HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量
【关键词】 原酸
复方胆通是临床常用的急慢性胆囊炎，胆管炎，胆囊、胆管结石并感染，胆囊术后综合征，胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆、解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄草、穿心莲、大黄组成。方中君药茵陈主含6，7?二甲氧基香豆素、绿原酸等成分[1]。本文建立了测定复方胆通片中茵陈的绿原酸含量的 HPLC法，为评价该制剂中茵陈的质量指标提供依据。
1 仪器与试药
HP1100高效液相色谱仪（Aglient公司产品，包括在线脱气机，四元泵，柱温箱，VWD紫外检测器，3D化学工作站）。分析天平1/100000（日本产）。乙腈为色谱纯，水为三蒸水；磷酸为分析纯。绿原酸标准品（药品生物检定所，批号：0753?2000111供含量测定用）。复方胆通片（广东信宜市制药厂生产，批号：040102 043102 040502）。
2 方法与条件
2.1 色谱条件 Hypersil BDS C18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）,检测波长327nm, 柱温30℃，进样量20μl,流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脱，程序见表1。色谱图见图1、2、3。表1 梯度洗脱情况
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取一定量的绿原酸对照品，用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95定容，制备成每毫升中含绿原酸1mg的标准液备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取1.000g样品于10ml容量瓶中，用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95溶解并稀释至刻度，超声提取30min，取出，过0.45μm滤膜，放4℃冰箱备用。
2.2.3 阴性对照液的制备 按处方中药味的比例，自配不含茵陈的群药，按其工艺制成阴性对照，再按供试品溶液的制备方法制备并测定。结果阴性对照液在与绿原酸对照品相同保留时间处无色谱峰，故认为无干扰。
2.3 线性关系考察 将绿原酸对照品溶液用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95稀释，依次配制成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156mg·ml-1 的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液20μl注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，含量(X)为横坐标作图，得标准曲线。回归方程为Y=38.389X-28.043，r =0.99992,结果表明在0.1562～0.500 mg·ml-1范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
取同一供试品溶液, 重复进样5次, 每次20μl，测定峰面积积分平均值为2500.20,RSD为 1.07%。
2.5 稳定性试验
取待测样品溶液,分别于0、1、3、5、8h进样20μl,结果表明供试品中绿原酸在8h内稳定, RSD1.08 %。
2.6 重复性试验
精密称取一定量的同批样品5份,按2.2.2项下供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,测得平均含量为0.4018 mg·g-1, RSD2%(n=5)， 结果表明mg·g-1此法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的同批样品5份,精确加入绿原酸对照品,按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,结果见表2。表2 加样回收率试验结果
2.8 样品测定
取样品溶液各20μl,以上述色谱条件,测定3批样品,测其峰面积用回归方程计算含量，结果见表3。表3 样品含量测定结果
3 讨论
3.1 提取液的选定 我们分别用甲醇、乙腈和不同比例的流动相提取，结果表明用初始流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95提取最完全，故选用此提取液。
3.2 波长的选择 经紫外扫描，在280nm和327nm都有吸收，试验表明在327nm处绿原酸峰面积最大，分离度较好，且与报道[2]一致，故选327nm。
3.3 色谱柱的选择 我们分别用Hypersil BDS C18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）和YWG C18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm），结果显示用Hypersil BDS C18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）绿原酸出峰时间适中，分离度较好，故选用此色谱柱。
3.4 含量的差别 从上述各表可以看出，虽是同一厂家的产品，但不同批号间含量的差别较大，可能与茵陈的产地、采收时间有关。所以，为控制中成药复方胆通片的质量，应建立从原材料采购到工艺生产的一整套质量标准。
从以上实验看出， HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量，精确度高，重复性好，在0.1562～0.500 mg·ml-1范围内线性关系良好.可作为复方胆通片中茵陈质量指标控制的一个方法。
2007年2月靳国印等：HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量第1期2007年2月河北北方学院学报（医学版）第1期
【参考文献】
1 郑汉臣，蔡少青. 药用植物学与生药学/[M/]. 北京：人民卫生出版社, 2003.422
2 白雪梅，吴建翎，罗强, 等. HPLC法测定四产地金银花中绿原酸的含量/[J/]. 河北北方学院学报, 2004，21(5):30?31
