慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪血栓素 B2、6 - 酮 - 前列腺素F1α与心功能的变化及其相关性研究

                           作者：许文玉 王伟 刘蕾 于永新 

【摘要】  目的：探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪血中血栓素 B2、6-酮-前列腺素 F1α、TNF -α浓度与心功能等指标的变化及其相关性。方法：采用病证结合的方法即动物左冠状动脉前降支第一间隔支起始部远端放置 Ameroid 缩窄环的方法复制慢性心肌缺血血瘀证模型。小型猪随机分为假手术组、模型组。应用心脏超声心动图测定心功能和心室重构；应用放免法测定血中血栓素 B2（Thromboxane B2，TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α，6-K-PGF1α）和 TNF -α的浓度。结果：小型猪慢性心肌缺血后，血中 TXB2、6-K-PGF1α、TNF -α浓度与假手术组相比都发生了明显变化。结论：TXB2 与 EDV 呈负相关、与 TNF -α呈正相关，TNF -α表达水平与 EDV 、ESV 均呈负相关，随心功能的恶化，其 表达量增高。说明血小板的激活程度与心功能有关，心功能越差，血小板的活性越高，血栓形成的危险性就越大，尤其易造成微血栓。

【关键词】  心肌缺血；血瘀证；心功能；TNF -α；血栓素 B2；6-酮-前列腺素 F1α

    〔Abstract  Objective  To  inquire  into  the  change  of  the  concentration  of  TXB2,  6-Keto-PGFlα,  TNF -α  in  blood  plasma  of  miniature  pig  which  was  the  syndrome  of  blood  stasis  model  made  by  chronic  myocardial  ischemia  and  the  relation  between  them.    Methods     We  adopted  the  syndrome  of  blood  stasis  model  of  chronic  myocardial  ischemia  by  laying  the  Ameroid  condensation  ring  surrounded  the  originate  region  of  the  first  septum  of  animals'  front-fall  branch  of  left  coronary  artery  as  the  integrate  illness  with  syndrome.  And  the  pigs  were  divided  into  uncontrolled  group  and  model  group  randomly.  We  tested  the  cardiac  function  and  ventricular  cordis  re-establishment  by  ultrasonic  cardiogram,  and  tested  the  value  of  TXB2,  6-Keto-PGFlα  and  TNF -α  by   radioimmunoassay  in  blood  plasma.    Results     The  concentration  of  TXB2,  6-Keto-PGFlα,  TNF - α  all  obviously  changed  compared  with  model  group  made  by  chronic  myocardial  ischemia  of  miniature pig. Conclusion  The  value  of  TXB2  and  EDV  presented  negative  correlation,  it  and  that  of  TNF -α  presented  positive  correlation. The  express  of  TNF -α  and  EDV,  ESV  presented  negative  correlation,  and  with  the  deteriorate  of  cardiac  function, it  increased.  These  showed  that  the  level  of  activation  of  Plt  were related  with  cardiac  function.  The  worse  of cardiac  function,  the  higher  of  the  activity  of  Plt,  and  the  more  of  dangerous  of  the  thrombosis,  and  easier  of mini-thrombosis  especially.

    〔Key  Words〕    Heart  Muscle  Iischemia;  The  Syndrome  of  Blood  Stasis;  Cardiac  Function;  TNF -α;  TXB2;   6-Keto-PGFlα

        目前认为，许多心血管疾病的发生与 PGI2/TXA2 平衡失调有关。凡倾向于血栓形成的因素均与 TXA2 生成增多或 PGI2 减少有关，是“血瘀”病理的重要标志。通常情况下，二者保持着平衡，相互拮抗、相互协调，这对于维持微循环血流和细胞许多功能方面均起着重要的作用。

    TNF -α[1]是参与心室重塑的最为密切的细胞因子之一，而且随心功能的恶化，血中 TNF -α的浓度明显升高。但有关 TXB2、6-K-PGF1α水平与心功能、TNF -α相关性的报道很少。本实验主要探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中血栓素 B2（Thromboxane B2, TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6- keto-PGF1α, 6-K-PGF1α）、TNF -α的浓度与心功能等指标的变化及其相关性。

    1    材料与方法

    1.1    动物与分组    动物为农业大学育种健康中华小型猪，体重 25 kg 左右，月龄 6~10 个月，雌雄不限。随机分为假手术组和模型组，每组 6 只。

    1.2    材料、试剂与仪器    内径 2.75 mm 的 Ameroid 缩窄环（Research Instrument SW, USA）；安尔碘，上海利康消毒高科技有限公司，批号：20050808；盐酸氯胺酮注射液，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：KH050302；TXB2、6-K-PGF1α、TNF -α，放免试剂盒：北京华英生物技术研究所；超声诊断仪，惠普 Agilent sonos 5500。

    1.3    方法    猪右侧卧位，左侧第 4 肋间前外侧切口，逐层进胸，注意保护左肺，剪开心包，以无损伤卵圆钳夹住上提左心耳，暴露冠状动脉的左回旋支，剪开此处的心外膜，在近左前降支分离左回旋支起始部表面的脂肪组织，游离出左回旋支长约 1 cm，避免损伤伴行的冠状静脉，用两线平移牵引法将冠状动脉的左回旋支与 Ameroid 环的缺槽平行对齐，立即将两者同时做相反方向的运动，迅速将其套入直径 2.75 mm 的 Ameroid 环内[2]。缝合心包，放置胸腔闭式引流管，逐层关胸。假手术组动物不放置 Ameroid 环，其他操作均与模型组一致。

