宁心复方提取物抗焦虑作用实验研究

              作者：冼嘉雯，陈健文，蒋建敏，李承，刘培庆，李明亚 

【摘要】  目的 探讨宁心复方提取物（简称宁心）的抗焦虑作用及作用机制,为临床提供依据。方法 通过悬尾实验、强迫游泳实验、高台十字迷宫实验评价宁心的抗焦虑活性，并通过宁心对外源性升压物质的影响作用实验探讨宁心的抗焦虑作用机制。结果 宁心416 mg/kg、208 mg/kg、104 mg/kg灌胃给药均有明显的抗焦虑作用；宁心在实验剂量下（288 mg/kg）能抑制外源酪胺引起的升压作用。结论 宁心具有抗焦虑作用，其作用机制可能与抑制血压的升高有关。

【关键词】  抗焦虑;宁心复方提取物;血压

 Research on the anxiolytic effects of Ningxin compound extract

    Abstract:Objective To investigate the anxiolytic effects and the mechanism of action of Ningxin compound extract to provide the evidence for further clinical utilization. Methods The elevated plus-maze test (EPM), suspension tail test, forced-swimming test were conducted in rats to evaluate the anxiolytic effects of Ningxin compound extract. The blood pressure of the rats was monitored to find out the possible mechanism of anxiolytic effects of Ningxin compound extract. Results Ningxin compound extract had obvious anxiolytic effects on rats, with effective inhibition of the rise of blood pressure in combination with exogenous tyramine. Conclusion Ningxin compound extract had obvious anxiolytic effects on rats, the mechanism of action of Ningxin compound extract might be related with inhibition of the rise of blood pressure.

    Key words:anxiolytic effect；Ningxin compound extract；blood pressure

     焦虑是机体预感到将面临不良处境时产生的伴有不愉快感觉的综合情绪［1］。病态的焦虑是指在缺乏相应的客观因素下，出现惶惶不安、坐立不定、精神十分紧张的状态，并伴有心悸、出汗、手抖等自主神经系统症状［2］。目前临床应用的抗焦虑药以西药为主，具有抗焦虑效果外，还存在显著的毒副作用。而中医药焦虑症基于中医的整体观念和辨证施治原则，通常根据临床症状加以施治［3］,可随症状程度加减,从而毒副作用相对较少。宁心是一种由多种中药组成的复方制剂，主要成分有龙骨、丹参、当归、白术、茯神、灵芝等中药组成。本研究采用强迫游泳实验、高台十字迷宫实验、悬尾实验来研究宁心的抗焦虑作用，并通过宁心对外源酪胺诱发高血压反应的影响实验来探讨其抗焦虑作用的机制。

    1  材料

    1.1  主要药品和试剂 

    　　受试药物：宁心复方提取物， Vita Green有限公司提供，批号：HKVC307。棕色粉末状，灌胃给药前以生理盐水溶解，配制成所需浓度溶液。溶媒：0.9%氯化钠注射液，山东长富结晶药业有限公司，批号06020822。阳性对照药：地西泮片，天津力生制药股份有限公司生产，2.5 mg/片，批号：0609005,用氯化钠注射液溶解［4］；酪胺，上海海曲化工有限公司提供。

    　　主要仪器：BL?420E生物机能实验系统，四川成都泰盟科技有限公司；JZ100型张力换能器，量程50 g，北京新航兴科贸业有限公司；PM200?大小鼠高台十字迷宫系统，四川成都泰盟科技有限公司产品。

    1.2  实验动物

    　　SPF级昆明种小鼠，体质量18～22 g，雄性，许可证号：粤检证字2006A018，由广东省医学动物实验中心提供。SPF级SD大鼠，雄性，体质量160～200 g，由中山大学实验动物中心提供，粤监证字：2006A064。

