非酒精性脂肪肝患者血清脂联素及TNF-α的研究

                   作者：王强　于小妹　胡勤辛　叶雄伟　翁秀妹　于澎

【摘要】  　　目的　探讨脂联素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与非酒精性脂肪肝的关系。方法　采用放免试剂测定非酒精性脂肪肝组和对照组的脂联素及TNF-α，采用SPSS统计软件进行比较，并分析与其他常规指标的相关性。结果　非酒精性脂肪肝组的血清脂联素（5.05±4.47）μg/ml低于对照组 (8.15±6.48) μg/ml，差异有统计学意义（t=3.56, P＜0.05）；而其TNF-α（1.93±1.09）ng/ml高于对照组 (1.28±0.82) ng/ml，差异有统计学意义（t=－4.51, P＜0.05），脂联素与空腹胰岛素及BMI负相关(r分别＝－0.26, －0.24，P均＜0.05), TNF-α与Lnγ-GT正相关(r=0.23，P＜0.05)。结论　非酒精性脂肪肝的发生可能与脂联素及肿瘤坏死因子-α的异常有一定的关系。

【关键词】  非酒精性脂肪肝 脂联素 肿瘤坏死因子-α

　　Ａｂｓｔｒａｃｔ   Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ   To investigate serum adiponectin and TNF-α in patients with nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods   Serum adiponectin and TNF-α were tested by RIA kits. Difference between two groups and correlation with other routine data were analyzed by SPSS.  Results  Serum adiponectin level was significantly lower in patient with NAFLD than in control [(5.05±4.47）μg/ml vs (8.15±6.48) μg/ml, t=3.56,P<0.05], while TNF-α was significantly higher than that of control [(1.93±1.09) ng/ml vs (1.28±0.82) ng/ml, t=－4.51, P< 0.05]. Serum adiponectin was negatively correlated with serum fasting insulin and BMI(r=－0.26, －0.24, P＜0.05)，while TNF-α was positively correlated with  Lnγ-GT(r=0.23, P＜0.05).  Conclusion  Abnormal of adiponectin and TNF-α may be connected to the pathogenesis of NAFLD.

　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ  nonalcoholic fatty liver disease;　adiponectin;　TNF-α

　　随着我国的，人们日常饮食结构和生活方式的转变，非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease ,NAFLD）的发病率呈逐年上升的趋势。脂肪组织分泌数种生物活性蛋白,或称adipokines,调节肝脏和外周糖脂代谢,包括瘦素(leptin)，肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α TNF-α), 抵抗素(resistin), 和脂联素(adiponectin)等。近年来对adipokines的研究日益重视，本次研究检测NAFLD患者的血清脂联素和TNF-α，观察其在NAFLD发病的作用。报道如下。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　随机抽取2006年6月至2007年4月在浙江体检的人群，NAFLD组 99例，其中男性63例，女性36例，年龄（46.17±11.95）岁， NAFLD的诊断符合中华肝脏病杂志2003年发表的非酒精性脂肪性肝病诊断标准[1]，排除有过心血管事件者、肾功能异常者、进行降血脂及减肥者。选择同期76例体检者作为对照组，均为B超排除脂肪肝，肝功能无异常，无病毒性肝炎，无饮酒史或饮酒折合乙醇量每周＜40g的体检人群，其中男性43例，女性33例，年龄（42.49±12.15）岁。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＜0.05 ）。

　　1.2　方法　行腹部B超检查，当日清晨空腹抽取静脉血，3000 rpm/min 离心10min，分离血清，-70℃保存。血清脂联素、TNF-α、胰岛素均采用放免试剂，脂联素试剂由美国 Linco公司 ，TNF-α试剂由解放军总医院科技开发中心放免所生产，胰岛素为原子高科股份有限公司生产，按照试剂说明测定，其他常规生化检测项目在AU2700生化仪上检测。其他检测指标包括丙氨酸氨基转移酶（alanine am aminotransferase ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase AST）、γ-谷氨酰基转移酶（γ-Gtataml,transferase γ-GT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、甘油三酯（tigligceride TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、葡萄糖（glucose,GLU）等。胰岛素抵抗指数（insulin resistance index，HOMA-IR） = 空腹血糖×空腹胰岛素/ 22.5，体重指数（body mass index，BMI）=体重（kg）/身高(cm)2。

