紫外分光光度法测定翻白草中总黄酮的含量

【摘要】  ［目的］探讨翻百草中总黄酮含量的测定方法.［方法］以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂,利用紫外分光光度计测定翻白草中总黄酮的含量.［结果］最佳检测波长为510nm，芦丁质量浓度在20～50mg/L范围内时，吸收度与质量浓度呈良好的线性关系，回归方程为y=7.7457x+0.0009(r=0.9996)，平均回收率为99.52%，RSD为1.23%.［结论］采用紫外分光光度法测定翻白草中总黄酮的含量简便易行，结果稳定可靠.

【关键词】  黄酮类 分光光度法 紫外线 植物 药用

    ABSTRACT:OBJECTIVETo study assay method of total flavanone content in Potentilla discolor bunge.METHODSWith AlCl3?NaNO2?NaOH as chromogenic agent, total flavanone content of Potentilla discolor bunge is determined by ultraviolet spectrophotometry.RESULTSThe optimal detective wavelength was 510nm, and absorbability and mass concentration was satisfactory linear relationship at the mass concentration of rutin was in 20～50mg/L. The regression equation was y=7.7457x＋0.0009(r=0.9996), and the average recovery rate was 99.52% and RSD was 1.23%.CONCLUSIONUsing ultraviolet spectrophotometry to detect total flavanone content in Potentilla discolor bunge is simple, accurate, and sensitive.

    Key words:flavones;spectrophotometry, altravionlet;plants, medicinal

    翻白草（Potentilla discolor bunge）为蔷薇科植物的干燥全草，含鞣质，植株各部分均含黄酮类化合物［1］，具有降低血脂、抗菌、止泻和增强免疫功能的作用［2］.本研究采用紫外分光光度法对翻白草中总黄酮的含量进行了测定，旨在为翻白草药材及制剂的质量控制提供依据.

    1  材料

    翻白草全草采集于吉林省龙井市铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为正品翻白草；芦丁对照品购自药品生物制品检定所.天平及753型紫外分光光度计均为上海精密科学仪器有限公司产品；REE?52C型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品；旋转薄膜蒸发器为上海亚荣生化仪器厂产品；202型电热鼓风恒温干燥箱为江苏恒丰仪器厂产品.试剂均为AR级.

    2  方法与结果

    2.1  对照品溶液的制备  精确称取在105℃条件下干燥至恒定质量的芦丁标准品10.0mg，置于100mL容量瓶中，加入700mL/L乙醇适量，微热溶解，放冷后再加入700mL/L乙醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.10g/L的芦丁对照品溶液，低温保存，备用.

    2.2  供试品溶液的制备  精确称取翻白草100g，用700mL/L乙醇回流提取，回收溶剂得浸膏.将浸膏用适量水溶解，乙醚脱脂，置于冰箱中冷却，有绿色沉淀产生，将过滤得到的滤液浓缩，干燥得到棕黄色粉末.准确称取已于105℃条件下烘干至恒定质量的黄酮样品20.0mg，用700mL/L乙醇定容至100mL.

    2.3  测定波长的选择  精确量取对照品溶液和供试品溶液各5mL，分别置于25mL容量瓶中，加入50g/L亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加入100g/L硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加入40g/L氢氧化钠溶液10.0mL，再加入水至刻度，摇匀，放置15min，在波长为200～700nm范围内扫描，结果2种溶液均在510nm处有最大吸收，其他成分对测定无干扰.

    2.4  标准曲线的绘制  分别精确吸取芦丁标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于25mL容量瓶中，加入50g/L亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加入100g/L硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加入40g/L氢氧化钠溶液10.0mL，加入700mL/L乙醇至刻度，摇匀，放置15min，进样，于波长为510nm处测定吸收值（用不含芦丁的空白管对照调零）.得回归方程：y=7.7457x+0.0009（r=0.9996），结果表明，测定芦丁质量浓度在20～50mg/L范围内呈良好的线性关系.

    2.5  精确度实验  取对照品溶液于510nm波长处测定吸收值5次.结果示平均吸收值为0.252，RSD为0.54%（n=6），表明该方法精确度良好.

    2.6  稳定性试验  取供试品溶液，于0、10、30、60、90、120min时测定吸收值.结果表明，总黄酮与铝离子形成的红色络合物在1h内稳定，RSD为1.21%（n=6）.

    2.7  重现性试验  精确称取药材样品1.0g，共5份，平行试验，于510nm波长处测定吸收值，结果见RSD为3.03％.

    2.8  加样回收率实验  精确称取于105℃条件下干燥至恒定质量的芦丁对照品100mg，置于100mL容量瓶中，以700mL/L乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，得芦丁贮备液.取已知总黄酮含量的5个批次的样品各0.5g，置于100mL磨口锥形瓶中，加入上述芦丁贮备液10mL，加入700mL/L乙醇30mL，摇匀，测定510nm波长处吸收值，按回归方程进行处理，结果见平均加样回收率为99.52%，RSD为1.23%(表1). 表1  加样回收率实验结果

   2.9  样品的测定  精确称取研碎的样品0.5g，置于100mL磨口锥形瓶中，按照2.2项下方法制备样品供试液，同法平行制备3份.精确吸取供试品溶液5mL，按照2.4项下方法进行操作，在波长为510nm处测定供试液的吸收值，按回归方程进行计算处理，见平均含量为3.23mg，RSD为1.86%.

    3  讨论

    以芦丁为对照品，以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，利用紫外分光光度计对翻白草中总黄酮的含量进行测定的方法具有简便易行及结果稳定可靠等优点，同时还可对单个黄酮成分进行分析测定.

【】
  ［1］ 钟海军.翻白草的化学成分［J］.中草药，2000，31（70）：488.

［2］ 邹俊利.翻白草的研究进展［J］.黑龙江医药，2006，29（4）：104.