    1.3  药物剂量

    　　剂量设置：根据临床成人拟用药剂量通过体表面积折算，以及前期预试验确定本实验研究剂量为：小鼠低剂量104 mg/kg、中剂量208 mg/kg、高剂量416 mg/kg体质量；大鼠给药剂量为288 mg/kg。阳性对照药：地西泮（安定），剂量1 mg/kg。药物稀释方法、给药途径及体积：取同一批号的各实验所用药品，用生理盐水配成所需浓度的药液。给药途径：灌胃给药，小鼠给药0.2 mL/10 g；大鼠给药1.0 mL/100 g。

    　1.4  　统计学处理

    所有实验数据以（±s）表示。采用SPSS11.0统计软件进行方差分析及组间检验, P<0.05为差异有显著性。

    广东药学院学报，2008，24(6)第6期  冼嘉雯,等.宁心复方提取物抗焦虑作用实验研究

  2  方法与结果

    2.1  宁心抗焦虑试验

    2.1.1  小鼠强迫游泳实验［5］  取小鼠50只。随机分为对照组（生理盐水）、阳性药物地西泮片对照组（1 mg/kg）、受试药宁心高剂量（416 mg/kg）、中剂量（208  mg/kg）、低剂量（104 mg/kg）共5组，每组10只，灌胃给药。每天1次，连续7 d灌胃给药；末次给药前8 h禁食，给药后1 h进行实验。实验前（即第6天）小鼠训练游泳15 min，24 h后测试：将小鼠放入水深10 cm的玻璃缸内（高20 cm，直径14 cm）水温控制25 ℃，每缸１只。放入水中适应2 min后开始观察4 min，记录4 min内小鼠的累积不动时间(停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间)。

    　　结果见表1，与对照组比较，宁心低、中、高剂量都具有明显的抗焦虑作用（P<0.05或P<0.01）。

    2.1.2  小鼠悬尾实验［6］  取小鼠50只。分组如上，灌胃给药。每天1次，连续7 d灌胃给药；末次给药前8 h禁食，给药后1 h进行检测。将小鼠尾部1 cm处用胶布固定于台架边缘，将其倒挂于箱（30 cm×25 cm×15 cm）中，头部离箱底约5 cm，通过BL420E+生物机能实验系统软件显示出小鼠活动曲线。观察记录6 min 内小鼠的不动时间。

    　　结果见表2，与对照组比较，宁心低、中、高剂量都具有明显的抗焦虑作用（P<0.05或P<0.01）。表1  强迫游泳实验结果与对照组比较：*P<0.05,**P<0.01 表2  悬尾实验结果与对照组比较：*P<0.05,**P<0.01 

    2.1.3  小鼠高架十字迷宫实验［7］　  取小鼠50只。分组如上，灌胃给药。每天1次，连续7 d灌胃给药；末次给药前8 h禁食，给药后1 h进行检测。迷宫为不锈钢制的，由2个开放臂和2个封闭臂组成。开放臂为30 cm×5 cm,封闭臂为30 cm×5 cm×15 cm,开放臂和封闭臂交叉处为一个5 cm×5 cm的中央平台,开放臂和封闭臂底部离地面38.5 cm。将小鼠置于迷宫中央，动物的头朝向开放臂, 释放后即开始记录5 min内动物在迷宫中的下述指标:①进入开放臂和封闭臂的总次数(OE+CE)：表示小鼠的运动活力；②进入开放臂次数比例(OE%) ：即开放臂进入次数/(OE+CE)×100 %；③开放臂停留时间比例(OT%)：即开放臂停留时间/(OT+CT)×100 %。具体测试标准按说明书要求进行。

