冰片增强5?羟色氨酸抗抑郁作用的研究
作者：王榕乐,谭毓治,刘峰,胡华良
【摘要】 目的 研究冰片对5?羟色氨酸（5?HTP）抗抑郁作用的影响。方法 采用小鼠悬尾试验、大鼠强迫游泳试验，以动物不动的失望时间为指标；采用利血平致小鼠抑郁模型，以眼睑下垂程度和体温为观察指标,评价冰片对5?羟色氨酸抗抑郁作用的影响。结果 冰片可加强5?HTP缩短悬尾及强迫游泳试验中的失望时间；可增强5?HTP对抗由利血平所致的小鼠眼睑下垂和体温下降。结论 冰片可增强5?HTP的抗抑郁作用。
【关键词】 冰片;5?羟色氨酸；抑郁；悬尾试验；强迫游泳试验; 眼睑下垂
Abstract:Objective To study the role of Borneol in enhancing antidepressant effects of 5?hydroxytryptophane(5?HTP).Methods Mouse tail suspension test, rat forced swimming test and reserpine?induced mouse depression model were used to evaluate the role of borneol in enhancing antidepressant effects of 5?hydroxytryptophane(5?HTP).Results Borneol significantly enhanced the effects of 5?HTP to shorten disappointment time in mouse tail suspension test and rat force swimming test and to antagonize the ptosis, hypothermia in mice induced by reserpine.Conclusion Borneol enhances antidepressant effects of 5?hydroxytryptophane.
Key words: borneol,5?hydroxytryptophane , depression, tail suspension test, rat force swimming test
抑郁症（depression）是严重威胁人类健康的常见疾病，也是各类精神疾病中发病率最高的疾病。据世界卫生组织的最新调查表明，全球现在有2～4亿人口正为抑郁症所苦恼。关于抑郁症的发病机制，较为公认的有单胺递质假说，该假说认为中枢神经系统内去甲肾上腺素（NE）、5?羟色胺（serotonin, 5?HT）等单胺递质的减少可导致抑郁症的产生。5?羟色氨酸（5?HTP）是5?HT的前体物质，补充脑内5?羟色氨酸，可间接提高脑内5?HT的浓度。为了提高5?HTP的脑内浓度，增强疗效，将5?羟色氨酸和冰片配成复方制剂，采用多种抑郁症的动物模型观察其药效,现报告如下。
1 实验材料
1.1 实验动物
SPF级NIH小鼠和昆明种小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，雄性，体质量20～22 g，许可证号：SCXK（粤）2003-002，粤监证字2005A011。SPF级SD大白鼠，雄性，体质量160～180 g,由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2003-002，粤监证字2005A010。
1．2 药品及试剂
5?羟色氨酸(5?HTP):由深圳劲创生物技术有限公司提供，产品批号为041028。冰片：广东药学院药房购买。利血平注射液：广东邦民制药厂有限公司生产，产品批号为050309。阿米替林：由常州四药制药有限公司提供，产品批号为KD9149。
2 实验方法
2.1 小鼠悬尾试验［1］
2.1.1 实验分组
84只雄性NIH小鼠,体质量18～22 g,随机分成7组，每组12只，空白对照组每天灌胃给予生理盐水，阿米替林阳性对照组每天灌胃给予阿米替林20 mg/kg，5?HTP低、高剂量组分别每天灌胃给予5?HTP 100 mg/kg、200 mg/kg，5?HTP低剂量+冰片组和5?HTP高剂量+冰片组分别每天灌胃给予100 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片，200 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片,冰片组只给冰片50 mg/kg。连续给药3 d，第4天给药后开始实验。
2.1.2 小鼠不动时间的测定
