不同种源地何首乌抗氧化作用的比较研究

                           作者：马超，严寒静，唐春萍，房志坚

【摘要】  目的 比较研究不同种源何首乌的抗氧化作用。方法 给小鼠连续40 d皮下注射D?半乳糖制备急性衰老模型，观察5个种源地何首乌水煎液对小鼠血和脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性与丙二醛(MDA)含量的影响。结果 何首乌水煎液能提高衰老模型小鼠血与脑组织的SOD活性,并降低其MDA含量，其作用随种源地不同而不同。结论 何首乌能减轻衰老过程中脂质过氧化反应，有一定的抗氧化作用，不同种源地何首乌的抗氧化作用存在差异。

【关键词】  何首乌；种源地；抗氧化

Abstract:Objective To compare the antioxidant effects of Polygonum multiflorum Thunb from different provenances．Methods The acute aging mice model was established by subcutaneous injection with D?galactose continuously for 40 days，and the activities of SOD and the contents of  malonaldehyde (MDA) in blood and brain after being intragastrically administered with water  decoction of Polygonum multiflorum Thunb from different provenances were observed．Results  Intragastric administration with water decoction of Polygonum multiflorum Thunb could increase SOD activities and decrease the contents of MDA in blood and cerebral tissue of mice；and the effects varied with different provenances of Polygonum multiflorum Thunb．Conclusion Intragastric administration with water decoction of Polygonum multiflorum Thunb could relieve  lipid peroxidation，and had certain anti?oxidant effects, which varied with different provenances of Polygonum multiflorum Thunb.

    Key words:Polygonum multiflorum Thunb; provenance; antioxidant effect

     何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根。具有补肝肾、益筋血、壮筋骨、乌须发的功效，主要含有蒽醌类化合物、2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷类化合物,此外何首乌中还含有大量的卵磷脂和多种微量元素［1］。研究表明何首乌具有较强的抗氧化作用［2］，但何首乌种质资源分布广泛，尚未有对不同种源地何首乌药理作用进行比较的相关报道，本文对5个种源地何首乌的抗氧化作用进行了实验研究。

    1  材料与方法

    1.1  实验药物

    　　不同种源地何首乌由作者本人亲自采集，分别为德庆、井冈山、济源、峨嵋山、田阳种何首乌，经广东药学院房志坚教授鉴定。

    1.2  实验动物

    　　昆明种小鼠，SPF级，合格证号:26?2003A003，由广东省实验动物中心提供。

    1.3  试剂

    　 D?半乳糖（批号：2006?12）系Sigma公司生产，超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(批号：20071129)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(批号：20071123)均由南京建成生物工程研究所生产。

    1.4  仪器

    　　2104天平（上海天平仪器厂），UV?1800型分光光度计（北京瑞利分析仪器厂）。

    1.5  统计学处理

    　　全部计量资料均采用均数±标准差(±s)表示，统计学处理在SPSS11.5软件上进行，两样本均数比较用t检验,各组间比较用方差分析，P＜0.05为差异有显著性。

    1.6  实验方法

   1.6.1  何首乌水煎液的制备   将何首乌粉碎后，用水浸泡2 h，然后水煮1 h，过滤，将滤液浓缩至含生药0.4 g/mL，置4 ℃下保存，供灌胃给药用。

    1.6.2  指标测定  昆明种小鼠84只， 体质量18～22 g。随机分成7组，每组12只，雌雄各半，分别为空白对照组、模型组、每个种源地何首乌各一组。除空白组外，其余动物均颈背部皮下注射D?半乳糖120 mg/kg，每天1次，连续40 d；空白组颈背部皮下注射相同剂量的生理盐水，同时正常组与模型组小鼠灌胃给生理盐水，各种源地何首乌组分别灌胃给相应种源地何首乌水煎液0.4 mg·kg-1·d-1。第40天造模末次给药1 h后，全部动物摘眼球取血，分离血清；迅速取大脑，于电子天平上称重，冰浴下用生理盐水制成10％（φ）组织匀浆，4 ℃ 3 000  r/min离心10  min取上清液。血清与匀浆液置0～4 ℃保存。按试剂盒要求分别测定血清与脑组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量。

