正交设计法优选翻白草中总黄酮的提取工艺
【摘要】 ［目的］探讨翻白草中总黄酮的最佳提取工艺.［方法］采用正交设计法以提取物中总黄酮含量为评价指标，以乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数为考察因素，筛选翻白草的最佳提取工艺.应用分光光度仪测定提取物中总黄酮的含量.［结果］ 最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12，提取时间为150min，提取2次，其中乙醇用量为主要影响因素.［结论］所优选的提取工艺合理,操作简便,可行.
【关键词】 黄酮类 提取工艺 植物 药用
ABSTRACT:OBJECTIVETo study the optimum extraction technique of total flavonoids in the Potentilla discolor Bunge.METHODSUsing orthogonal design, total flavonoids in extract was as evaluation index, and ethanol concentration, extraction time, ratio of material to solvent and extration frequency were as inspecting factors to screened the optimum extraction technique, and total flavonoids content in extract was detected by spectrophotography.RESULTSThe optimum extracting conditions were that the ethanol concentration was 700mL/L, ratio of material to solvent 1∶12, extraction time 150min, and extraction process was two times, in which the ethanol dose was important influencing factor.CONCLUSIONThis procedure is convenient, appropriate and feasible.
Key words:flavones;extraction technology;plants, medicinal
翻白草为蔷薇科委陵菜属（Potentilla discolor bge）干燥全草，全草含鞣质，植株各部分均含有黄酮类化合物［1］.它具有抗溃疡、解痉、消炎及降血脂等功能，广泛应用于制药及食品加［2］.本实验对影响翻白草黄酮提取的主要因素进行了正交试验，以黄酮含量为指标，采用方差分析法进行分析，筛选了翻白草的最佳提取工艺，为进一步开发利用翻白草提供了依据.
1 材料
原料为翻白草全草，于2005年6月采集于吉林省延边朝鲜族自治州铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为翻白草正品.芦丁购自药品生物制品检定所;天平为上海精密仪器有限公司产品，REE?52C型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品，紫外分光光度仪为上海精密科学仪器有限公司产品；所用试剂均为AR级.x
【摘要】 ［目的］探讨翻白草中总黄酮的最佳提取工艺.［方法］采用正交设计法以提取物中总黄酮含量为评价指标，以乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数为考察因素，筛选翻白草的最佳提取工艺.应用分光光度仪测定提取物中总黄酮的含量.［结果］ 最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12，提取时间为150min，提取2次，其中乙醇用量为主要影响因素.［结论］所优选的提取工艺合理,操作简便,可行.
【关键词】 黄酮类 提取工艺 植物 药用
Optimization of extraction process of total flavonoids from the Potentilla discolor Bunge by orthogonal design
JIN Quan, LIAN Li?hua， LUO Hui?shan*
(Yanbian University College of Pharmacy, Yanji 133000, Jilin, China)
ABSTRACT:OBJECTIVETo study the optimum extraction technique of total flavonoids in the Potentilla discolor Bunge.METHODSUsing orthogonal design, total flavonoids in extract was as evaluation index, and ethanol concentration, extraction time, ratio of material to solvent and extration frequency were as inspecting factors to screened the optimum extraction technique, and total flavonoids content in extract was detected by spectrophotography.RESULTSThe optimum extracting conditions were that the ethanol concentration was 700mL/L, ratio of material to solvent 1∶12, extraction time 150min, and extraction process was two times, in which the ethanol dose was important influencing factor.CONCLUSIONThis procedure is convenient, appropriate and feasible.
Key words:flavones;extraction technology;plants, medicinal
翻白草为蔷薇科委陵菜属（Potentilla discolor bge）干燥全草，全草含鞣质，植株各部分均含有黄酮类化合物［1］.它具有抗溃疡、解痉、消炎及降血脂等功能，广泛应用于制药及食品加［2］.本实验对影响翻白草黄酮提取的主要因素进行了正交试验，以黄酮含量为指标，采用方差分析法进行分析，筛选了翻白草的最佳提取工艺，为进一步开发利用翻白草提供了依据.
