CD44v6、nm23-H1和CEA在大肠癌组织中的表达及其临床意义
【摘要】 目的 探讨大肠癌组织中CD44v6、nm23-H1和癌胚抗原(CEA)的蛋白表达与大肠癌转移的关系。 方法 应用免疫组织化学技术检测CD44v6、nm23-H1和CEA在76例大肠癌组织的蛋白表达水平，并观察它们与临床病理特征的关系。结果 大肠癌组织中CD44v6蛋白的阳性表达与淋巴结转移、Dukes分期的延迟和恶性程度的增加相关；nm23-H1蛋白低表达与远处转移、Dukes分期的延迟相关；CEA蛋白高表达与淋巴结转移、远处转移和浸润深度的增加相关。联合测定CD44v6、nm23-H1、CEA蛋白的表达可明显提高检测大肠癌转移的敏感性和特异性（P<0.05）。 结论 大肠癌组织中CD44v6阳性表达、nm23-H1低表达和CEA高表达与大肠癌的浸润和转移相关，综合分析3个指标，能更准确地判断大肠癌的转移状况。
【关键词】 结直肠癌 免疫组织化学 CD44v6 nm23-H1 CEA
【Abstract】 Objective To investigate the roles of CD44v6, nm23-H1 and CEA expressions in metastasis of colorectal cancer(CRC). Methods The expression of CD44v6, nm23-H1 and CEA both in 76 CRC tissue were studied by using immunohistological technique , to understand the relation of the expressions with pathologic characteristics especially with metastasis. Results Positive expressions of CD44v6 in CRC were associated with the lymph node involvement , Dukes stage and histological differentiation. Lower expression intensity of nm23-H1 in CRC was related to distant metastasis and Dukes stage. Higher expression intensity of CEA in CRC was associated with lymph node involvement, distant metastasis and invasion depth. Analysis of CD44v6, nm23-H1 and CEA together can improve the sensitivity and specificity to evaluate the metastatic potential of CRC(P<0.05). Conclusions The expressions of CD44v6, nm23-H1 and CEA are related to metastasis of CRC positively. We can evaluate metastasis of CRC exactly through analysis of co-expression of CD44v6, nm23-H1 and CEA in CRC
【Key words】 Colorectal cancer Immunohistochemistry CD44v6 Nm23-H1 CEA
大肠癌是常见恶性肿瘤，由于肿瘤转移、复发是大肠癌致死的主要原因，因此对大肠癌转移潜能的有效估计极为重要。在细胞培养和动物实验中已经证实CD44v6是一种转移相关基因，但机制尚不清楚［１］。肿瘤转移抑制基因nm23与大肠癌转移关系的研究结果尚存在争议［2］。血清癌胚抗原(CEA)检测的临床应用主要用于大肠癌患者的预后、疗效的判断以及预测转移、复发方面，具有重要价值。
本研究旨在通过免疫组化方法检测CD44v6、nm23-H1和CEA在人体大肠癌组织和正常大肠黏膜中的蛋白表达差异，并观察它们与临床病理特征尤其是淋巴结转移和远处转移的关系，以探讨3者在大肠癌转移中的作用。
1 临床资料
1.1 一般资料
76例大肠癌组织标本取自2004年3至11月本院肛肠外科的手术切除标本，其中男46例，女30例，平均58.9岁。结肠癌25例，直肠癌51例，淋巴结转移31例，远处转移13例，均经病理检查证实，术前均未经放、化疗，均为离体后0.5h内取材。
1.2 方法
鼠抗人CD44v6、nm23-H1、CEA单克隆抗体由北京中山生物技术有限公司提供，工作液浓度为1：50。Envision 二抗由美国DAKO公司提供。上述组织制成石蜡包埋标本后，采用Envision 2步法染色，阴性对照采用PBS代替一抗。诊断标准：切片中无染色细胞为（-），染色细胞＜细胞总数的25%为（+），26%～50%为（++），>50%为（+++）［3］。
1.3 统计学处理
采用SPSS 10.0统计软件，计数数据采用χ2检验或Fisher精确检验。
2 结果
2.1 CD44v6阳性表达
nm23-H1低表达，CEA高表达，3者并联后检测大肠癌转移的敏感度为97.2%，较之测定单项指标明显提高（P<0.05），串联后检测大肠癌转移的特异度提高到97.4%，与CD44v6或nm23-H1相比有显著性差异（P<0.05）。表1。表1 大肠癌组织中CD44v6与CEA nm23-H1检测与大肠癌转移检测指标无转移组转移组△敏感度(%)特异度(略)注：与CD44v6，nm23-H1，CEA相比，均为?P<0.05；与CD44v6，nm23-H1相比，均为**P<0.05；O CD44v6阳性或CEA>++或nm23-H1≤++；A CD44v6阳性并且CEA>++并且nm23-H1≤++；△包括淋巴结转移和远处转移
2.2 大肠癌组织中CD44v6表达