实验在上午8～12时进行，灌胃给药后30 min，把小鼠尾用胶布贴在木条上，使头离地5 cm，以挡板隔离动物视线，开始时小鼠努力挣脱，以后因无法逃脱而停止挣扎，呈现间歇性不动状态，以连续3 s以上的不动时间为有效不动时间，记录6 min内小鼠累积不动时间。
2.2 大鼠强迫游泳试验
2.2.1 预试
将雄性SD大鼠单个放入水深为15 cm的玻璃圆筒中（高40 cm，直径18 cm），水温25 ℃,水深可稍作调整，以大鼠后足刚可触及筒底又不足以支撑身体为宜。初放入时，大鼠强迫游泳并挣扎向上爬或潜入筒底，２～３ min后活动逐渐减弱，出现间歇性不动状态，且时间越来越长，５～６ min后不动状态的时间占总时间的80％左右，预试15 min以后将大鼠吹干。
2.2.2 实验分组
剔除预试中的不合格者，将合格的70只大白鼠随机分成7组，每组10只，空白对照组每天灌胃给予生理盐水，阿米替林阳性对照组每天灌胃给予阿米替林20 mg/kg，5?HTP低、高剂量组分别每天灌胃给予5?HTP 100 mg/kg、200 mg/kg，5?HTP低剂量+冰片组和5?HTP高剂量+冰片组分别每天灌胃给予100 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片，200 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片， 冰片组只给冰片50 mg/kg。连续给药3 d，第4 天给药后开始实验。
2.2.3 大鼠不动时间的测定
实验在上午8～12时进行，灌胃给药后30 min，在与预试条件完全相同的情况下，把大鼠放入圆筒中，以连续3 s以上的不动时间为有效不动时间，记录５ min内大鼠强迫游泳的累积不动时间。
2.3 利血平所致小鼠抑郁模型(眼睑下垂试验)［2-4］
将雄性昆明种小鼠80 只,随机分成8 组, 正常组不给任何药物,空白对照组每天灌胃给予生理盐水，阿米替林阳性对照组每天灌胃给予阿米替林20 mg/kg，5?HTP低、高剂量组分别每天灌胃给予5?HTP 100 mg/kg、200 mg/kg，5?HTP低剂量+冰片组和5?HTP高剂量+冰片组分别每天灌胃给予100 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片，200 mg/kg 5?HTP+50 mg/kg冰片,冰片组只给冰片50 mg/kg。连续给药7 d ,末次给药30 min后,每只小鼠按2.5 mg/kg 腹腔注射利血平(0.1 mL/ 10 g) ,观察小鼠眼睑下垂情况,准确记录1 h 内的眼睑下垂度和肛门体温,观察自发活动、耳尾颜色及腹泻等情况。按Rubin 分级标准,判断下垂度：0 度: 正常开目;1 度:眼睑下垂1/ 4;2 度:眼睑下垂1/ 2;3 度:眼睑下垂3/ 4;4 度:眼睑完全闭合。
2.4 统计学处理 试验数据用±s 表示，试验中所获试验数据，进行多组均数间的显著性检验采用方差分析（ANOVA），再进行两两比较,以P<0.05为差异有显著性。
3 结果
3.1 小鼠尾悬挂试验
与生理盐水对照组相比，5?HTP低、高剂量组和加冰片的5?HTP低、高剂量组小鼠尾悬挂6 min内的失望时间均显著缩短（P<0.05或 P< 0.01），并呈一定的剂量依赖性。冰片组不能缩短尾悬挂小鼠6 min内的失望时间。加冰片的5?HTP低、高剂量组缩短尾悬挂小鼠6 min内的失望时间比5?HTP低、高剂量组显著增强（P<0.05）。见表1。
表1 冰片和5?羟色氨酸对小鼠强迫悬尾试验失望时间的影响（略）
Tab.1 Effects of borneol and 5?hydroxytryptophane on disappointment time in mouse tail suspension test
与生理盐水组相比:*P<0.05，** P< 0.01; 与等剂量5?HTP组相比: #P<0.05
3.2 大鼠强迫游泳试验
与生理盐水对照组相比，5?HTP低、高剂量组和加冰片的5?HTP低、高剂量组大鼠强迫游泳试验5 min内的失望时间均非常显著缩短（P< 0.001），并呈剂量依赖性。冰片组无明显影响。加冰片加5?HTP低、高剂量组与单用5?HTP低、高剂量组等剂量组比较，加冰片后对大鼠强迫游泳试验5 min内的失望时间进一步显著缩短（分别为P<0.01和P<0.05）。见表2。
3.3 对利血平所致小鼠抑郁模型的影响
小鼠给予利血平(2.5 mg/kg ) 7 d后，出现了明显的上睑下垂、运动不能和体温下降症状，小鼠全部闭眼、倦缩,耳、尾皮肤颜色灰暗，并有腹泻发生,与正常小鼠比较差异有极显著性，说明给正常小鼠腹腔注射利血平后,可以造成抑郁动物模型。
