SLE 和 PSS 患者的自身免疫抗体检测及临床价值

                      作者：宁克勤 艾辉 谢妮 张莉 李卓成

【摘要】  目的：探讨自身免疫抗体 ANA、ENA 多肽抗体及抗 ds-DNA 对系统性红斑狼疮（SLE）和原发性干燥综合征（PSS）的诊断价值。方法：检测 110 例 SLE 和 PSS 患者血清，ANA 采用间接免疫荧光法，抗 ENA 抗体用免疫印迹法，ds-DNA 用免疫胶体金技术检测。结果：SLE 患者 ANA 阳性率最高（90.0%），PSS 患者抗 SSA 阳性率最高（80.3%），两组患者中抗 Sel-70 阳性率最低，分别为 1.9% 和 1.8%。结论：自身免疫性疾病患者体内常存在有一种或多种高效价的自身抗体，SLE 和 SS 患者各有特异性抗体存在，联合检测多种自身免疫抗体，对临床诊断有重要意义。

【关键词】  自身免疫抗体；系统性红斑狼疮；原发性干燥综合征

    〔Abstract〕    Objective     To  investigation  the  significance  of  autoimmune antibodies  ANA,  anti-ENA  antibody,  ds-DNA  antibody  in  systemic  lupus  erythematosus  (SLE)  and  primary  Sjogren's  syndrome  (PSS).    Methods  To  detect  110  serum  samples  of  SLE  and  PSS  patients.  ANA  was  detected  by  immunofluorescence  assay,   anti-ENA  antibody  was  detected  by  immunoblot  method,  ds-DNA  was  detected  by  colloidal  gold  method.   Results   The  positive  rate  of  ANA  was  the  highest  (90.0%)  in  the  SLE  patients,  the  positive  rate  of  anti-SSA  was  the  highest  (80.3%)  in  the  PSS  patients,  while  the  positive  rate  of  antiScl-70  was  lower  in  the  both,  they  were  1.9%  and  1.8%  respectively.    Conclusion     There  were  more  than  one  autoimmune  antibodies  in  patient's   serum  of  autoimmune  diseases.  Characteristic  antibody  exists  in  the  LSE  and  PSS.  Simultaneously  detection  manifold  autoimmune  antibody  was  important  to  clinical  diagnosis.

   〔Key  Words〕    Autoimmune  Antibody;  Systemic  Lupus  Erythematosus;  Primary  Sjogren's  Syndrome

    自身免疫性疾病是指机体的免疫效应细胞或免疫效应分子，针对自身组织或细胞产生的一系列病理性免疫应答反应，导致自身组织器官损伤的一大类疾病，其发病机制十分复杂，临床表现多变。系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）和干燥综合征（sjogren's  syndrome,  SS）是临床上较为常见的两种自身免疫性疾病[1，2]，SLE 免疫发病机理是 T S 细胞缺陷，B 细胞功能亢进，产生大量自身抗体，导致Ⅱ型（主要是抗自身淋巴细胞，红细胞和血小板等细胞毒型抗体）及Ⅲ型（主要是 DNA -抗 DNA 免疫复合物）变态反应，主要损害血管、肾脏、皮肤和关节等，SLE 患者血清中有多种自身抗体。SS 以外分泌腺高度淋巴细胞浸润为特征，早期侵害泪腺和唾液腺，患者血清丙种球蛋白增多，血清出现多种自身抗体。近年生物化学和免疫学检测技术迅速，自身免疫抗体检测已广泛应用于临床，自身免疫性疾病病人血循环中存在多种自身抗体，其中抗核抗体（ANA）、抗双链脱氧核糖核酸（抗 ds-DNA）、抗核提取物抗体（抗 ENA）3 项联检为临床对自身免疫性疾病的诊断、及预后提供了重要依据。我们对 110 例自身免疫性疾病病人的血清进行了 ANA、抗 ds-DNA、抗 ENA 的检测，并对这些自身抗体与自身免疫性疾病各疾病的关系进行了分析，现报道如下。

    1    资料与方法

    1.1    一般资料

    所选病例为 2003 年 2 月至 2006 年 1 月在我院门诊或病房住院治疗的患者，符合 2002 年国际风湿病学会修订的风湿病诊断（分类）标准，其中 SLE 患者 54 例，PSS 患者 56 例，共 110 例，病程 1~20 年，女性 104 例，男性 6 例，年龄 16~68 岁，平均年龄 46 岁。另取 20 名健康体检人员血清作对照。

    1.2    检测方法

    1.2.1    ANA 检测    用欧蒙公司提供的抗核抗体（ANA）马赛克间接免疫荧光法检测试剂盒，用HEp-2 细胞和猴肝细胞印片包被，血清按 1:100 稀释，出现特异清晰的荧光核型（核均质型，核颗粒型，核仁型等）可判断为阳性，1:100 以上稀释度阳性者为阳性。

    1.2.2    ENA 多肽抗体检测    采用欧蒙公司提供的 ENA 抗体谱欧蒙斑点法（EUROASSAY）检测试剂盒，膜条上包被有 nRNA/Sm，Sm，SSA，SSB，Scl-70，Jo-1 靶抗原，严格按说明书操作，反应区出现明显的蓝紫色条带为阳性，根据膜条上各抗原带着色判定结果。