    结果见表3，与对照组比较，宁心低、中、高剂量都具有明显的抗焦虑作用（P<0.05或P<0.01）。

    2.2  宁心对外源酪胺诱发高血压反应的影响

    取SD大鼠24只，随机分为4组，每组6只，分别为：空白对照组（NS）：灌胃给予生理盐水，观察灌胃前后15、30、45、60、90、120、150和180 min血压和心率的变化；单纯宁心（288 mg/kg）组：灌胃给予宁心288 mg/kg，观察给药前与给药后15、30、45、60、90、120、150、180 min血压和心率的变化；酪胺组（15 mg/kg）：通过预实验得酪胺15 mg/kg静脉给药对大鼠血压升高的幅度有15 mmHg（1mmHg=0.133 kPa)以上，此剂量定为实验剂量。记录静脉注射酪胺15 mg/kg前后5、10、15、30、45、60 min血压和心率的变化；宁心+酪胺组（宁心288 mg/kg+酪胺15 mg/kg）：通过单纯宁心给药结果得出宁心对血压作用高峰时间为90 min，因此本组实验首先灌胃给予宁心288 mg/kg，记录给药前后15、30、45、60、90 min的血压、心率，然后立即尾静脉注射给予有效升压剂量酪胺15 mg/kg，连续观察给酪胺后5、10、15、30、45和60 min血压和心率的变化。

    血压测量方法：用乌拉坦(1 000 mg/kg)腹腔注射麻醉后，切开气管，插入气管套管。一侧颈动脉插管并与压力换能器相连检测动脉血压，以BL420E+生物机能实验系统记录血压的变化。

    结果见表4、5，与给药前比较，除30 min时P<0.01，其他时间点P均>0.05，可以认为，单独宁心给药总体情况下不会出现明显的降压效果。宁心联合酪胺组与酪胺组相比，在给酪胺后5、10、15 min这3个时间点上其P<0.05，说明宁心可以抑制外源酪胺所引起的升压作用。表3  宁心对高台十字迷宫实验结果

    　3  讨 论

    　　随着社会的，抑郁和焦虑症的发病率不断增高。焦虑症状的发生一般认为与苯二氮卓受体和GABA、5?羟色胺(5?HT)、去甲肾上腺素(NA)等神经递质及其相关物质有关。抗焦虑药一般是以抑制NA、5?HT的摄取，使突触间隙递质水平升高为作用机理［8］。而抗焦虑中药主要是采取疏肝理气、养心安神为原理，通过疏肝解郁，清火化痰，养心宁胆从而焦虑症［9］，但是由于中药作用机理的复杂性，至今为止具有明显的抗焦虑作用的中药处方尚未探讨出其具体的作用机制。本实验除进行了宁心的药效学研究之外，还初步探讨了宁心抗焦虑作用机制，由于实验条件的限制，没有进一步进行急性毒性试验以及长期性毒性试验的研究。本实验结果提示宁心有明显的抗焦虑作用，为其临床应用和进一步研究提供了理论依据。

【】
  ［1］ 张建军．清心安虑胶囊抗焦虑作用药效学研究和机理探讨［D］．北京中医药大学博士研究生学位，2005:1．

［2］ 李彦冰，耿慧春，杨波，等．中西药治疗焦虑症的研究进展［J］．中医药信息，2004，21(5):7-9．

［3］ 张传儒．老年性焦虑症治疗经验［J］．上海中医药杂志，1999,(1):24-25．

［4］ 韩燕杰，高宝勤.输液泵泵控治疗小儿癫痫配制安定溶液经验点滴［J］．中华护杂志，2006，3(6):576-577．

［5］ NICOLE L, MCDONALD M P, LEE E L.Theα2A?adrenergic receptor plays a protective role in mouse behavioral models of depression and anxiety ［J］．Neuroscience, 2001: 21(13):4875-4882．

［6］ 胡秦，刘新民．神经递质与焦虑动物模型［J］．比较医学杂志，2006，16(10):635-638．

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［8］李端，殷明．药理学［M］．5版．北京：人民卫生出版社，2003：143．

［9］朱晓旭，谢鸣．焦虑症中医药治疗研究现状［J］．北京中医药大学学报，2002, 25(3)：63．