　　1.3　统计学方法　采用SPSS 11.0软件处理。计量资料采用均值±标准差（■）表示。计量资料采用t检验分析；γ-GT用对数转换结果；采用偏相关分析分析相关性。设Ｐ＜0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　两组患者的脂联素、TNF-α、HOMA-IR、 BMI、Lnγ-GT、ALT、AST、ALP组结果比较见表1

　　由表1可知，与对照组相比，NAFLD组的血清脂联素水平显著低于对照组，差异有统计学意义（t=3.56,P＜0.05 ）；而血清TNF-α、HOMA-IR、BMI水平显著高于对照组，差异有统计学意义（t分别=－4.51、－3.14、－8.95,P均＜0.05）；NAFLD组的ALT、AST、Lnγ-GT均升高，差异均有统计学意义（t分别=－5.42、－3.77、－3.78，P均＜0.05）；ALP两组比较，差异无统计学意义(t=－0.77，P＞0.05)；

　　2.2　脂联素、TNF-α与其它监测指标的相关性分析　脂联素与胰岛素负相关（r=－0.26,P＜0.05）, 控制年龄、BMI后，与胰岛素仍呈负相关（r=－0.21，P＜0.05）；脂联素与BMI负相关（r=－0.24 ,P＜0.05）, 控制年龄、HOMA-IR后，脂联素与BMI仍呈负相关（r=－0.23，P＜0.05）；脂联素与AST负相关(r=－0.23, P＜0.05), 但控制年龄，BMI、HOMA-IR后，脂联素与AST无相关(P＞0.05)。脂联素与其它指标未见相关。

　　TNF-α与Lnγ-GT正相关（r=0.23，P＜0.05），控制年龄、BMI、HOMA后，TNF-α与Lnγ-GT仍呈正相关（r=0.19，P＜0.05），TNF-α与其它指标未见相关。

　　3　讨论

　　有资料显示,在排除其他肝病后,NAFLD 通常是无症状转氨酶升高的最主要原因，约占90 ％；其发病率在不同国家也各有不同,约为10 ％～24 ％；在肥胖症患者中发病率则高达57.5 ％～74 ％；儿童发病率约2.6 ％，肥胖儿童高达22.5％～52.8 ％[2]。范建高等[3]调查上海市成年人脂肪肝的发病率为17.29％，其中92.43％为NAFLD 。由于准确的诊断需要肝脏活检，目前也缺乏统一的诊断标准，非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis, NASH） 的发病率的调查难度较大,美国人群的NASH的发病率大约是3％。NAFLD至今尚无有效的治疗手段，对于NAFLD的防治已经不仅是一个医学问题，更是一个社会问题。

　　数个研究发现脂肪肝患者血清TNF-α升高[4,5]，TNF-α干扰胰岛素的信号传导,促进脂肪变性,可能在NASH的发病机制中扮演促炎作用。与TNF-α相反,脂联素有抗脂效应,能减轻肝脏的脂肪堆积,脂联素还有抗炎效应,如抑制NF-κB的活化和抑制巨噬细胞功能，保护脂肪肝的炎症进展和细胞损伤(坏死炎症改变)。脂联素和TNF-α在胰岛素敏感性和炎症方面具有不同的效应,两者的平衡对于NASH的发病有重要作用。

    　　共有213人参加了在韩国进行的一项研究，其中NAFLD患者75人。调整了年龄、BMI、HOMA 后，仅在女性中发现脂联素水平和NAFLD负相关（r=－0.22，P＝0.008），可能是参与实验的男性较少，不足以发现差异。血清脂联素和血清ALT、γ-GT负相关，调整了年龄、BMI、HOMA（稳态分析模型）后，负相关仍有显著意义[6]。