    2  结 果

    　　实验动物造模后，模型组小鼠可见毛色逐渐灰暗失去光泽、消瘦、精神欠佳、少动和行动迟缓等衰老体征。灌胃何首乌水煎液的小鼠上述症状均较模型组减轻。与正常对照组比较，模型组动物血清与脑组织的SOD活性明显降低，而MDA含量则显著增加。而灌胃何首乌水煎液能提高衰老模型小鼠血与脑组织的SOD活性及降低其MDA含量，不同种源地其作用有差异。用SPSS11.5统计软件进行方差分析，差异度从大到小依次为田阳、济源、峨嵋山种源何首乌，井冈山种源何首乌抗氧化作用相对于上述3种最接近德庆的抗氧化作用（见表1）。对照该批药材的2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷含量［3］，考察各种源地其含量与所观察的各MDA、SOD值相关性（见表2），可见各观测指标与2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷含量之间的相关性不显著。 表1  不同种源地何首乌水煎液对模型小鼠SOD活性与MDA含量的影响 与空白组比较：△P＜0.05；△△P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。a,b表示差异度，凡有一个相同标记字母的即为差异不显著，凡具有不同标记字母的即为差异显著

　　3  讨 论

    3.1  目前有关何首乌抗衰老药理作用的研究报道很多，抗自由基氧化作用是抗衰老作用很重要的一个方面，但目前尚未见到有对不同种源地何首乌抗自由基氧化作用进行比较的研究。本研究结果表明，给模型小鼠灌胃0.4 mg·kg-1·d-1五个种源地何首乌水煎液能使D?半乳糖所致亚急性衰老小鼠血清和脑组织的MDA有不同程度的下降，并能不同程度提高SOD活力，提示其能够抑制脂质过氧化，提高内源性抗氧化酶活性，能显著清除超氧阴离子自由基和H2O2及活性氧。表明5个种源地何首乌水煎液具有抗氧化作用。表2  各观察指标与2，3，5，4′?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷含量的相关性

    3.2  田阳种源何首乌的归属一直存在争议。刘寿养［4］把田阳种源何首乌定为变种-棱枝何首乌，而植物志把它并入何首乌［5］，但本实验其药效学结果出现了与其他种源地差异极大的情况，并且其抗氧化作用不具有统计学意义，说明田阳种源何首乌抗氧化作用有别于其余种源地，支持把田阳种源何首乌定为变种-棱枝何首乌的结论［3］。

    3.3  2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷是何首乌中具显著生理活性的有效成分，有明显的抗氧化作用 ［6］，因此理论上说其含量的高低可以确定其抗氧化作用的强弱。但如表2所示各药效指标与其含量的相关性并不显著，相关系数偏低，说明其含量高低与本实验结果并无对应关系，究其原因：其一是由于本实验采取给小鼠灌胃何首乌水煎液作为给药组，何首乌水煎液中成分复杂，不只是含有2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷，而且也有人发现水煎液中其他成分也有抗氧化作用，比如多糖［7］；其二是水煎液的温度太高，2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷的稳定性可能受到影响［8］。可见何首乌其水煎液的抗氧化作用强弱与其2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷含量高低无必然相关性。

    3.4  何首乌的药理作用与多方面的因素有关，评价其药理作用应多个因素综合起来考察［9］，不应单以2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷一个指标评价，更不能仅从其2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?0?β?D葡萄糖苷含量高低来判断。

【】
  ［1］ 朱铁英.何首乌的化学成分研究进展［J］.时珍国医国药，2006，17（2）：274-275.

［2］ 宋士军，李芳芳，岳华.何首乌的抗衰老作用研究［J］.河北医科大学学报，2003，24（2）：90-91.

［3］傅军，严寒静，梁从庆，等.不同采集地何首乌的质量评价［J］.广东药学院学报，2006，22（3）：253-263.

［4］刘寿养.何首乌一新变种［J］.云南植物研究，1991，4（13）：390.

［5］中国院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］．北京：科学出版社，1999：102-103．

［6］刘厚淳，陈万生.何首乌水溶性成分2，3，5，4’?四羟基二苯乙烯?2?O?β?D葡萄糖苷的体外抗氧化作用研究［J］.药学实践杂志，2000，18(4)：232-233，237.

［7］许爱霞，张振明，葛斌,等.何首乌多糖对氧自由基及抗氧化酶活性的作用研究［J］.中国药师，2005，8（11）：900-902.

［8］ 刘振丽，宋志前.不同地区制何首乌中二苯乙烯苷含量测定及稳定性考察［J］.中成药，2002，24(9)：684-685.

［9］陈惠玲，高言明，任劲.野生与栽培何首乌中二苯乙烯苷含量测定［J］.贵阳中医学院学报，2007，29（1）:16-17.