阳性率在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.05），在Dukes分期C+D组明显高于A+B组（P<0.05），在低分化组明显高于高分化+中分化组（P<0.05）；nm23-H1表达强度在远处转移组明显低于无远处转移组（P<0.05），在Dukes分期C+D组明显低于A+B组（P<0.05）；CEA表达强度在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.05），在远处转移组明显高于无远处转移组(P<0.05)，在T4组明显高于T2组(P<0.05)。见表2。表2 大肠癌组织中CD44v6、nm23-H1和CEA的表达与临床病理特征的关系（略）注：△ 包括++、+++，*与对应组相比，P<0.05，**与T2组相比，P<0.05
3 讨论
粘附分子CD44v6在多种肿瘤的转移中起重要作用。关于CD44v6与大肠癌浸润、转移和预后的关系，许多学者结论不一。Mulder认为肿瘤进展期CD44v6过度表达，可作为独立估计大肠癌浸润、转移和预后的标记物，指导DukesB/C期大肠癌方案的制定［4］。但Ishida报道，CD44v6与大肠癌的分级、分期和生存率无任何关系［5］。本研究表明，大肠癌组织中CD44v6表达阳性率在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.05），在Dukes分期C+D组明显高于A+B组（P<0.05），在低分化组明显高于高分化+中分化组（P<0.05），提示CD44v6可作为评价大肠癌淋巴结转移、Dukes分期和分化程度的有用指标，因此CD44v6的高表达与大肠癌的转移相关。
nm23基因是1988年Steeg等发现的一种肿瘤转移抑制基因。人类基因组中存在两种nm23基因，即nm23-H1和nm23-H2，nm23-H1与肿瘤的转移更为密切［6］。
Oda等报道，检测nm23-H1蛋白表达对预测大肠癌肝转移和淋巴结转移都具有一定意义［7］。但Sarris等认为，nm23-H1表达可能在大肠癌的早期有重要作用，与大肠癌淋巴结转移无关［8］。本研究结果显示，大肠癌组织中nm23-H1表达阳性强度在远处转移组明显低于无远处转移组（P<0.05），在Dukes分期C+D组明显低于Dukes分期A+B组（P<0.05），提示nm23-H1可作为评价大肠癌远处转移和Dukes分期的指标，nm23-H1在大肠癌远处转移过程中发挥重要的负性调节作用，与多数学者的观点一致。
癌胚抗原（CEA）是大肠癌细胞表达的一个重要标志，在大肠癌的复发和转移中起重要作用。
本研究表明大肠癌组织CEA表达强度随着浸润深度的增加而增强，其中T4组明显高于T2组（P<0.05），提示CEA的表达与肿瘤浸润能力有关。报道，肿瘤侵袭缘组织的CEA表达强于肿瘤基底组织，而且多为弥漫性表达，提示CEA高表达与肿瘤侵袭能力相关［9］。本研究还表明，大肠癌组织中CEA表达阳性强度在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.05），在远处转移组明显高于无远处转移组（P<0.05），提示CEA高表达的肿瘤细胞转移能力更强。
研究结果显示，测定CD44v6、nm23-H1、CEA在大肠癌组织中的表达检测大肠癌转移的敏感度分别为59.5%、75.7%、25%，特异度分别为64.1%、51.3%、87.2%，并联检测能明显提高敏感度（与任一单一指标比较，P<0.05），为97.2%。串联检测则能明显提高特异度（与CD44v6，nm23-H1比较，P<0.05），达到97.4%。因此综合分析3个指标，能更准确地判断大肠癌的转移状况，可为大肠癌随访、辅助治疗、判断预后等提供有价值的资料。
【参考文献】
1 Jungling B, Menges M, Goebel R, et al. Expression of CD44v6 has no prognostic value in patients with colorectal cancer.Z-Gastroenterol,2002,40(4):229～233.
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3 陈功，万德森. 结肠直肠癌组织CEA表达及其临床生物学意义. 癌症，2001，20（6）：628～630.
4 Mulder JR, Kruyt PM, Sewnath M, et al. Colorectal cancer prognosis and expression of exon-6 containing CD44 protein.Lancet,1994,344:1470～1472.
5 Ishida T. Immunohistochemical expression of the CD44 variant 6 in colorectal adenocarcinoma. Surg-Today,2000,30(1):28～32.
6 Lizuka N, Oka M, Noma T, et al. Nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA abundance in human hepatocellular carcinoma.Cancer Res,1995,55:6.
7 Oda Y,Naka T,Takeshita M,et al. Comparison of histological changes and changes in nm23 and C-MET expression between primary metastatic sites osteosarcoma a clinicophthologic and immunohistochemical study.Hum Pathol,2000,31(6):709～716.
8 Sarris M, Lee CS. Nm23 protein expression in colorectal carcinoma metastasis in regional lymph node and the liver.Eur J Surg Oncol,2001,27(2):170～174.
9 Teixeira CR, Tanaka S, Haruma K, et al. Carcinoembryonic antigen staining patterns of the invasive tumor margin predict the malignant potential of colorectal carcinoma .Oncology,1994,51:228～233.
