纸上斑点法快速分析鉴定胃内容物中的敌敌畏
【关键词】 敌敌畏； 胃液； 纸上斑点法
在化学分析技术之初，纸上斑点法对简单组分的化学物质定性鉴别曾起到积极作用，但随着技术的飞速发展，各种高精密度分析检测仪器的出现，对于简单组分的物质鉴别也习惯应用高精密度检测技术进行分析，这在一定程度上增加了人力物力消耗。使用化学物质的特征显色反应进行有机磷农药鉴别时，胃内容物中的有机磷农药无需使用复杂的分离检测技术进行定性鉴别。2008年对胃内容物中敌敌畏的快速定性检测方法进行探索，为可疑口服敌敌畏急性中毒者提供快速分析鉴定方法。
1 材料与方法
1.1 试剂与标准
苯、丙酮及无水硫酸钠为分析纯，中性层析氧化铝（市售中性层析氧化铝于130 ℃活化3 h，冷却后按6％比例加蒸馏水搅拌均匀后放回瓶内备用），层析用活性碳（层析用颗粒活性碳或酸洗层析用颗粒活性碳20～40目，硫酸煮沸30 min，用去离子水洗至中性，于120 ℃烘12 h），间苯二酚－氢氧化钠混合显色剂（1％间苯二酚乙醇溶液与5％氢氧化钠乙醇溶液等体积混合，用时配制），甲醛硫酸试剂（取40％甲醛0.15 ml，加入3 ml浓硫酸中），敌敌畏标准溶液1 g/L（国家标准物质中心）。
1.2 实验方法
1.2.1 原理
敌敌畏和敌百虫均与间苯二酚－氢氧化钠试液反应显红色，敌敌畏与甲醛硫酸试剂反应显桔红色，敌百虫与甲醛硫酸试剂反应显黄褐色。
1.2.2 样品预处理[1]
1.2.2.1 提取
取胃内容物5 g，另取相应空白样品两份，一份添加敌敌畏标准品10 μg，作阳性对照，另一份作阴性对照。以上样品分别盛于100 ml烧杯内，逐渐加入无水硫酸钠，用玻璃棒搅拌成干沙状。分别转入250 ml具塞锥形瓶中，分别依次加入50 ml和30 ml苯∶丙酮（2∶1），超声萃取15 min，合并两次萃取液备用。
1.2.2.2 净化及浓缩
取50 ml分液漏斗，于底层塞少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠2～3 g、中性层析氧化铝5～10 g、活性碳0.5 g、顶端加5～10 g无水硫酸钠。用苯∶丙酮（2∶1）20 ml淋洗装好的柱子，淋洗液弃去（注意淋洗时勿使柱中无水硫酸钠表层干涸），然后分别将1.2.2.1项下萃取液倒入各自的层析柱中，用层析柱活塞控制流速，以逐滴流出净化液为宜，收集净化液，待提取液流完后，再用20 ml提取溶剂洗脱一次；用旋转蒸发仪于50℃将净化液浓缩至0.5 ml。
1.2.3 显色鉴定
分别用玻璃毛细管取10 μl敌敌畏标准溶液、空白加标液、空白液、样品液点于干净定性滤纸上，待溶剂挥干后，用玻璃毛细管各取10 μl间苯二酚-氢氧化钠混合显色剂点于以上斑点上，60 ℃加热5 min，如敌敌畏标准溶液斑点、空白加标液斑点显红色，而样品液斑点和空白液斑点不显红色，则样品中未含有敌敌畏；如敌敌畏标准溶液斑点、空白加标液斑点和样品液斑点均显红色，空白液斑点不显红色，则样品中可能含有敌敌畏；继续另取10 μl敌敌畏标准溶液、空白加标液、空白液、样品液点于另一张干净定性滤纸上，待溶剂挥干后分别取约10 μl甲醛硫酸试剂点滴于以上斑点上，如敌敌畏标准溶液斑点、空白加标液斑点和样品液斑点均显桔红色，空白斑点不显桔红色，则样品中含有敌敌畏。
2 结果
对20个胃内容物样品进行敌敌畏定性鉴定，使用GA/T 101-1995中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法[1]做定性实验对比，两种方法的检出结果完全一致。实验证明，胃内容物样品经提取浓缩后，体系组分对显色鉴别无干扰，空白背景颜色容易区分辨别，显色灵敏度为5 μg，故本法可用于口服有机磷农药中毒的敌敌畏快速定性鉴定。
3 讨论目前报道的检测有机磷农药的方法很多[2～7]，主要有光谱分析法、色谱法等。但对于口服有机磷农药中毒的敌敌畏定性鉴定来说，如使用高精密度的仪器进行分析检测鉴定，则分析成本相对较高。通常情况下，同时口服多种有机磷农药中毒的可能性极小，故胃内容物中有机磷成分相对简单，使用纸上斑点法即可满足定性鉴定结果的准确度。
敌敌畏的鉴别通常采用薄层色谱法进行定性鉴定，点样与色谱展开均需要耗费大量时间，而且对点样的技术要求也很高，如出现阳性对照结果不可靠时，难以判断是点样操作误差还是样品预处理操作误差所导致，复检需要消耗更多的时间。纸上斑点法在原有基础上省去了费时的点样和色谱展开程序，样品预处理后，仅需数分钟便可快速鉴别出胃内容物中是否含有敌敌畏。
曾有报道过有机磷农药纸上斑点法鉴定[8]，但多用于食品农药残留的检测鉴定，且未涉及到敌敌畏与敌百虫的区分鉴别。本法是否能推广适用于其他样品中敌敌畏的快速鉴定，尚有待于进一步研究。
【文献】
[1]中华人民共和国公安部.GA/T 101-1995.中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法[S].中华人民共和国公共安全行业标准.1995：5-11.
[2]侯芳菲.有机磷及氨基甲酸酯类农药残留检测方法研究进展[J].农业工程技术·农产品加工,2008（2）：32-35.
[3]刘志民.实用毒物分析[M].北京:人民卫生出版社,1984:412.
[4]刘晓颖,吴飞,吴杭.蔬菜中有机磷农药残留的高效液相色谱分析[J].生物学杂志,2004(6):41-42.
[5]杨云,张卓,李攻科.微波辅助萃取/气相色谱-质谱联用分析蔬菜中的有机磷农药[J].色谱,2002(5):390-393.
[6]叶江雷,弓振斌,沈爱斯.茶叶中9种农药残留的毛细管气相色谱法测定[J].分析仪器,2005（2）:20-23.
[7]张洪非,胡清源,王芳,等.烟草中22种有机磷农药残留的检测方法[J].烟草科技,2008(03)：43-48.
[8]曲祖乙，刘靖.食品分析与检验[M].北京:环境出版社,2006：255-256.