    1.2.3    抗 ds-DNA 抗体    采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术，用南京军区福州总院全军医学检验中心提供的抗 ds-DNA 抗体快速检测试剂盒，按说明书操作，以观察孔内出现可见淡红色圆点为阳性。

    1.3    统计学处理

    用 SPSS 11.0 统计软件分析资料，数据的各种率比较采用检验。

    2.1    ANA 和 ds-DNA 检测结果

    54 例 SLE 患者中，ANA 阳性率最高（90.0%），ds-DNA 阳性率 50.0%；56 例 PSS 患者的 ANA 和ds-DNA 阳性率分别为 67.9% 和 30.4%；对照组的结果均为阴性。结果见表 1。

    2.2    ENA 多肽检测结果

    LLE 患者的 SS-A 抗体阳性率最高 46.3%，其次为 Sm 抗体和 U1-nRNP 抗体，分别为 40.7% 和 38.9%，而且 Sm 阳性常伴抗 SS-A 阳性；PSS 患者的 SS-A 抗体阳性率最高，为 80.3%，其次是 SS-B 抗体 39.3%；两组患者的 Scl-70 和 Jo-1 的阳性率最低。结果见表 2。

    3    讨    论

    自身免疫性疾病的免疫学特征是患者血液中存在有一种或多种自身免疫抗体，高效价的自身免疫抗体是确诊该疾病的重要指标，且以抗核抗体（ANA）为主。ANA 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，其抗原位点是核酸、组蛋白、非组蛋白、磷脂和各种蛋白酶等多种物质，除细胞核外，细胞质和细胞器中也普遍存在。其所对应的抗原可分为盐水可提取性核抗原、不溶性核抗原和细胞浆抗原，本文作者的 ANA 检测采用人上皮细胞（HEp-2）和灵长类肝脏冰冻组织切片两种基质联合检测，比较荧光模式使抗体预分型成为可能，同时灵长类肝脏组织切片扩充了可检测到自身抗体的范围。

    目前 ANA 主要用于风湿病的筛查，是诊断风湿病的主要指标，其敏感性非常高，但特异性较差，多种自身免疫疾病存在有 ANA 抗体。患者组的ANA 检出率为 79.1%，SLE 组与 SS 组分别为 90.0% 和 67.9%，与报道一致[3]。ANA 在 SLE 的诊断中具有十分重要的意义，我们的检测结果显示，SLE 患者的 ANA 滴度在 1:320 以上占 98%，并且病情活动期患者抗体的滴度更高，可达 1:1280 以上；SS 患者的滴度多在 1:320 以下，占 80%。抗 ds-DNA 抗体的靶抗原是细胞核中的 DNA 双螺旋结构，抗 ds-DNA 抗体主要见于 SLE，目前被列入 SLE 的诊断标准，是 SLE 最重要的诊断标志之一[4]，抗 ds-DNA 与其相应自身抗体形成的免疫复合物可导致皮下组织、肾脏和其它器官的组织损伤，该抗体滴度与疾病的活动呈正相关，抗 ds-DNA 伴抗 Sm 抗体出现，则是 SLE 的特异性标志，本文作者进行检测所统计的 SLE 患者抗 ds-DNA 的阳性率为 50%，SS 患者的阳性率为 30.4%，但 SLE 患者常伴有 Sm 抗体的阳性，Sm 抗体的阳性率为 40.7%，SS 患者 Sm 抗体阳性率为 0%；抗 U1-nRNP 抗体是以抗核内的核糖蛋白（nRNP）得名，此抗体在多种结缔组织病可出现，是区分结缔组织病与非结缔组织病的重要依据[1]，文中 SLE 比 SS 的检出率高；SS-A 和 SS-B 蛋白是同属于核糖核蛋白部分的两个核抗原，在 SS 患者中由于大量淋巴细胞浸润呈灶性，其主要是 CD4+ 的 T 细胞，CD45 RO+ 表型，表达αβ- T 细胞受体，表明 B 细胞和 T 细胞功能亢进，HLA-DR 和 HLA-DQ 的共同作用与抗 SS-A 及抗 SS-B 抗体的形成有关[5]，抗 SS-A 和抗 SS-B 主要在干燥综合征中检出， 抗 SS-A 的敏感性比抗 SS-B 高，但抗 SS-B 比抗 SS-A 特异性高，如两者同时出现则为 SS 的诊断依据，本文作者检测的 SS 患者抗 SS-A 的检出率为 80.3%，阳性率远高于其它抗体。

    我们的研究表明，SLE 患者和 SS 患者血清均存在多种自身抗体，因此，寻找高敏感性，高特异性的自身抗体对 SLE 和 SS 的早期诊断、早期有重要意义。我们的研究结果显示抗 ds-DNA 及抗 SS-A，抗 SS-B 在 SLE 和 SS 患者中的阳性率、特异性与文献报道相一致[6，7]，但我们的 ANA 敏感性更高。国内外关于自身抗体与疾病活动性的关系目前文献报道不一[8，9]，我们的研究结果显示 ANA，抗 ds-DNA 与疾病活动呈显著相关，在疾病活动期阳性率及滴度显著升高，可作为病情评价和观察治疗的指标。

    综上所述，对自身免疫性疾病患者进行 ANA，抗 ds-DNA 及 ENA 多肽抗体的联合检测，并结合临床分析检测结果，可为自身免疫性疾病的诊断、分类、疗效观察和预后判断提供重要依据。

【文献】
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