血必净对急性百草枯中毒大鼠MDA SOD和GSH-Px的影响

               作者：杨春燕 陈安宝 段宇珠 胡强 徐晓玲 王刚

【摘要】  目的 通过血必净（XBJ）对急性百草枯（PQ）中毒大鼠丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)影响的实验研究，观察血必净对急性百草枯中毒大鼠是否具有抗氧化的作用。方法 54只SD大鼠随机分为对照组、中毒组和XBJ组，中毒组和XBJ组按120mg/kg百草枯灌胃，2h后XBJ组腹腔注射血必净10ml/kg，对照组和中毒组腹腔注射等体积生理盐水，1次/d。于给药后6h、24h、72h取大鼠眼眶血，比色法检测血清中MDA的含量及SOD、GSH-Px的活力。结果 给药后6h、24h、72h中毒组血清MDA含量高于其他组，以24h升高最明显，同时SOD、GSH-Px水平明显下降；XBJ组较中毒组MDA明显降低，而SOD、GSH-Px明显升高（P＜0.05）。结论 血必净（XBJ）可以明显降低急性百草枯中毒大鼠MDA的生成，并增加SOD、GSH-Px的活力，可使急性百草枯中毒大鼠引起的脂质过氧化损害得到改善，对急性百草枯中毒大鼠具有抗氧化治疗的作用。

【关键词】  血必净 百草枯 中毒 大鼠 抗氧化

【Abstract】 Objective  To observethe possible therapeutic effects of Xuebijing on MDA、SOD and GSH-Px of rats with acute intoxication of paraquat and to observe the possible oxidation-resistant effect. Methods  54 Sprague-Dawley(SD) rats were randomly divided into control group, intoxication group and Xuebijing group. 120 mg/ kg paraquat dissolvent was poured into stomach of rats by intragastric administration in intoxication group and xuebijing group one time. After 2 hours, 10ml/kg Xuebijing was injected by peritoneal injection in Xuebijing group everyday and equal volume normal sodium was injected by peritoneal injection in control group and intoxication group.Then, content of MDA and vigour of SOD、GSH-Px in blood serum were detected by chromatometry after blood was collected from rats? fossa orbitalis at 6-hour, 24-hour and 72-hour after received drugs. Results  Content of MDA was higher in intoxication group compared with other groups after received drugs at 6-hour, 24-hour and 72-hour and was most significant at 24-hour. Meanwhile, vigour of SOD、GSH-Px was significantly decrease. Level of MDA were significantly lower in Xuebijing group compared with intoxication group, but vigour of SOD、GSH-Px was significantly higher than intoxication group(P<0.05). Conclusion  The Xuebijing can significantly decrease production of MDA and increase vigour of SOD、GSH-Px in rats of acute intoxication of paraquat, and it can improve the damage of lipid peroxidation and has oxidation-resistant treatment effect to rats of acute intoxication of paraquat.

　　【Key words】Xuebijing  Paraquat  Intoxication  Sprague-Dawley Rats  Oxidation-resistant   

　　百草枯(paraquat,PQ)，属有机杂环类触灭型除草剂，因速效、价廉而被广泛使用，但随之而来的中毒事件不断发生，人们虽尝试用各种方法治疗其中毒，但至今仍无特效解毒剂，中毒后病死率极高。本实验通过建立急性百草枯中毒大鼠模型，研究血必净（XBJ）对百草枯急性中毒大鼠是否具有抗氧化治疗的作用，为临床治疗急性百草枯中毒提供一定的实验依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物及材料 

　　SD大鼠54只，雌性，体重200～250g，购自昆明医学院动物科，标准喂养。20%百草枯水剂（深圳瑞德丰农药有限公司生产）。血必净注射液（天津红日药业股份有限公司），每支10ml。MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒由南京建成生物工程制品研究所提供。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 动物模型制备 

　　以20%百草枯水剂按120mg/kg灌胃SD大鼠，建立大鼠急性百草枯中毒模型。

　　1.2.2 分组及给药 

　　54只SD大鼠按随机分为对照组、中毒组和XBJ组，每组分别设给药后6h、24h、72h三个时间点，每组每点6只。中毒2h后开始给药，1次/d，直至处死前。给药方法：XBJ腹腔注射，每次剂量为10ml/kg。其余两组腹腔注射10ml/kg生理盐水。

　　1.3 血标本的采集及检测 

　　分别于给药后6h、24h、72h取大鼠眼眶血，分离血清，置于-20℃冰箱保存；用比色法按说明书检测SD大鼠血清中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。

　　1.4 统计学方法 

　　数据采用均数±标准差（x±s）表示。统计学方法使用SPSS 11.5软件统计包进行单因素方差分析或非参数检验。

　　2 结果

　　2.1  给药后6h 

　　中毒组血清MDA较其他组升高，SOD、GSH-Px含量低于其他组（P<0.05），而XBJ组较中毒组血清MDA降低，SOD、GSH-Px升高（P<0.05）（表1）。表1  给药后6h MDA、SOD和GSH-Px检测结果（略）注：与PQ组比较，*P＜0.05