    1.4    心功能的测定    采用二维、M 型及多普勒超声心动图，检测左室舒张末容积（End-diastolic volume, EDV），左室收缩末容积（End-systolic volume, ESV）、射血分数（EF）、短轴缩短率（FS）、每搏输出量（SV）、E/A 等指标。

    1.5    TXB2、6-K-PGF1α、TNF -α的测定    颈部前腔静脉采血 6 mL，3 mL 采用 EDTANa2 - 消炎痛抗凝，另外 3 mL 不加抗凝剂，4 ℃，3 500 r/min，离心 25 min，收集上清，分装后 -80℃保存，血浆用于检测 TXB2、6-K-PGF1α，血清用于检测 TNF -α。样品在室温复溶后，采用放免法检测。操作严格按照放免试剂盒说明书。

    1.6    统计学处理    应用 SPSS 10.0 统计软件包。多组间比较采用方差分析，两组间比较采用SNK 法。相关分析采用线性回归方法。

    2    结    果

    2.1    心功能的变化    术后模型组 4 周、8 周 ESV 和 EDV 值与同期假手术组相比有显著差异（P < 0.05），SV、EF、E/A 比均无明显的变化，提示心功能仍处于代偿期。表 1。

    2.2    TNF -α浓度的变化    模型组术后 4 周和 8 周 TNF -α浓度与同期假手术组相比显著增高，有极显著差异（P < 0.01）。表 2。

    2.3    血浆 6-K-PGF1α、TX B2 浓度变化    术后 8 周模型组 6-K-PGF1α、TXB2 浓度与同期假手术组相比显著增高，有显著差异（P < 0.05）。表 3。

    2.4    相关性分析    将 ESV、EDV、 SV、EF、E/A 和 TNF -α浓度与 6-K-PGF1α、TXB2 浓度进行相关性分析，结果表明，EDV 与 TXB2 呈负相关（r = -0.488，P < 0.05），TNF -α与 TXB2 呈正相关（r = 0.636，P < 0.05）。TNF -α与 EDV 、ESV 呈负相关（r = -0.586，P < 0.05；r = -0.557，P < 0.05）。

    3    讨    论

    目前认为，许多心血管疾病的发生与 PGI2 / TXA2 平衡失调有关。凡倾向于血栓形成的因素均与TXA2 生成增多或 PGI2 减少有关，是“血瘀”病理的重要标志。

    血栓素（Thromboxane, TXA2）、前列环素（Prostacyclin, PGI2）均为花生四烯酸的代谢物，是前列腺素（Prostaglandins, PG）中生物活性最强的一对，PGI2 可舒张血管及抗血小板聚集、防止血栓形成；TXA2 可使血管痉挛、促进血小板聚集和血栓形成。通常情况下，二者保持着平衡，相互拮抗、相互协调，这对于维持微循环血流和细胞许多功能方面均起着重要的作用。由于血栓素 A2 和前列环素在循环中极不稳定，目前很难测定，通常采用测定它们的代谢物 TXB2 和 6-K-PGF1α水平来反映血栓素A2 和 PGI2 水平。6-K-PGF1α和 TXB2 能间接反映血小板和血管内皮细胞的功能状况。

    心脏既是 TNF -α作用的靶器官，也是其生物合成的场所。心肌组织缺氧可促使心肌组织合成 TNF -α[3-6]。实验证明[1]，TNF -α是参与心室重塑的最为密切的细胞因子之一，而且是随心功能的恶化，血中 TNF -α的浓度明显升高。但有关 TXB2、6-K-PGF1α水平与心功能、TNF -α相关性的报道很少。本实验主要探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中血栓素 TXB2、6-K-PGF1α、TNF -α浓度与心功能等指标的变化及其相关性。

    本实验结果显示，慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中 TXB2、6-K-PGF1α、TNF -α浓度和心功能等指标与假手术组相比都发生了明显变化；TXB2 与 EDV 呈负相关、与 TNF -α呈正相关，TNF -α表达水平与 EDV 、ESV 均呈负相关，随心功能的恶化，其表达量增高。说明血小板的激活程度与心功能有关，心功能越差，血小板的活性越高，血栓形成的危险性就越大，尤其易造成微血栓。提示血小板的激活指标可以作为反映心功能状态的指标之一。

【】
  〔1〕王先梅, 杨丽霞. 肿瘤坏死因子α和基质金属蛋白酶家族与左室重构的关系〔J〕. 中华内科杂志, 2004, 11(43):828-831

〔2〕Cohn JN, Ferrari R, Sharpe N, et al. Cardiac remodeling-concepts and clinical implications : a consensus paper from an international forum on cardiac remodeling〔J〕. J Am Coll Cardiol, 2000, 35:569-582

〔3〕Irwin MW, Mak S, Mann DL, et al. Tissue expression and immunolo calization of tumor necrosis factor 2 αin postinfarction dysfunctional myocardium〔J〕. Circulation, 1999, 99:1492-1498

〔4〕Pfeffer JM, Pfeffer MA, Fisbein MC, et al. Myocardial infarct and ventricular function in rats〔J〕. Circ Res, 1979, 44: 503-512

〔5〕Tyagi SC, Matsubara L, Weber KT. Direct extraction and estimation of collagenase activity by zymography in microquantities of rat myocardium and uterus〔J〕. Clin Biochem, 1993, 26:191-198