与生理盐水对照组相比，5?HTP低、高剂量组和加冰片的5?HTP低、高剂量组小鼠眼睑下垂程度和体温下降幅度均有显著改善（P<0.05～ P< 0.001），并呈剂量依赖性。单用冰片组小鼠无明显影响。冰片加5?HTP低、高剂量组与单用5?HTP低、高剂量组等剂量组比较，冰片加5?HTP低、高剂量组对抗利血平引起的眼睑下垂和体温下降作用显著增强（P<0.05或P<0.01）。见表3。
表2 冰片和5?HTP对大鼠强迫游泳试验不动时间的影响（略）
Tab.2 Effects of borneol and 5?hydroxytryptophane on immobility time in rat forced swimming test
与生理盐水组相比:*P<0.05，** P< 0.01;与等剂量5?HTP组相比: #P<0.05，## P< 0.01
表3 冰片和5?HTP对利血平所致小鼠眼睑下垂和体温下降的影响（略）
Tab.3 Effects of borneol and 5?hydroxytryptophane on ptosis and hypothermia in reserpine?induced mice depressed model
与生理盐水组相比：*P<0.05，** P< 0.01；与等剂量5?HTP组相比： #P<0.05，## P< 0.01
4 讨论
抑郁症的病理生化基础是人脑内5?羟色胺（serotonin,5?HT）功能不足，浓度低。5?HT在脑内的生物合成过程是：色氨酸（tryptophan，TP）在色氨酸?5?羟化酶的作用下，生成5?羟色氨酸（5?HTP），后者在芳香族L?氨酸脱羧酶(AADC)作用下脱羧形成5?HT。5?HTP是5?HT的前体物质，补充5?HTP可间接提高脑内5?HT的浓度。
早期人们通过化学合成5?HT供人体利用或通过增加L?色氨酸的吸收来达到人体自身5?HT合成量的增加，但由于生产合成过程的不可控性，在产品中夹杂着5?HT的某些衍生物及其它杂质，无形中增加了该类产品的不安全因素。另外由于色氨酸?5?羟化酶的特异性较高，只存在于5?HT能神经元中，且含量少，活性低，是合成5?HT的限制因子。因此通过增加L?色氨酸的吸收来增加自身5?HT的合成量有其局限性。
5?HTP在欧美作为抑郁症的药物一直在使用，其名称为Oxitriptan，在德国、法国、意大利、瑞士等国均有制剂销售［5］。
冰片是龙脑香科植物龙脑香树脂的加工品，或龙脑香的树干经蒸馏冷却而得到的结晶，称“龙脑冰片”或“梅片”；由菊科多年生草本植物艾纳香叶的升华物经加工劈削而成，称“艾片”。现多用松节油、樟脑等，经化学合成而得的冰片称“机片”。冰片具有开窍醒神、引药上行之功效，不仅自身能通过血脑屏障，还能够促进其它药物透过血脑屏障［6］。本研究中，冰片能显著增强5?HTP抗抑郁作用，与不加冰片的5?HTP组比较，冰片加5?HTP组可更显著地缩短小鼠尾悬挂6 min内的失望时间和大鼠游泳5 min内不动时间, 改善利血平所致小鼠眼睑下垂和体温下降症状。单用冰片则无抗抑郁作用，提示冰片的作用可能是促进5?HTP进入脑内，从而增强5?HTP抗抑郁作用。如将冰片和5?HTP研制成复方的抗抑郁症的新药，将会提高疗效，减少5?HTP的用量和不良反应。
5?HTP除具有抗忧郁症外，还被用于减肥、戒瘾、改善睡眠、缓和经前综合征、治疗偏头痛等。冰片能否增强5?HTP在这几方面的疗效，有待进一步研究。
【】
［1］ 李明亚，李娟好，季宁东.石菖蒲几种粗提取物的抗抑郁作用［J］.广东药学院学报，2004，20（4）：141-144.
［2］ 张均田.药理实验方法［M］.北京:北京医科大学协和医科大学联合出版社,1998 ：1062-1064.
［3］ ELA HMAD Y , MAILLET P , LAURENT E, et al.New N?(benzhydryloxyalkyl)?4?(carboxy/carbamoylmethyl) piperidine derivatives with antidepressant activity ［J］.Eur J Med Chem ,1997,32(3): 205-218.
［4］ 钟海波, 潘颖, 孔令东.淫羊藿提取物抗抑郁作用研究［J］.中草药，2005，36（10）：1506.
［5］ James E F Reynolds.Martindale—The extra pharmacopoeia［M］.Thirty?first edition.London： Royal Pharmaceutical Society，1996:328.
［6］ 赵保胜,刘启德.冰片促血脑屏障开放与病理性开放的比较［J］.中药新药与临床药理，2002，13（5）：287.