1 材料
原料为翻白草全草，于2005年6月采集于吉林省延边朝鲜族自治州铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为翻白草正品.芦丁购自药品生物制品检定所;天平为上海精密仪器有限公司产品，REE?52C型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品，紫外分光光度仪为上海精密科学仪器有限公司产品；所用试剂均为AR级.
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备及标准曲线的绘制 精密称取105℃条件下干燥至恒质量的芦丁对照品10.0mg，用700mL/L乙醇溶解定容于100mL容量瓶中，即得质量浓度为0.10g/L 的芦丁对照品溶液.精确吸取芦丁对照品溶液0，1，2，3，4，5mL,分别置于25mL容量瓶中，各加入50g/L亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加入100g/L硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，再加入40g/L氢氧化钠溶液10mL，加入700mL/L乙醇至刻度，摇匀，放置15min，于510nm处测定吸光度［3,4］.得回归方程y=7.7457x+0.0009（r=0.9996），芦丁质量浓度在20～50mg/L范围内，与峰面积呈良好的线性关系（图1）.
图1 芦丁标准曲线
2.2 翻白草中总黄酮提取量的测定 精确称取翻白草100g置于锥形瓶中，按比例加入一定量的提取溶剂回流提取总黄酮，在80℃条件下回流提取一定时间，流水冷却后过滤，合并过滤液，定容至100mL，即得总黄酮提取液［5,6］.精确吸取总黄酮提取液1.0mL置于100mL容量瓶中，按标准曲线的要求测定吸光度，通过标准曲线得总黄酮含量.
2.3 翻百草中总黄酮提取工艺的正交试验 主要对乙醇浓度（A）、提取时间（B）、固液比（C）及提取次数（D）等4个因素进行四因素三水平L9(34)正交试验，考察因素和水平见表1，结果见表2及表3.由表2中k1，k2，k3，R分析见，乙醇浓度、提取时间、固液比和提取次数4个因素对总黄酮提取率影响的主次顺序依次为乙醇浓度、提取时间、固液比、提取次数，最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L.表1 因素水平表 表2 正交实验设计及结果表3 方差分析结果
2.4 最佳条件重复性验证试验 为证实上述筛选法提取工艺的稳定性，以优选工艺，重复进行3次实验，测定翻白草总黄酮平均提取量为18.94g/kg,RSD为0.19%，提示该工艺稳定，重复性好.
3 讨论
正交实验结果表明,在乙醇热浸提取翻白草中总黄酮时，各因素对提取量的影响大小依次为乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数,其中乙醇浓度的影响最大.在选定的水平范围内，随着回流温度和固液比的增大,提取量亦提高，但由于本试验中使用的固液比值较大，提取充分，故对翻白草总黄酮提取量的影响较小．从极差分析中可直观见，乙醇提取翻白草总黄酮的最佳工艺条件是A2B3C3D2，即乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12,提取时间为150min,提取2次，以最佳提取工艺测得翻白草中总黄酮含量为189.4g/kg.
【】
［1］ 钟海军.翻白草的化学成分［J］.中草药，2000，31（70）：488.
［2］ 邹俊利.翻白草的研究进展［J］.黑龙江医药科学,2006，29（4）:104.
［3］ 许松姬，韩春姬，许妍姬.轮叶党参降血脂保健饮料中总黄酮的含量测定［J］.延边大学医学学报,2007，30（2）：111.
［4］ 金泉，廉丽花，罗惠善.紫外分光光度法测定翻草中总黄酮的含量［J］.延边大学医学学报,2007，30（4）：262.
［5］ 张彩霞，董相军，胡凤祖.正交试验优选珠芽蓼果实中总黄酮提取工艺［J］.中国药房，2008，19（3）：186.
［6］ 宋秋烨，陈梅，吴启南.淡竹叶中总黄酮提取工艺研究［J］.中国中医药信息杂志,2007，14（3）：46.?