　　2.2 给药后24h 

　　中毒组血清MDA较其他组明显升高，血清SOD、GSH-Px明显下降（P＜0.05），而XBJ组血清MDA较中毒组明显降低，GSH-Px较中毒组明显升高（P＜0.05），SOD较中毒组明显升高（P＜0.05）（表2）。表2  给药后24h MDA、SOD和GSH-Px检测结果（略）注：与PQ组比较，*P＜0.05

　　2.3  给药后72h 

　　中毒组血清MDA仍较其他组明显升高，SOD、GSH-Px明显下降，差异有统计学意义（P<0.05），XBJ组较中毒组MDA明显降低（P<0.05），而SOD、GSH-Px明显升高（P<0.05）（表3）。表3  给药结束后72h MDA、SOD和GSH-Px检测结果（略）注：与PQ组比较，*P<0.05

　　3  讨论

    百草枯(PQ)又名克芜踪、对草快，化学名1,1-二甲基-4,4-二氯二吡啶阳离子盐，是目前使用广泛的有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂，对人畜具有较强毒性，成人口服致死量约2～6g，大鼠经口LD50为112～150mg/kg。因为目前尚无特效解毒剂，中毒后病死率可高达50%～87.8%，幸存者常遗留严重的肺纤维化［1］。PQ作为一种受体，进入体内经过单电子还原形成自由基，然后与分子氧反应，生成联吡啶阳离子和超氧阴离子，后者歧化形成H2O2，再形成高活性氧自由基，引起细胞膜脂质过氧化，造成组织细胞氧化性损伤，引起多器官功能障碍(MODS)［2，3］，由于肺泡细胞对百草枯具有主动摄取和蓄积特性，故各脏器中以肺组织分布最多，存留时间也较久，肺损伤最为突出［4，5］。血必净（XBJ）是由红花、赤芍、川芎、丹参、当归等组成的中药制剂，其有效成分为红花黄色素A、川芎嗪、丹参素、阿魏酸、芍药苷等，具有清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应，增加SOD及GSH-Px活性，抗氧化性损伤的作用［6，7］，而且还有稳定细胞膜结构，调节免疫及炎性介质，降低内毒素，改善微循环，保护血管内皮细胞的作用［8，9］。MDA是氧自由基攻击细胞膜中的多不饱和脂肪酸，激发连锁反应，引发脂质过氧化反应后产生的一系列脂质过氧化物的降解产物，它引起细胞代谢及功能障碍，MDA的含量可反映机体受自由基攻击后脂质过氧化及细胞损伤的程度［10］。SOD是体内催化歧化反应的一种抗氧化保护酶，此酶能清除超氧阴离子（O2-），保护细胞免受损伤。GSH-Px是体内的一种抗氧化保护酶，能迅速清除H2O2，减轻氧自由基对组织细胞的损伤。SOD、GSH-Px对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要的作用，两者共同作用能有效地阻止组织细胞过氧化的损伤。正常情况下,机体内自由基的产生与清除保持着动态平衡［11］。

    本研究结果表明，PQ中毒组MDA明显升高（以24h升高最明显）、SOD和GSH-Px水平明显下降，XBJ组较中毒组MDA明显降低、SOD和GSH-Px明显升高，提示血必净可对抗PQ中毒所致的过氧化损伤，增强机体抗氧化的能力,抑制脂质过氧化，对急性百草枯中毒大鼠脂质过氧化反应具有一定的保护作用，这可能为临床综合救治百草枯中毒提供了新的方法和实验依据。

【】
  　　1 Yamashita M, Yamashita M, Ando Y. A long term follow up of lung function in survivors of paraquat poisoning. Hum Exp Toxicol,2000,19:99～103.

　　2 Tomita M, Okuyama T, Hidaka K. Changes in mRNAs of in duciblenitric oxide synthase and interleukin -1 beta in the liver, kidney and lung tissues of rats acutely exposed to paraquat. Leg Med (Tokyo),1999,1(3):127.

　　3 王素德,丁超,胡晓华，等.血液灌流救治急性百草枯中毒的临床观察.中华内科杂志,2004,43（7）：538.

　　4 Ito S, Kudo K, Imamura T, et al. Detection of drugs and poisons in postmortem tissues-determination of paraquat in tissues of rabbits buried underground. Nippon Hoigoku Zasshi,1997,51(2):83.

　　5 刘会芳,赵燕燕.百草枯中毒机制及中药治疗探索.时珍国医药,2007,18（10）:2425～2426.

　　6 雪琳.SIRS和MODS防治新对策的实验研究—血必净的药效学观察.危重病急救医学,1997,9(12):720～722.

　　7 曹书华,王今达.血必净对感染性多器官功能障碍综合征大鼠组织及内皮损伤保护作用的研究.中国危重病急救医学,2002,14(8):489～491.

　　8 梁显泉,李志军,刘红栓,等.血必净注射液治疗脓毒症42例.中国中西医结合急救杂志,2005,12(4):251～252.

　　9 李铁刚，张嵘.血必净治疗百草枯中毒的病例分析.实用药物与临床，2007，10(3)：159～160.

　　10 Karakashev P. Paraquat- induced lipid peroxidation and injuryin Ehrlich ascites tumor cells. Veoplasma,2000,47(2):122～124.

　　11 刘丽娜，赵金垣，陈莉，等.茶多酚对急性百草枯中毒大鼠治疗作用的实验研究.中华劳动卫生职业病杂志，2000，18（3）：158～160.