授鉴定为苋科牛膝属植物牛膝Achyranthes  bidentata  Blume.的根，符合《中华人民共和国药典》2005版一部规定，商品规格为二肥。“泛糖”牛膝分为4个等级：正常牛膝、“泛糖”开始、“泛糖”较重、“泛糖”严重，色度指标分别为：0.070 3，0.120 8，0.284 6，0.471 2。

　　2  实验部分

　　2.1  层析条件的确定
         
　　薄层板：硅胶 G，0.5 mm，110 ℃活化30 min；展开剂：三氯甲烷?甲醇?甲酸（体积比20∶1∶0.2），饱和1 h，展开12 cm；显色剂：5%磷钼酸试液，105 ℃烘5 min，显蓝色斑点。
         
　　扫描条件：反射法锯齿型双波长扫描，线性参数SX=3，狭缝0.4 mm×0.4 mm，灵敏度中等，背景校正ON，检测信号峰面积，λs=665 nm，λR=380 nm。

　　2.2  线性范围
       
　　精密称取齐墩果酸对照品2 mg，置2 mL量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（1.03 mg/mL）。分别精密吸取齐墩果酸对照品溶液2，4，6，8，10 μL点于同一硅胶G薄层板上，按上述层析条件展开，显色，采用反射法锯齿型双波长扫描测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理，得回归方程为A=13137x-490.8,r=0.9985，表明齐墩果酸在2.06～10.30 μg范围内，点样量与峰面积呈一不通过原点的直线，故用外标二点法定量。

　　2.3  精密度试验
       
　　在同一硅胶G薄层板上点相同量对照品溶液2 μL,共点5个点，展开，显色，测得各斑点峰面积积分值的RSD值为1.53%。表明精密度良好。

　　2.4  稳定性试验
       
　　精密吸取齐墩果酸对照品溶液2 μL，点于硅胶G薄层板上，展开，显色，扫描测定，每隔30 min测定一次斑点峰面积积分值，结果峰面积RSD值为1.60%，表明齐墩果酸在3 h内基本稳定。

　　2.5  加样回收率试验
       
　　取牛膝粉末（40目，50 ℃干燥48 h）约1 g，6份，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加入10.020 mg/mL齐墩果酸对照品溶液1.5 mL,然后加2 mol/L盐酸15 mL，浸泡12 h，其余按“ 2.6.1”项下同法操作，得到6份加样回收供试品溶液。分别精密吸取加样回收供试品溶液4 μL,齐墩果酸对照品溶液4、6 μL，点于同一薄层板上，展开，显色，扫描测定，根据外标两点法，见表1。

　　表1  加样回收率试验（略）

　　Tab.1  Results of recovery test

　　2.6  含量测定［5-7］

　　2.6.1   供试品溶液的制备  取不同程度“泛糖”的牛膝粉末（40目，50 ℃干燥48 h）约2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入2 mol/L盐酸30 mL回流4 h，冷至室温，过滤得滤渣，用蒸馏水洗至中性，60 ℃烘干，于100 mL索氏提取器中加入三氯甲烷，提取至无色，提取液蒸干，残渣用三氯甲烷溶解并转移至25 mL量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

　　2.6.2  不同程度“泛糖”牛膝中齐墩果酸的含量测定  照薄层色谱法（《药典》2005版一部附录VIB）试验，精密吸取各供试品溶液4 μL，点于同一硅胶G薄层板上，并交叉点4 μL、6 μL齐墩果酸的对照品溶液，按上述层析条件展开，显色，扫描测定，用外标法计算不同程度“泛糖”牛膝中齐墩果酸的含量，结果见表2。

　　表2  不同程度“泛糖”牛膝中齐墩果酸的含量（略）

　　Tab.2  Content of oleanolic acid of samples(n=5)

　　3  结论
    　　
　　牛膝“泛糖”前后化学成分的变化研究表明：“泛糖”后牛膝中三萜皂苷的含量降低，皂苷类是牛膝的主要有效成分之一，“泛糖”后牛膝由于皂苷类成分发生变化，可能会引起药效变化，两者之间的相关性有待进一步研究。

【】
  　　［1］ 梁生旺，王静，王淑美，等.牛膝泛糖机制研究［J］.中草药，2003,34（11）:993-996.

　　［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化学出版社，2005：49.

　　［3］ 徐先祥,孔树佳.牛膝皂苷类成分药理作用研究进展［J］.安徽中医学院学报，2005，24（1）：63-64.

　　［4］ 祈乃喜,贾淑萍,郝志芳,等.怀牛膝成分的分离与鉴定［J］.中国药物化学杂志，2005，15（3）：162-166.

　　［5］ 赵培西，王四旺，王剑波.牛膝中齐墩果酸提取工艺研究［J］.陕西中医，2005，26（10）：1099-1101.

　　［6］ 杨朝莲，张运杰.牛膝及其炮制品中齐墩果酸的含量测定研究［J］.中医药导报，2005，11（6）：71-72.

　　［6］ 卢绮雯，李坚，萧鹏，等.HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量［J］.广东药学院学报，2007，23（2）：131-132.