　　本次研究实验结果显示，NAFLD组的血清TNF-α增高，而脂联素降低，与报道类似[4，7]。脂联素与肝脏酶类未见相关，与Hui报道的一致[7]。除ALP外, NAFLD组的ALT、AST、Lnγ-GT均高于对照组，TNF-α与Lnγ-GT正相关，提示TNF-α有一定的促炎作用。脂联素在一定程度上是一种依赖于糖浓度的胰岛素促泌剂，通过抑制胰岛素在低糖环境下的胰岛素分泌和促进高糖时的胰岛素分泌, 从而起到对胰岛β细胞的保护作用[8]。NAFLD与胰岛素抵抗关系密切，本次研究的结果显示，血清脂联素与胰岛素显著负相关，提示脂联素可能影响到胰岛β细胞。

　　本次研究选择的NAFLD组绝大部分是单纯性脂肪肝,以轻到中度为主,重度脂肪肝只占2例,肝酶大部分在范围内。如能选取一些NASH病人加入研究，分析脂联素和TNF-α与脂肪变性程度、炎症、肝酶之间的相关性，结果将更有意义。

　　有研究显示，ob/ob鼠脂肪肝局部及血中TNF-α增高, 输入TNF-α抗体可改善肝脏脂肪浸润, 降低血清ALT水平, 证明了TNF-α对肝脏的损害作用[9]。动物试验显示，给予四氯化碳一周两次，共12周，与野生型老鼠相比，脂联素基因敲除老鼠TGF-β1和结缔组织生长因子表达加强，肝脏纤维化程度增加，在给予四氯化碳前给野生型老鼠注射脂联素可防止其肝脏纤维化[10]。Xu A等 [11]使用重组的脂联素可显著减轻患有酒精性脂肪肝小鼠的肝脏肿大和脂肪变性,减轻炎症程度和降低血清ALT。实验发现脂联素能升高肉毒碱脂酰基转移酶-Ⅰ的活性，增强肝脏脂肪酸氧化，降低脂肪酸合成过程中两种关键酶（乙酰辅酶A羧化酶和脂肪酸合成酶）的活性，抑制肝脏TNF-α的生成。脂联素亦能有效改善患NAFLD的ob/ob小鼠的肝脏肿大，脂肪变性和ALT异常，抑制肝脏TNF-α的生成。

　　由此可见，降低血液中TNF-α水平，增高脂联素水平，可能对NAFLD的有一定帮助，也为人类NAFLD治疗提供了新的思路和方法。

【参考文献】
  １ 中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒 精性脂肪性肝病诊断标准[S].中华肝脏病杂志，2003，11（2）:71.

2 Angulo P. Nonalcoholic fatty liver disease[J]. N Engl J Med. 2002, 346(16):1221-1231.

3 范建高，朱军，李新建, 等.上海市成人脂肪肝患病率及其危险因素流行病学调查[J].中华肝脏病杂志，2005，13（2）: 83－88.

4 Chu CJ, Lu RH, Wang SS, et al. Risk factors associated withnon-alcoholic fatty liver disease in Chinese patients and the role of tumor necrosis factor-alpha[J]. Hepatogastroente-rology, 2007, 54(79):2099-2102.

5 Jarrar MH, Baranova A, Collantes R,et al. Adipokines and cytokines in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Aliment Pharmacol Ther,2008,27(5):412-421.

6 Kim SG, Kim HY, Seo JA, et al. Relationship between serumadiponectin concentration, pulse wave velocity and nonal- coholic fatty liver disease[J]. Eur J Endocrinol,2005,152(2): 225-231.

7 Hui JM, Hodge A, Farrell GC,et al. Beyond insulin resistance in NASH: TNF-alpha or adiponectin[J]? Hepatology,2004,40 (1):46-54.

8 宁光, 顾卫琼, 徐敏, 等.脂联素：从胰岛素抵抗到胰岛β细 胞功能[J].中华内分泌代谢杂志, 2004,20(4)：114-115.

9 Li Z, Yang S, Lin H, et al. Probiotics and antibodies to TNF inhibit inflammatory activity and improve nonalcoholic fatty liver disease[J]. Hepatology, 2003 ,37(2):343-350.

10 Kamada Y, Tamura S, Kiso S, et al. Enhanced carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in micelacking adipone- ctin[J]. Gastroenterology, 2003, 125(6):1796-1807.

11 Xu A, Wang Y, Keshaw H ,et al. The fat-derived hormone adiponectin alleviates alcoholic and nonalcoholic fatty liver diseases in mice[J]. J Clin Invest , 2003 , 112(1):91-100.